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间充质干细胞端粒酶催化亚基RT-qPCR方法的建立
2025年
目的:建立一种简便、高效的端粒酶活性检测方法,用于评价间充质干细胞产品的成瘤性风险。方法:针对端粒酶催化亚基(TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个反应体系内使用双色荧光探针进行多重定量PCR反应,建立RT-qPCR探针法。应用该法对人间充质干细胞中是否表达TERT基因来间接判断细胞中是否存在端粒酶活性。结果:该方法可稳定特异地检测到阳性对照细胞293T/17的TERT基因,Ct平均值为23.96,RSD为1.5%。内参基因GAPDH均可以正常检出,Ct平均值为14.13,RSD为1.3%。阴性对照细胞MRC-5内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为12.81,RSD为0.46%,TERT基因未检出,该细胞端粒酶活性为阴性。人间充质干细胞HMSC内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为13.01,RSD为3.8%,TERT基因未检出,人间充质干细胞HMSC的端粒酶活性为阴性。结论:本研究建立的RT-qPCR探针法重复性好,特异性高,能够准确检测端粒酶阳性细胞催化亚基mRNA的转录。可用于间充质干细胞端粒酶活性分析,间接评估间充质干细胞成瘤性风险。
陈晓菲李慧婷董莹莹曹译丹付欣悦刘明月张瑞瑞王艳辉王新乐崔梦姗张峒庞琳饶春明
关键词:端粒酶催化亚基端粒酶活性干细胞成瘤性
一种检测人源细胞端粒酶活性的引物组合物及试剂盒
本发明公开了一种检测人源细胞端粒酶活性的引物组合物及试剂盒,检测PCR反应引物组合包括以下碱基序列:tele‑F(SEQ ID NO.1)、tele‑R(SEQ ID NO.2),端粒酶反应的启动引物的碱基序列:tele...
魏喆刘欣欣韩之波
一种检测宫颈上皮细胞端粒酶活性的试剂盒及其应用
本发明属于生物医药技术领域,为了解决目前端粒酶检测技术依然无法应用于宫颈癌筛查中的问题,提供了一种检测宫颈上皮细胞端粒酶活性的试剂盒及其应用。所述试剂盒包含磁珠、端粒酶释放溶液、定量PCR试剂,其中磁珠偶联了抗人GYPC...
郑金平杨丹丹谭铮郑克威王佳
太赫兹波降低乳腺癌细胞端粒酶活性及作用机制研究
原癌基因的激活与抑癌基因的突变使得端粒酶在癌细胞中重新表达,突破分裂次数的限制,约85%-90%的癌细胞可以检测出较高的端粒酶活性,抑制端粒酶活性对抗癌细胞的发展是一种潜在的癌症治疗途径。由于目前调控端粒酶活性主要是通过...
尹俊凯
关键词:太赫兹端粒酶端粒
一种抗衰老细胞端粒酶活性剂的制备方法
本发明涉及一种抗衰老细胞端粒酶活性剂的制备方法的工艺,它包括如下步骤:(1)取黄芪细粉500g。(2)将黄芪细粉置于HWC‑3微波提取设备仪器中,微波加热用醇,水提取法进行三次提取,微波提取设备的加热功率为500w‑10...
