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C57BL/6新生乳鼠肠神经胶质细胞的提取与培养
2025年
背景:炎症性肠病的发病机制涉及炎症、免疫激活、内脏高敏感、肠道菌群失调等,其中炎症促使免疫细胞释放炎症递质,损伤肠神经系统。肠神经胶质细胞是肠神经系统的重要组成部分,是研究肠道神经炎症的良好细胞。原代肠神经胶质细胞对于探索肠神经系统疾病的细胞疗法具有至关重要的作用,而目前获得该细胞的方法大多较繁琐,因此找到一种便捷、快速提取该细胞的方法十分关键。目的:建立优化分离培养及鉴定小鼠肠神经胶质细胞的方法。方法:通过过量吸入异氟烷处死0-7 d龄C57BL/6乳鼠,将其浸泡于体积分数75%乙醇消毒后腹正中线开腹取出十二指肠(幽门下1 cm至屈氏韧带上1 cm),用1 mL注射器充满DPBS反复冲洗肠内容物至肠道半透明,剥离肠系膜及血管。将十二指肠剪至1 mm大小,放入含0.25%EDTA胰酶中消化20 min后加入等量DMEM/F12完全培养基终止消化,用100μm细胞滤器过滤后离心,加入1 mL DMEM/F12完全培养基重悬后培养细胞,细胞贴壁生长密度至80%时消化传代。细胞培养至第3代时用标记肠神经胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白进行免疫荧光鉴定。结果与结论:分离培养的细胞胶体饱满,突起向外延展,可以传代,胶质纤维酸性蛋白染色阳性。该方法可成功分离培养肠神经胶质细胞,且操作简便,为肠神经系统的病理生理学研究提供稳定的模型。
赵楠丁勇修航刘鹏飞梁国刚
关键词:乳鼠肠神经系统胶质纤维酸性蛋白
姜黄联合山楂对C57肥胖小鼠的减肥作用及机制研究
2024年
目的:评价姜黄联合山楂的减肥作用并探索其减肥机制。方法:32只C57BL/6J小鼠随机分为四组:正常组、正常干预组、高脂组、高脂干预组,每组8只。每天定时灌胃相应药物,每周定时检测小鼠脂肪率、瘦肉率、摄食和饮水量变化,每隔两周同一时间测定小鼠的随机血糖,12周后脱颈椎处死小鼠采集标本。检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST),通过附睾脂肪和肝脏HE染色,观察脂肪和肝脏组织形态变化。实时荧光PCR法检测肝脏组织中胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)、肝X受体α(Liver X Receptorα,LXRα)、固醇调节元件结合蛋白2(Sterol Regulatory Element Binding Protein,SREBP2)、固醇调节元件结合蛋白1C(Sterol Regulatory Element Binding Protein,SREBP1C)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(Steary-coenzyme A dehydro-synthase-1,SCD1)mRNA的相对表达水平。结果:相比高脂组,高脂干预组小鼠体质量、脂肪率、TG、TC、LDL-C显著降低,瘦肉率、HDL-C显著升高(P<0.05),摄食、饮水量无显著差异;抑制了脂肪细胞肥大,使得脂肪沉积减少;改善了肝脏细胞空泡化、炎症浸润;肝脏组织中CYP7A1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),LXRα、SREBP1C、SCD、FAS mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),SREBP2 mRNA表达水平无显著变化。结论:姜黄-山楂具有良好的减肥作用,其减肥机制与调节相关基因中mRNA表达水平有关。
李强李亚婷徐华健郝宗围陈鹏浩司雄元汪雪雁
关键词:山楂C57小鼠减肥作用
C57BL/6不同亚型对阿霉素肾毒性的易感性
2024年
目的 探讨C57BL/6不同亚型对阿霉素肾毒性的易感性差异,为C57BL/6菌株阿霉素肾病模型的构建提供相应的理论数据。方法 24只雄性C57BL/6J、24只雄性C57BL/6N小鼠均随机分组成模型组(阿霉素15 mg/kg,一次性尾静脉注射)和对照组,24只雄性BALB/c小鼠随机分组成模型组(阿霉素10 mg/kg,一次性尾静脉注射)和对照组,对照组均一次性尾静脉注射等量生理盐水。在造模后0、2、4、6周留取24 h尿液检测各组尿蛋白/肌酐比;2周及6周时收获各组小鼠,检测血白蛋白、总胆固醇、尿素及肌酐;观察各组肾组织病理形态。