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四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性被引量：5: 2012年; 背景:越来越多的新型材料被纳入口腔领域应用的视野,对生物材料进行生物相容性评价是进入临床试验前的重点研究内容。目的:通过体外细胞毒性实验评价自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的生物相容性。方法:根据ISO标准,采用四甲基偶氮唑盐比色法行体外细胞毒性实验,阴性对照组为DMEM培养液,阳性对照组为含有0.1%苯酚的DMEM培养液,实验组为受试材料的浸提液。测试人牙龈成纤维细胞在牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料浸提液中培养1,3,5d的吸光度值,观察细胞形态变化,计算细胞相对增殖率,判断细胞毒性的级别。结果与结论:实验组体外细胞毒性实验吸光度值均与阴性对照组差异无显著性意义(P>0.05),与阳性对照组差异有显著性意义(P<0.01),自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料体外细胞毒性级别为0～1级,初步认为其具有良好的生物相容性。; 李瑞王青山王云赵蒙蒙王爽张荣和; 关键词：牙修复体纳米羟基磷灰石四甲基偶氮唑盐法体外细胞毒性

羧基荧光素乙酰乙酸与四甲基偶氮唑盐法检测人脐血间充质干细胞刺激脾淋巴细胞增殖作用的比较: 2009年; 目的比较羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）与四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测人脐血间充质干细胞（CB-MSCs）和神经分化的CB-MSCs对大鼠脾淋巴细胞（LCs）刺激作用的敏感程度。方法分别制备刺激细胞和LCs,将刺激细胞分为4组：1.CB-MSCs组;2.Dif-CB-HSCs组：脐血间充质干细胞培养7d后维甲酸（RA）处理4d诱导其神经分化细胞;3.SH-SY5Y组：人源SH-SY5Y细胞（人神经母细胞瘤细胞系）作为阳性对照组;4.Auto-LC组：自体大鼠LCs作为阴性对照组。分别将上述各组刺激细胞与LCs进行混合培养,分别通过酶标仪（MTT法）,流式细胞术（CFSE法）检测LCs增殖情况（n=3）。结果CFSE法和MTT法检测结果均显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组刺激LCs增殖明显弱于阳性对照组（SH-SY5Y细胞组）,但CFSE法检测结果显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组细胞刺激LCs增殖百分率高于阴性对照Auto-LC组,MTT法检测结果显示,CB-MSCs组和Dif-CB-MSCs组的吸光度（A）值稍低于阴性对照Auto-LC组。结论CFSE法比MTT法能更加客观地...; 孙海梅季凤清王屹王丹妮赵春礼杨慧; 关键词：脐血间充质干细胞淋巴细胞增殖