屠承德
文献传递
外周血单个核细胞端粒酶活性与寻常型银屑病患者焦虑抑郁状态的关系被引量:1
2021年
目的观察寻常型银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性变化,探讨其与寻常型银屑病患者焦虑、抑郁的关系。方法100例寻常型银屑病患者为银屑病组,同期100例体检健康者为对照组。银屑病组于就诊时、对照组于体检日采集外周静脉血,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞端粒酶活性;2组行医院焦虑抑郁量表(Hospital Anxiety and Depression Scale,HADS)评分,比较HADS-A及HADS-D评分;Pearson相关分析寻常型银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性与HADS-A、HADS-D评分的相关性;以HADS-A评分≥11分为存在焦虑,HADS-D评分≥11分为存在抑郁,记录银屑病组焦虑、抑郁患者例数,比较银屑病组抑郁与未抑郁、焦虑与未焦虑患者外周血单个核细胞端粒酶活性;绘制ROC曲线,评估外周血单个核细胞端粒酶活性预测寻常型银屑病患者焦虑、抑郁的价值。结果银屑病组外周血单个核细胞端粒酶活性(2.01±0.54)、HADS-A评分[(17.05±3.25)分]、HADS-D评分[(16.97±4.21)分]均高于对照组[0.91±0.12、(6.32±1.14)分、(6.20±1.67)分](P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,寻常型银屑病患者HADS-A评分(r=0.745,P=0.003)、HADS-D评分(r=0.643,P=0.004)与外周血单个核细胞端粒酶活性均呈正相关。银屑病组35例存在焦虑,65例存在抑郁,焦虑者外周血单个核细胞端粒酶活性(2.78±0.42)高于未焦虑者(1.73±0.51)(P<0.05),抑郁者外周血单个核细胞端粒酶活性(2.84±0.53)高于未抑郁者(1.73±0.46)(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞端粒酶活性分别以2.42、2.42为最佳截断值,预测寻常型银屑病患者焦虑、抑郁的AUC分别为0.796(95%CI:0.649~0.829,P<0.001)、0.902(95%CI:0.835~0.942,P<0.001),灵敏度分别为84.15%、93.24%,特异度分别为79.28%、95.25%。结论寻常型银屑病患者外周血单个核细胞端粒酶活性增强,与其发生焦虑、抑郁有关,对预测寻常型银屑病患者焦虑�
孟静韩传恩郑秀霞张丽李丹夏博郑恒星李思蒙杨柳袁铭孟繁俊
关键词:寻常型银屑病端粒酶活性焦虑抑郁
老年肺炎患者外周血单个核细胞端粒酶活性与气道脱落细胞高尔基体应激水平的相关性被引量:4
2021年
目的探讨老年肺炎患者外周血单个核细胞端粒酶活性与气道脱落细胞高尔基体应激水平的相关性。方法回顾性纳入2018年6月至2021年6月在空军第九八六医院住院治疗的60例肺炎患者,根据年龄将患者分为老年组(≥65岁,n=37)和非老年组(<65岁,n=23),选取同期健康体检的20例志愿者作为对照组。通过联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定所有标本中的端粒酶活性。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测外周血单核细胞的增殖活性。通过免疫发光测定法和流式细胞仪技术分别检测髓过氧化物(MPO)和活性氧(ROS)活性。分析端粒酶活性与气道脱落细胞高尔基体MPO水平的相关性。并采用ELISA法测定血浆细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-5水平。结果端粒酶在PHA-M刺激前,老年组较非老年组和对照组端粒酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05),对照组和非老年组端粒酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。端粒酶在PHA-M刺激后,老年组较非老年组和对照组端粒酶活性降低,非老年组较对照组端粒酶活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年组和非老年组较对照组的端粒酶活性增加率降低,差异有统计学意义(P<0.05),老年组和非老年组端粒酶活性增加率比较差异无统计学意义(P>0.05)。