结果 C57BL/6J、C57BL/6N模型组不同时间段的尿蛋白/肌酐比与对照组差异无统计学意义(均P>0.05),且两种亚型小鼠造模2周及6周时的肾功能、血白蛋白及总胆固醇水平与对照组比较差异亦无统计学意义(P>0.05),而BALB/c小鼠2周时模型组尿蛋白/肌酐比和血白蛋白水平与对照组比较,差异有统计学意义[尿蛋白肌酐比:24.00±1.35比5.95±1.18,P<0.01;血白蛋白:(19.85±3.16)比(27.32±2.07)g/L,t=3.43,P=0.02]。病理形态学上,C57BL/6J和C57BL/6N模型组小鼠2周及6周时的肾小球、肾小管及间质形态基本正常,模型组肾小球硬化指数及小管间质损伤评分与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而BALB/c小鼠模型组2周时可见肾小球局灶节段性硬化、肾小球系膜基质增多、蛋白管型可见,肾间质散在炎症细胞浸润,6周时病理损伤加重。结论 一次性尾静脉注射阿霉素15 mg/kg时,C57BL/6J和C57BL/6N两种亚型小鼠对阿霉素肾毒性无明显易感性。
叶秋萍陈思慧熊云峰陈巧玲刘丽芳魏立新
关键词:C57BL/6J阿霉素肾病模型易感性
C57BL/6小鼠微小三毛滴虫的观察与种系发育分析
2024年
为鉴定从某外单位引进的C57BL/6小鼠粪样检测中发现的虫体种类,本试验对虫体进行形态学观察,并进行种系发育分析。取C57BL/6小鼠粪样涂片和瑞士染色后进行显微镜观察,提取粪样总DNA,根据三毛滴虫的16S rRNA进行PCR扩增后测序,运用MEGA11进行种系发育分析。显微镜观察发现,虫体符合微小三毛滴虫的形态学特征,测序发现微小三毛滴虫的基因序列与鼠三毛滴虫高度同源。
温福利
关键词:C57BL/6小鼠
枸杞多糖对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治
2024年
目的探讨枸杞多糖(LBP)对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治作用。方法选用12周C57BL/6J雌鼠,采用双侧卵巢完全切除术制备骨质疏松症模型,假手术组切除卵巢周围脂肪组织,术后1周,选取手术成功的小鼠分为假手术组、模型组和LBP组。LBP组给予灌胃LBP 0.1 g·kg^(-1),1次/d,连续12周,假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水。酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中雌二醇(E_(2))含量;生物化学方法检测血清氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Micro CT扫描胫骨微观结构,观察骨小梁厚度(Tb·Th)、骨表面积和骨体积之比(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb·Sp)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨体积(BV)的变化。结果与假手术组小鼠比较,模型组小鼠的体质量增长率升高、子宫脏器系数明显减小、血清E_(2)含量下降、血清氧化应激指标MDA含量增高、SOD活力降低(P均<0.01);与模型组小鼠比较,LBP组小鼠子宫脏器系数、血清E_(2)含量差异均无统计学意义(P均>0.05),但体质量增长率下降、血清MDA含量降低、SOD活力增加(P均<0.01),骨组织BMD、BV升高(P均<0.05),Tb·Th及BV/TV均显著升高(P均<0.01)。胫骨三维重建图显示,模型组骨皮质变薄,呈现骨质疏松改变,骨小梁数量减少,排列紊乱,髓腔明显扩大;LBP组较模型组骨小梁数量增加。结论LBP可能通过调控早期骨质疏松症小鼠的氧化应激反应,发挥改善骨质疏松的作用。
刘艺洁赵薇李林隆李海林姚建花李智东刘飞丁玉梅孟海伟于洋王银苗珍花
关键词:枸杞多糖C57BL/6J小鼠骨质疏松症氧化应激骨密度
C57BL/6小鼠炎症性肠病模型的建立与指标评价
2024年
【目的】通过葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激构建小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)模型,为IBD研究提供高效经济的模型参考,并为IBD抗炎药物筛选与药效评价提供可靠的方法支撑。【方法】本试验以C57BL/6雄性小鼠为研究对象,分别暴露于不同浓度的DSS(3%、4%和5%)7 d或LPS(5、10和20 mg/kg)4 h。通过测量小鼠结肠长度,HE染色观察肠道形态结构及实时荧光定量PCR检测肠道炎性因子的mRNA表达等对模型进行评价。