四甲基偶氮唑盐法观察三水白虎汤含药血清对体外培养关节炎滑膜细胞增殖的影响被引量：10: 2007年; 目的:采用四甲基偶氮唑盐比色法观察三水白虎汤含药血清对体外培养热痹证型关节炎滑膜细胞增殖的影响。方法:实验于2006-06/09在南方医科大学动物实验中心、中医药学院实验中心及组织工程研究中心完成。实验材料:滑膜组织取自南方医院脊柱外科收治的膝骨关节炎患者(女,68岁)行膝关节镜手术中切除的滑膜组织,患者知情同意。SPF级45d龄Wistar雌性大鼠15只,体质量(120±10)g。三水白虎汤中草药制剂(由南方医院中药房提供,主要成分水牛角、寒水石、白芥子、虎杖、鸡血藤等),来氟米特片(由美国欣凯公司提供)。实验分组:大鼠随机分为三水白虎汤组、来氟米特组以及生理盐水组,分别给予相应药液灌胃7d,制取含药血清。细胞培养实验共分4组,包括正常对照组以及三水白虎汤组、来氟米特组、生理盐水组3组含药血清组。实验干预:滑膜采自膝骨关节滑膜炎滑膜组织,采用体外细胞组织块培养技术,含药血清法接种培养。将第4代的滑膜细胞浓度为5×106L-1接种于板孔,在3组含药血清终浓度分别为10%,20%,30%,40%,50%下培养,正常对照组为完全培养液组。实验评估:①用四甲基偶氮唑盐检测法观察滑膜细胞的增殖。②锥虫蓝染色计数活细胞数,并进行B型细胞鉴定。结果:①滑膜细胞活性鉴定、计数及B型细胞鉴定:滑膜组织块培养后锥虫蓝拒染细胞计数为2×107,测得活性率达97%。免疫组织化学示Vimentin阳性,为B型滑膜细胞特征染色。②各组含药血清对滑膜细胞增殖的影响:生理盐水组和正常对照组的活细胞均明显增加;与生理盐水组和正常对照组比较,三水白虎汤组及来氟米特组的细胞增殖显著受抑致,活细胞数剧减(P<0.001)。在培养前5d,同一含药血清浓度下,三水白虎汤组随着培养天数增加,对细胞增殖的抑制作用增强,5d后抑制作用不再明显增加。同条件下比较活细胞数; 陈德超肖长虹吴启富刘传芳黄世峰杨敏; 关键词：组织培养技术关节炎

四甲基偶氮唑盐法预测化疗药物在体内的抗癌效应被引量：4: 2003年; 目的 :研究四甲基偶氮唑盐 (MTT)法预测化疗药物在肿瘤患者体内对癌细胞的杀伤作用。方法 :采用MTT法分别检测 15种化疗药物对 30例骨肉瘤及 4 5例肺癌患者的体外培养的原代肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :在细胞浓度为 5× 10 4/孔 ,药物作用于肿瘤细胞 72h ,MTT法检测显示骨肉瘤对DDP、CBP、VM 2 6、ADM、THP、5 FU敏感 ,对CBP、ADM、THP、DDP、VM 2 6中度敏感 ,对VP16、DITC不敏感 :4 5例肺癌标本对CBP、VM 2 6、THP、DDP、MTX敏感 ;对VM2 6、CBP、THP中度敏感 ;对VP16、DITC、EADM不敏感。不同的肿瘤患者对相同药物的敏感性不同。结论 :MTT方法对预测化疗药物在体内的化疗效果检测提供了快速、简便的试验方法。; 宋毅唐尧屠重棋袁淑兰廖芸; 关键词：体外实验 MTT方法骨肉瘤

四甲基偶氮唑盐法用于非小细胞肺癌药敏试验条件的筛选: 1999年; 目的筛选非小细胞肺癌药敏试验的条件。方法取25例非小细胞肺癌患者的瘤细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察9种化疗药物，在不同浓度、不同时间对瘤细胞的敏感性。结果9种化疗药物对瘤细胞的敏感性，有随着药物浓度的增加、作用时间的延长而增高的趋势，但每个药物都有各自的特点。结论非小细胞肺癌细胞MTT法药敏试验的浓度应为临床用药量的计算值，药物作用时间应以48h为宜。; 郭杨王增林任金荣艾军何兰欣张雪莉; 关键词：非小细胞肺癌药敏试验四甲基偶氮唑盐法化疗药物癌细胞

4-氨基-2-三氟甲基喹唑啉衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性研究被引量：3: 2022年; 目的基于喹唑啉为母核设计发现新型抗肿瘤活性化合物。方法以邻氨基苯甲酰胺和三氟乙酸酐为起始原料采用缩合、环化、氯代和偶联反应等合成了一系列4-氨基-2-三氟甲基喹唑啉衍生物(5a~5u)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价所得目标化合物对人肺癌细胞A549、人宫颈癌细胞Hela、人白血病细胞K562、人前列腺癌细胞PC-3、人前列腺癌细胞LNCaP这5种肿瘤细胞的体外增殖抑制活性。结果化合物5c在5μmol·L^(-1)时对PC-3肿瘤细胞的抑制率为49.3%,化合物6a对LNCaP和K562、以及6b对PC-3的抑制率超过了50.0%。结论本实验设计合成的4-氨基-2-三氟甲基喹唑啉类化合物多数具有一定的抗肿瘤活性,特别是4-氨基的N-甲基化产物6a、6b的体外抗肿瘤活性较原型化合物(5n与5u)显著增强,为该类化合物的进一步研究提供参考。; 刘锟刘锟余刚余佳徐广灿曾晓萍曾晓萍; 关键词：喹唑啉三氟甲基化学合成抗增殖活性四甲基偶氮唑盐法