活化24 h和48 h后,老年组和非老年组较对照组的增殖活性降低,老年组较非老年组增殖活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年组和非老年组较对照组中MPO和ROS活性升高,非老年组较对照组MPO和ROS活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年肺炎患者外周血单个核细胞端粒酶活性与气道脱落细胞高尔基体MPO水平负相关(r=-0.654,P<0.05)。老年组和非老年组较对照组血浆TNF-α、IL-6和IL-5水平升高,老年组较非老年组TNF-α、IL-6和IL-5水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论老年肺炎患者外周血单个核
贾李侠白翠林纪玉强张彦海
关键词:老年肺炎患者端粒酶高尔基体
恶性血液病细胞端粒酶活性检测及其临床意义被引量:1
2019年
目的:分析恶性血液病细胞端粒酶活性检测及其临床意义。方法:2016年2月-2017年1月收治血液系统恶性肿瘤疾病患者90例,另外在同期选择部分良性血液疾病患者30例进行对比分析。两组患者均接受相同检查方法,总结不同疾病患者的端粒酶活性差异。结果:良性血液疾病患者的端粒酶活性与其他恶性血液疾病患者的端粒酶活性数据差异较大,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:恶性血液病细胞端粒酶活性检测临床意义显著,能够作为恶性血液疾病检查标志物,尤其是可以作为白血病残留量的监测新标准之一,值得推广普及。
陈滔李美玲张红艳
关键词:恶性血液病细胞端粒酶活性检测
非小细胞肺癌患者外周血白细胞端粒酶活性对预后的影响被引量:4
2019年
目的明确非小细胞肺癌患者外周血白细胞端粒酶活性对预后的影响。方法纳入河北省保定市第一中心医院2016年6月至2017年4月确诊为非小细胞肺癌的患者共55例,收集患者一般资料,对患者外周血白细胞端粒酶活性进行检测,并随访患者生存状况,分析患者端粒酶活性与患者预后的关系。结果肿瘤病理类型、TNM分期、性别、是否吸烟均对外周血白细胞端粒酶活性的影响差异无显著性,不同TNM分期患者的端粒酶活性组间比较,差异无显著性(Ⅰ期比Ⅱ期:P=0.90;Ⅱ期比Ⅲ期:P=0.24;Ⅰ期比Ⅳ期:P=0.10;Ⅱ期比Ⅲ期:P=0.28;Ⅱ期比Ⅳ期:P=0.12;Ⅲ期比Ⅳ期:P=0.77)。TNM分期与端粒酶活性存在相关性(γ=0.27,P=0.025)。将所有患者按端粒酶活性分为高端粒酶活性组32例及低端粒酶活性组23例,进行Kaplan-Meier生存曲线分析,结果发现高端粒酶活性组生存时间[(20.65±2.29)个月]低于低端粒酶活性组[(27.54±1.58)个月](P=0.02)。进一步行Cox比例风险回归模型计算,发现年龄及端粒酶活性是患者生存的独立风险因素。结论外周血白细胞端粒酶活性及年龄为非小细胞肺癌患者生存的独立危险因素。
吴瑞锋王律张志强张金库高璐高丛韩小勇钟理张毅
关键词:端粒酶活性非小细胞肺癌肺癌预后
供核细胞端粒酶活性对体细胞重编程表观遗传修饰的影响
卵子能够100%重编程已经定向分化的精子细胞核,但不能完全重编程体细胞核。作为供核细胞,二者的显著区别是:体细胞没有端粒酶活性,精子细胞端粒酶活性存在时序性变化。基于此,本研究拟通过腺病毒携带端粒酶基因制备牛乳腺细胞体...
荆乾鸽
关键词:体细胞重编程表观遗传修饰
文献传递

相关作者

金洁
作品数:522被引量:1,555H指数:17
供职机构:浙江大学医学院附属第一医院
研究主题:急性髓系白血病 白血病 骨髓增生异常综合征 高三尖杉酯碱 细胞遗传学
范学工
作品数:354被引量:1,759H指数:19
供职机构:中南大学湘雅医院
研究主题:幽门螺杆菌 乙型肝炎病毒 金黄色葡萄球菌 细胞凋亡 慢性乙型肝炎
黄洪章
作品数:471被引量:1,372H指数:16
供职机构:中山大学附属口腔医院
研究主题:成釉细胞瘤 舌鳞癌 腭裂 舌肿瘤 舌癌
庞荣清
作品数:167被引量:479H指数:11
供职机构:成都军区昆明总医院
研究主题:脐带间充质干细胞 人脐带间充质干细胞 干细胞 猕猴 间充质干细胞
李乃农
作品数:34被引量:64H指数:5
供职机构:福建医科大学附属协和医院
研究主题:移植物抗宿主病 白血病 造血干细胞移植 淋巴瘤 B7.1