【结果】DSS诱导小鼠结肠变短、病理出血、腺体萎缩、结构排列絮乱、炎性细胞浸润以及结肠中炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达显著上升(P<0.05),4%DSS即可高效建立IBD模型。同时,LPS引起小鼠肠系膜出血、肠道肿胀和充血,肠绒毛高度降低,隐窝深度升高,小肠中IL-10和IL-1βmRNA水平升高、IL-6 mRNA水平下降,十二指肠和回肠TNF-αmRNA水平上升,空肠TNF-αmRNA水平降低,且以5 mg/kg LPS综合影响最为显著。【结论】4%DSS和5 mg/kg LPS是C57BL/6小鼠IBD模型建立的最适浓度,肠道病理形态改变、肠道炎性细胞浸润及炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA表达异常是评价IBD模型的重要指标。
何家宇杨茗淇伍娇杨宇姚欢易金娥孔丽
关键词:炎症性肠病肠道炎症C57BL/6小鼠
马兜铃酸Ⅰ致C57BL/6和C3H/He小鼠急性毒性研究被引量:1
2024年
目的拟通过比较不同品系小鼠对马兜铃酸I(AAI)的耐受性及急性毒性反应,以期为研究AAⅠ提供借鉴和指导。方法采用ig给药方式,单次给予C57BL/6和C3H/He小鼠AAⅠ(5.0、9.3、17.1、31.7、58.6、108.4、200.5 mg·kg^(-1)),每种品系小鼠均设置1个溶媒对照组,并于给药后进行一般症状观察及体质量测定。试验结束进行剖检、脏器称质量、血清生化指标检测及病理学检查。结果单次给予一定剂量AAⅠ可引起2种品系小鼠出现体质量下降、消瘦、弓背及活动减少,甚至死亡,并且C57BL/6小鼠出现上述改变的AAⅠ剂量低于C3H/He小鼠。C57BL/6小鼠的AAⅠ半数致死量(LD50)为38.07 mg·kg^(-1),C3H/He小鼠的AAⅠLD50为59.92 mg·kg^(-1)。C57BL/6小鼠AAⅠ最大耐受剂量(MTD)为17.1 mg·kg^(-1),C3H/He小鼠的AAⅠMTD为31.7 mg·kg^(-1)。给予一定剂量的AAI后,C57BL/6小鼠各项血清生化指标未见改变,而C3H/He小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(CRE)水平升高。AAI可引起C57BL/6、C3H/He小鼠多个脏器出现急性损伤,如胸腺、脾脏、肾脏、肝脏及前胃,并且引起C3H/He小鼠上述组织器官出现组织病理学改变的AAⅠ剂量均低于C57BL/6小鼠。结论通过对不同剂量AAⅠ所引起C57BL/6和C3H/He小鼠整体毒性、血清生化指标、动物死亡原因以及组织病理学改变分析,认为C3H/He小鼠对AAⅠ的急性毒性比C57BL/6小鼠更加敏感。既验证了AAⅠ致C57BL/6和C3H/He小鼠的急性毒性特点和作用的靶器官,也为研究不同品系小鼠对AAⅠ急性毒性的敏感性和耐受性提供了数据支持。
霍桂桃秦超王超林志屈哲李双星杨艳伟张頔文海若
关键词:马兜铃酸IC57BL/6小鼠急性毒性肾毒性
C57BL/6N小鼠早期视网膜变性及小胶质细胞活化状态研究
2024年
目的:观察C57BL/6N(Crb1 rd8/rd8)小鼠早期视网膜变性以及小胶质细胞的活化情况。方法:取雄性SPF级C57BL/6N小鼠15只、C57BL/6J小鼠15只,正常饲养。分别在入组时,入组4、8、12 wk,使用Micron-Ⅲ小动物视网膜影像系统进行双眼彩色眼底照相检查计算病变数量、病变面积。观察结束后处死小鼠,摘取右侧眼球制备视网膜组织切片,进行HE染色后光镜下观察视网膜组织形态;采用免疫组织化学染色分析两组小鼠视网膜CX3CR1的表达水平及位置。摘取左侧眼球分离视网膜,使用Western-Blot检测CD86、CD206的表达情况,使用电化学发光法测定视网膜中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10炎性因子含量水平。结果:眼底彩照结果显示在入组4、8、12 wk,C57BL/6N组眼底病变数量均较入组时显著增加,与C57BL/6J组同时间点变化量比较均有差异(均P<0.05);眼底病变面积变化量两组间入组12 wk有差异(P<0.05),各组内变化量比较均无差异(均P>0.05);视网膜组织HE染色示:C57BL/6N组视网膜结构异常,细胞排列疏松、紊乱,光感受器层向视网膜内侧明显的玻璃膜疣样凸起,C57BL/6J组视网膜结构清晰,细胞排列有序,无明显异常;免疫组化结果示:C57BL/6N组视网膜中CX3CR1高表达于神经节细胞层、内外丛状层、感光细胞层及病灶处位置,平均光密度为0.285±0.056,C57BL/6J组为0.189±0.084(P<0.05);Western-Blot结果显示:与C57BL/6J组相比,C57BL/6N组视网膜CD86、CD206蛋白有不同程度升高,两组CD86蛋白表达有差异(P<0.05);细胞因子检测结果显示:C57BL/6N组IL-1β、TNF-α水平显著高于C57BL/6J组,而IL-10含量则明显较低(均P<0.05)。结论:C57BL/6N(Crb1 rd8/rd8)小鼠视网膜变性进展缓慢,随年龄呈进行性加重,病灶部位视网膜结构紊乱,伴有以M1型极化为主的小胶质细胞浸润。
