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间充质干细胞端粒酶催化亚基 RT-qPCR方法的建立 2025年 催化亚基 (TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个反应体系内使用双色荧光探针进行多重定量PCR反应,建立RT-qPCR探针法。应用该法对人间充质干细胞中是否表达TERT基因来间接判断细胞中是否存在端粒酶活性。结果:该方法可稳定特异地检测到阳性对照细胞293T/17的TERT基因,Ct平均值为23.96,RSD为1.5%。内参基因GAPDH均可以正常检出,Ct平均值为14.13,RSD为1.3%。阴性对照细胞MRC-5内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为12.81,RSD为0.46%,TERT基因未检出,该细胞端粒酶活性为阴性。人间充质干细胞HMSC内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为13.01,RSD为3.8%,TERT基因未检出,人间充质干细胞HMSC的端粒酶活性为阴性。结论:本研究建立的RT-qPCR探针法重复性好,特异性高,能够准确检测端粒酶阳性细胞催化亚基 mRNA的转录。可用于间充质干细胞的端粒酶活性分析,间接评估间充质干细胞成瘤性风险。关键词：端粒酶催化亚基 端粒酶活性 干细胞 成瘤性 蛋白磷酸酶4催化亚基 在肿瘤进展中的作用 2024年 催化亚基 (protein phosphatase catalytic 4,PP4C)与不同的调节亚基 相结合组成多聚体的形式存在并发挥功能。PP4C主要参与包括细胞葡萄糖代谢、细胞信号传导通路、DNA损伤反应、细胞周期、细胞增殖和肿瘤发生、迁移等多种细胞生物学过程。近年来,随着对PP4C的研究越来越广泛,已证明其在多种恶性肿瘤的发展和进展中起重要作用,有望成为肿瘤生物标志物和肿瘤治疗的靶标。本文就PP4C参与多种细胞生物学过程及其在肿瘤的发生和进展过程中的作用进行综述。关键词：细胞周期 细胞增殖 肿瘤进展 丙酮酸脱氢酶磷酸酶催化亚基 1在恶性肿瘤中作用机制的研究进展 2024年 催化亚基 1(PDP1)在恶性肿瘤中作用机制的研究进展。关键词：恶性肿瘤 生物信息学技术分析人结直肠癌中蛋白磷酸酶2A催化亚基 α(PPP2CA)表达与患者预后及免疫浸润的关系 2024年 催化亚基 α(PPP2CA)在结直肠癌(CRC)中表达水平与患者预后及免疫浸润的关系,进一步了解CRC发生和进展中的相关机制。方法基于基因芯片数据库Oncomine和肿瘤免疫评估资源(TIMER)数据库分析在CRC组织和正常组织中PPP2CA表达水平的差异性;基于阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析门户(UALCAN)和基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析PPP2CA的表达水平对CRC患者预后的影响;基于LinkedOmics平台构建PPP2CA的共表达网络并进行基因本体论(GO)富集分析和京东基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析;基于TIMER和GEPIA数据库分析PPP2CA与免疫浸润之间的相关性。基于c-BioPortal平台分析结肠腺癌(COAD)中PPP2CA的基因突变情况。结果与正常结直肠组织相比,在CRC组织中PPP2CA表达下调。高表达水平的PPP2CA预示着更好的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。在COAD中,PPP2CA的表达水平与包括CD8^(+)T细胞、中性粒细胞和树突状细胞在内的免疫浸润细胞呈正相关。而某些免疫细胞标志物,包括B细胞的CD19和CD38、M1巨噬细胞的一氧化氮合酶2(NOS2)、M2巨噬细胞的精氨酸酶1(Arg1)和甘露糖受体C1(MRC1)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的人类白细胞抗原G(HLA-G)和CD80、单核细胞的CD14和IgG Fc段受体Ⅲa(FCGR3A),却显示出不同的PPP2CA相关免疫浸润模式:即PPP2CA表达水平与COAD和直肠腺癌(READ)中的B细胞、巨噬细胞、单核细胞、TAM、1型辅助T(Th1)细胞、Th2细胞、调节性T细胞、衰竭T细胞和中性粒细胞均显著相关。结论PPP2CA在CRC组织表达水平下调,并且与免疫浸润密切相关。一种端粒酶催化亚基 TERT表达量检测试剂盒及其检测方法 催化亚基 TERT表达量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因的RT‑PCR引物及探针、端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因特异性的逆转录引物、阳性对照质控品和阴...蛋白磷酸激酶PP2A催化亚基 与微囊藻毒素MC-LR结合位点的应用 催化亚基 与微囊藻毒素MC‑LR结合位点的应用，属于生物医药领域。本发明蛋白磷酸激酶PP2A催化亚基 第243位亮氨酸和/或第269位半胱氨酸作为微囊藻毒素MC‑LR结合位点的应用，或者该第24...蛋白质磷酸酶4催化亚基 调控乙型肝炎病毒X蛋白水平及生物学功能 2023年 催化亚基 (protein phosphatase 4 catalytic subunit,PP4C)对乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)在蛋白质水平的调控及生物学功能的影响,为乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关性肝癌提供潜在治疗靶点。方法通过免疫共沉淀(co-immunopreciptation,Co-IP)与GST pull-down试验验证HBx与PP4C在体内与体外的相互作用。采用Lipofectamine 3000试剂转染PP4C过表达真核质粒检测PP4C对HBx在蛋白质水平的影响,并用蛋白质合成抑制剂环己酮亚胺(cycloheximide,CHX)处理过表达PP4C的肝癌细胞,Western blot检测HBx半衰期变化。磷酸化试验检测PP4C对HBx磷酸化水平的影响。CCK8增殖、细胞划痕、Matrigel侵袭小室试验检测PP4C对HBx生物学功能的影响。结果Co-IP与GST pull-down试验证实HBx与PP4C在肝癌细胞内存在相互作用,在体外也存在相互作用。