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一种提高纤维埃博霉素产量的TALE-TF载体及其构建方法
本发明公开了一种提高纤维埃博霉素产量的TALE‑TF载体及其构建方法。本发明首次公开了一种新型的靶向纤维埃博霉素生物合成基因启动子的新型TALE‑TF元件,将其导入纤维,提高了埃博霉素生物合成基因表达水...
叶伟刘桃妹章卫民朱牧孜李赛妮李浩华孔亚丽刘珊
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一种提高纤维埃博霉素产量的dCas9载体及其构建方法
本发明公开了一种提高纤维埃博霉素产量的dCas9载体及其构建方法。本发明首次公开了一种新型的靶向纤维埃博霉素生物合成基因启动子的新型CRIPR/dCas9‑VP64转录激活系统,并将其导入纤维,提高了埃...
叶伟刘桃妹章卫民朱牧孜李赛妮李浩华孔亚丽刘珊
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一种纤维发酵消泡剂的制备方法
本发明涉及微生物发酵领域,具体关于一种纤维发酵消泡剂的制备方法;本发明合成了一种含氢聚硅氧烷,然后用炔醇与其发生硅氢聚合接枝到聚硅氧烷链段上合成了一种炔醇改性的聚硅氧烷,该种聚硅氧烷具有亲水和亲油双重性能,拥有良好...
王美珍
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一种高产埃博霉素D的纤维及其构建方法和应用
本发明公开了一种高产埃博霉素D的纤维及其构建方法和应用。首次公开利用TALEN技术构建epoK基因被敲除的重组纤维So ce M4株,经试验证明,运用TALEN技术敲除纤维So ce M4株中的ep...
叶伟章卫民刘桃妹孔亚丽朱牧孜刘珊
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利用异源表达挖掘纤维So0157-2的新型天然产物被引量:1
2021年
黏细是天然产物的重要来源。纤维So0157-2是抗癌药物埃博霉素的产生,并且是已知基因组最大的原核生物。生物信息学分析发现该一共含有35个次级代谢产物生物合成基因簇,除了已知的埃博霉素基因簇和其他两个萜类化合物生物合成基因簇与已知基因簇的相似度为100%之外,其他基因簇与已知化合物基因簇相似度均较低,其中包括17个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)、非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)及其杂合的基因簇。由于纤维So0157-2生长缓慢、培养困难且难以在本源中进行遗传改造。因此,将其生物合成基因簇转移到简单宿主中,利用异源表达策略是挖掘该中新颖天然产物的一个有效途径。本文利用直接克隆技术从纤维So0157-2基因组DNA中克隆了1个包含NRPS和PKS结构域的基因簇BGC18,将其转移至伯克氏DSM 7029中进行异源表达。通过液质联用分析,色谱柱靶向分离纯化,进而通过NMR结构鉴定和Marfey反应确定了3个化合物分别为Cyclo(N-Me-L-Leu-L-Val)(1)、Cyclo(N-Me-L-Leu-LLeu)(2)、Cyclo(N-Me-L-Leu-L-Ile)(3)。化合物结构的多样性来源于第1个腺苷化结构域对底物识别的宽泛性(Val/Leu/Ile)。生物合成途径分析推测由于缺少硫醇化结构域导致PKS模块被跳过,从而只获得了NRPS指导合成的环二肽产物1~3,这可能是细中一种实现化合物多样性的方式。本论文以基因簇直接克隆与异源表达相结合的策略,成功实现了一个来源于纤维So0157-2中的NRPS-PKS杂合基因簇的异源表达,分离并鉴定了3个该基因簇对应的表达产物。本研究为后续从该株中挖掘更多活性天然产物奠定了技术基础,也为其他难培养株的次级代谢产物的挖掘提供了思路。
周海波申琪瑶陈汉娜王宗杰李越中张友明卞小莹
关键词:异源表达纤维堆囊菌
一种提高纤维埃博霉素产量的dCas9载体及其构建方法
本发明公开了一种提高纤维埃博霉素产量的TALE‑TF载体及其构建方法。本发明首次公开了一种新型的靶向纤维埃博霉素生物合成基因启动子的新型TALE‑TF元件,将其导入纤维,提高了埃博霉素生物合成基因表达水...
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一种提高纤维埃博霉素产量的TALE-TF载体及其构建方法
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两株纤维的转化方法
本发明公开了两株纤维的转化方法。鉴于目前纤维的转化方法和可用质粒载体相对较少,因此本发明选用带双抗性的穿梭质粒载体和广宿主载体分别将外源基因(vgb)导入至两株纤维中,为建立纤维的遗传操作体系并促...
叶伟章卫民李浩华李赛妮王磊谭国慧
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一种高产埃博霉素D的纤维及其构建方法和应用
本发明公开了一种高产埃博霉素D的纤维及其构建方法和应用。首次公开利用TALEN技术构建epoK基因被敲除的重组纤维So ce M4株,经试验证明,运用TALEN技术敲除纤维So ce M4株中的ep...
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一种适用于纤维的TALEN载体及其构建方法
本发明公开了一种适用于纤维的TALEN载体及其构建方法。本发明首次将适用于大肠杆和枯草芽孢杆的启动子P43替换适用于真核生物的启动子,将构建成功的靶标目的基因的左右臂TALEN元件和靶标基因共同转入纤维,...
叶伟章卫民
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