孟欢邓婷婷刘自强侯小玉马传政苑维金明
关键词:视网膜变性年龄相关性黄斑变性小胶质细胞
C57BL/6J小鼠与昆明小鼠NIAAA法酒精性肝病造模效果的比较
2024年
为了对比C57BL/6J小鼠和昆明小鼠酒精性肝病模型建造效果及建模完成后续肝脏生化指标变化情况,为酒精性肝病的治疗研究提供基础依据,试验选择雌性C57BL/6J小鼠和昆明小鼠各36只,随机分为对照组(液体饲料+麦芽糊精)、建模16 d组与建模19 d组(液体饲料+酒精,n=12)。利用NIAAA法建造酒精性肝病小鼠模型,并分别于建模第16 d、建模第19 d取其血清及肝组织进行生化指标检测及病理切片观察。结果显示,C57BL/6J小鼠建模16 d组和建模19 d组与昆明小鼠建模16 d组的小鼠血清ALT、AST含量,肝脏MDA、TG含量均分别显著高于其对照组小鼠(P<0.05);而血清ALB含量、肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05)。C57BL/6J建模16 d组和建模19 d组小鼠的肝脏GSH含量和肝脏系数显著高于其对照组小鼠(P<0.05),但昆明小鼠建模19 d组除了肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05),其他指标均与其对照组小鼠无显著差异。病理切片结果表明,与对照组相比,建模16 d组2种小鼠肝细胞排列紊乱,肝细胞索断裂,肝细胞出现炎性浸润和脂肪液滴。C57BL/6J小鼠建模19 d组肝组织仍呈现病变,而昆明小鼠建模19 d组肝细胞已逐渐恢复正常排列。与昆明小鼠相比,C57BL/6J小鼠对于酒精的肝脏氧化应激损伤更严重,酒精性肝病模型更稳定。
吕皓林川陈红杨晨晨向欣韩春梅
关键词:C57BL/6J小鼠昆明小鼠酒精性肝病生化指标病理变化
C57BL/6J小鼠背景的CD19嵌合抗原受体T细胞的制备及优化被引量:1
2024年
目的:探索C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞体外刺激条件、最佳培养和感染时间,以期提高CD19嵌合抗原受体T细胞(m CD19 CAR-T)的感染效率。方法:将纯化的C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞在包被CD3/CD28抗体(anti-CD3/CD28 coated)、包被CD3抗体+可溶性CD28抗体(anti-CD3 coated+soluble anti-CD28)和包被CD3抗体(anti-CD3 coated)3种不同条件下分别刺激12 h和24 h,后续培养24 h、48 h和72 h并记录细胞克隆数。在上述3种条件下分别刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞12、24和36 h,然后加入白介素(IL)-2(100 U/ml),镜下记录培养24 h、48 h和72 h的细胞克隆数;此条件下取刺激24 h的CD3^(+)T细胞,感染m CD19 CAR-T逆转录病毒,制备m CD19 CAR-T细胞,流式检测48 h时3组中GFP+CAR-T细胞的百分率。结果:利用获得BALB/c小鼠m CD19 CAR-T细胞的最优化条件,制备C57BL/6J小鼠的m CD19 CAR-T细胞感染效率仅5.23%;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞24 h,终止刺激继续培养至48 h时细胞克隆数最高;在上述条件刺激24 h后加入IL-2培养48 h,anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated组T细胞增殖克隆数量显著增加,且CAR-T细胞感染效率为17.63%±4.17%。结论:C57BL/6J小鼠来源T细胞制备CAR-T细胞的最佳条件与BABL/c小鼠不同;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated+IL-2刺激条件下诱导的T细胞感染逆转录病毒后可获得最高效率的m CD19 CAR-T细胞。
任春晓赵莉陈娴娴田宇赵恺
关键词:C57BL/6J小鼠CD19

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