肝癌细胞中过表达PP4C可提高HBx蛋白水平,并明显延长HBx半衰期。磷酸化试验证实在肝癌细胞中过表达PP4C可降低HBx丝氨酸磷酸化水平。PP4C过表达对肝癌细胞的增殖没有影响,但是促进肝癌细胞的迁移与侵袭能力。结论HBx与PP4C的相互作用可提高HBx稳定性,最终促进肝癌细胞的迁移与侵袭,其机制与PP4C降低HBx丝氨酸磷酸化水平有关。本研究为发现HBx致病新机制提供理论依据,以PP4C和HBx蛋白相互作用为靶标,有望为HBV感染相关肝脏疾病的治疗提供有益思路。关键词：HBX 去磷酸化 禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基 GLS2异源表达体系的建立 2023年 催化亚基 GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基 GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBacGP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFPTEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside, DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside, DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基 GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2提取的去污剂DDAO。关键词：禾谷镰孢菌 催化亚基 去污剂 磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基 α通过调控跨膜受体蛋白1对子宫内膜癌病人中性粒细胞的影响 被引量：1 2023年 催化亚基 α(PIK3CA)基因通过调控跨膜受体蛋白1(Notch1)的表达对子宫内膜癌病人血中性粒细胞的影响。方法选择2020年3月至2021年9月在海南医学院第一附属医院接受治疗的50例子宫内膜癌病人(病例组)和50例健康女性(对照组)为分析对象。检测病例组和实验组血清中中性粒细胞(NE)、淋巴细胞(LY)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT),计算NLR指数(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数)。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测PIK3CA和Notch1的相对表达量。选取人原髓细胞白血病细胞/全反式维甲酸细胞(HL-60/ATRA细胞),在不同时间下进行培养,验证PIK3CA通过Notch1对NE的影响。结果病例组病人NE、LY、PLT指标以及NLR指数为(6.03±0.40)×10^(9)/L、(2.15±0.31)×10^(9)/L、(257.40±37.51)×10^(9)/L、(3.69±0.41)分别高于对照组的(5.13±0.50)×10^(9)/L、(1.68±0.16)×10^(9)/L、(202.10±23.39)×10^(9)/L、(2.44±0.39),病例组病人Hb水平为(138.72±13.79)g/L低于对照组Hb水平(149.52±10.65)g/L,说明子宫内膜癌病人炎症微环境异常。病例组PIK3CA和Notch1相对表达量为(3.351±0.496)、(3.467±0.440)高于对照组的(1.581±0.275)、(1.519±0.279)。HL-60/ATRA细胞培养实验验证了PIK3CA高表达促进Notch1高表达进而抑制NE的增殖。结论在NE中,Notch1表达量随着PIK3CA表达量升高而升高,NE细胞活力逐渐下降,初步证实了PIK3CA基因通过调控Notch1的表达对子宫内膜癌中NE产生影响。关键词：子宫内膜肿瘤 中性粒细胞 非吸烟女性肺腺癌组织中DNA聚合酶β表达及血清DNA聚合酶δ催化亚基 4 mRNA水平与临床病理特点和预后的关系分析 2023年 催化亚基 (POLD)4 mRNA水平与临床病理特点和预后的关系。方法选取2018年3月—2021年3月在浙江金华广福医院进行手术治疗的114例非吸烟女性肺腺癌患者为研究对象,提取其病理组织和癌旁组织进行DNA POLβ检测,另选取同期在该院体检的57例女性健康志愿者为健康对照组,通过RT-PCR方法检测肺腺癌患者与健康对照组女性的血清POLD4 mRNA水平,分析DNA POLβ、血清POLD4 mRNA水平与患者临床病理特点和预后的关系。结果非吸烟女性肺腺癌组织中DNA POLβ阳性率(78.95%)高于癌旁组织(2.63%),差异有统计学意义(χ^(2)=134.312,P<0.05)。非吸烟女性肺腺癌患者血清POLD4 mRNA水平(1.02±0.15)低于健康对照女性(1.57±0.18),差异有统计学意义(t=21.116,P<0.05)。TNM为Ⅲ期、有淋巴结转移的非吸烟女性肺腺癌患者DNA POLβ阳性表达率高于TNM为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TNM为Ⅲ期、有淋巴结转移的非吸烟女性肺腺癌患者血清POLD4 mRNA水平低于TNM为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DNA POLβ表达阳性的非吸烟女性肺腺癌患者术后1年复发率高于DNA POLβ表达阴性的患者,血清POLD4 mRNA高水平的非吸烟女性肺腺癌患者术后1年复发率低于血清POLD4 mRNA低水平的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic分析结果显示,TNM分期为Ⅲ期(OR=2.782,95%CI为1.160~6.667)、有淋巴结转移(OR=2.762,95%CI为1.229~6.206)及DNA POLβ阳性表达(OR=3.062,95%CI为1.190~7.875)是非吸烟女性肺腺癌患者术后复发的危险因素(均P<0.05),血清POLD4 mRNA高水平(OR=0.393,95%CI为0.187~0.825)是非吸烟女性肺腺癌患者术后复发的保护因素(P<0.05)。结论非吸烟女性肺腺癌组织中DNA POLβ呈高表达,血清POLD4 mRNA呈低表达,且与患者临床病理特征和�关键词：肺腺癌 非吸烟 女性 DNA聚合酶Β
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