CD73对体外大鼠心肌细胞增殖和功能的影响: 2022年; 目的探讨CD73对大鼠心肌细胞(CMs)增殖和功能的影响。方法体外培养原代大鼠CMs和大鼠心肌细胞系H9C2,构建慢病毒CD73过表达载体和空载病毒组,分别转染CMs和H9C2。实验分组:CD73过表达组(OE组)和阴性对照组(NC组),即CMs-OE组和CMs-NC组;H9C2-OE组和H9C2-NC组,每组各5只。Real-time PCR法检测转染病毒后各组细胞CD73基因水平表达情况;MTT法检测细胞增殖能力变化;无损伤心肌细胞功能分析仪检测CMs细胞增殖曲线、倍增时间和搏动变化。结果慢病毒转染CMs和H9C272 h后,过表达组CD73 mRNA水平明显高于对照组(P<0.05);CMs和H9C2转染后3~4 d的增殖能力为OE组大于NC组(P<0.05);CMs和H9C2细胞增殖曲线均显示OE组高于NC组,CMs和H9C2倍增时间为OE组低于NC组(P<0.05);CMs转染后72 h显示OE组细胞搏动率高于NC组,OE组转录因子T-同源盒基因5(TBX5)表达和血管内皮生长因子(VEGF)的分泌高于NC组,而缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及肝病坏死因子α(TNF-α)的分泌低于NC组。结论CD73可促进CMs和H9C2的增殖,促进CMs搏动及TBX5表达和VEGF分泌,抑制HIF-α和TNF-α的分泌。; 王琰赵育洁李志营王前郭志坤; 关键词：CD73 心肌细胞搏动四甲基偶氮唑盐法

靶向叉头框蛋白J2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建及其对肝癌细胞转化生长因子β/Smads表达和增殖的影响被引量：3: 2021年; 目的构建靶向叉头框蛋白J2(FOXJ2)的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因敲除质粒,探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白(TGF-β/Smads)表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA(sgRNA)序列,与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌,挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6,对照组只转染空载体,48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用,同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况;MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs,其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达,同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组,差异显著;并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达,抑制细胞的增殖,推测在体情况下,肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性,FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。; 曲明娟郑煜李延敏宋洋王蕾周菊华; 关键词：肝癌细胞转化生长因子Β SMADS蛋白四甲基偶氮唑盐法

喜树碱氨基酸衍生物的合成及细胞毒活性研究: 2020年; 喜树碱与丁二酸酐酯化得到中间体20(S)-O-4-氧代戊酸酰基喜树碱3a,再与L-氨基酸酯盐酸盐缩合得到10个喜树碱氨基酸酯衍生物4a^4j。目标化合物经过IR、1H-NMR、13 C-NMR、MS、元素分析等结构确证。采用四甲基偶氮唑盐法考察了目标化合物对人肝癌细胞、人结肠癌细胞体外抑制活性。结果表明化合物4b,4d,4e,4i,4j抑制率较高。; 马玉冰康威李朝阳龚显峰张华; 关键词：四甲基偶氮唑盐法

4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果被引量：13: 2019年; 目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。; 柴冰阳陈泽慧张闪闪张闪闪应雪; 关键词：紫草素四甲基偶氮唑盐法

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