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甲型流感病毒血凝素HA蛋白保守抗原表位的鉴定: 2024年; 流感大流行对人类健康危害严重,流感病毒型别多,易变异,现有疫苗不能诱导机体产生不同亚型间的交叉保护力,造成预防困难,因此,精细定位甲型流感病毒保守抗原表位是研究重点。本研究通过使用单克隆抗体和计算机模拟预测两种技术,采用免疫学方法和生物信息学方法,获得了4株识别血凝素(HA)保守抗原表位的单克隆抗体,以这4株单抗为研究工具,最终明确HA茎部区域多肽STQNAID(409~415 aa)是甲型流感病毒HA保守区抗原表位,为开发甲型流感通用疫苗提供理论和实验基础。; 郭春艳靳占奎靳占奎封青徐翠香; 关键词：甲型流感病毒阻断ELISA

HA280免疫吸附在重度活动性系统性红斑狼疮治疗中的作用: 2024年; 目的:探究HA280免疫吸附配合激素、环磷酰胺、羟氯喹治疗重度活动性系统性红斑狼疮的疗效及安全性。方法:选取32例重度活动性系统性红斑狼疮患者为研究对象,根据治疗方法不同将患者分为吸附组与对照组,每组各16例。对照组进行激素、环磷酰胺、羟氯喹等常规治疗;吸附组在此基础上应用HA280免疫吸附治疗,两组患者疗程均为6个月。对比分析两组患者的免疫球蛋白、补体、疾病活动度、激素累积剂量的变化情况。结果:治疗6个月后,吸附组IgG、IgA及总球蛋白下降水平、C3、C4回升及SLE活动度降低水平均高于对照组(P<0.05);治疗后,吸附组的达标用时小于对照组(P<0.05);激素累积量小于对照组(P<0.05)。结论:HA280免疫吸附联合激素、环磷酰胺、羟氯喹治疗重度活动性系统性红斑狼疮的疗效显著,更能快速控制病情活动度、及早达标,并可减少激素的累积剂量,减少相关副作用。; 谢莉刘剑平安涛陈瑜张立勋胡祖林龚裕洁杨冬梅; 关键词：系统性红斑狼疮疗效安全性

流感病毒球状头部结构域HA1的原核表达及纯化: 2024年; 目的原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白。方法将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63~286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和USA,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变。将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白。结果成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确。表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28000,均可与鼠抗His抗体特异性结合。重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37℃,诱导8 h表达量最高。纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90%、85%、95%和80%。结论通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。; 曾博宇许智强于潼陈璐儿张桐陈振海庄忻雨田明尧金宁一; 关键词：流感病毒 HA1 原核表达

B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)蛋白疫苗的筛选研究: 2024年; 目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白。方法:以B/Singapore/INFTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFastBac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达。表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性。突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性Ig G抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平。结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在。三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的Ig G抗体和HAI抗体。结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体。研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考。; 金亚珉杨姣姣张婷王志荣许雪梅; 关键词：重组蛋白疫苗

PRP联合HA治疗膝骨性关节炎疗效及安全性的Meta分析被引量：2: 2024年; 目的探讨富血小板血浆(PRP)联合透明质酸(HA)关节内注射与PRP单独注射相比的疗效和安全性,为膝骨性关节炎(KOA)的治疗提供循证策略。方法查阅PubMed、Web of Science、中国知网(CNKI)、万方数据库,检索建库初到2021年10月公开发表的文献。纳入已发表的随机对照实验(RCT)或队列研究。研究对象为KOA患者,实验组为PRP联合HA关节内注射,对照组为PRP或HA关节内注射。对纳入RCT研究使用Cochrane手册风险评估工具进行质量评价,队列研究使用Newcastle-Ottawa Scale进行质量评价,用RevMan5.3软件对结局指标进行Meta分析。结果纳入10篇文献,共1110例患者,其中PRP组467例,PRP+HA组450例,HA组193例。Meta分析结果显示,PRP+HA组在治疗6个月后视觉模拟评分(VAS,MD:-0.31;95%CI(-0.60~-0.03);P=0.03)、西大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分(MD:-2.81;95%CI(-4.48~-1.13);P=0.001)、Lequesne指数(MD:-1.46;95%CI(-2.01~-0.90);P<0.00001)均显著优于PRP组;两组并发症发生率无统计学意义(RD:0.00;95%CI(-0.03~0.04);P=0.97)。结论PRP联合HA治疗KOA具有良好的临床治疗效果。基于此Meta分析,与单纯关节内注射PRP相比,PRP联合HA可提高治疗6个月后的WOMAC评分、VAS评分和Lequesne指数评分。在并发症发生率方面,两种治疗方案的安全性相似。; 苏杭金龙浩梅皓宋国伏守用王旭; 关键词：膝骨性关节炎 META分析

基于磁控溅射的PEEK表面HA涂层构建及其生物安全性评估: 2024年; 目的:基于磁控溅射技术在PEEK表面构建羟基磷灰石(HA)涂层,并系统评估该方法的生物安全性。方法:磺化PEEK以增加结合面积,并利用磁控溅射技术在其上构建HA涂层;通过扫描电镜结合能谱分析检测构建效果;通过细胞黏附实验、细胞骨架荧光染色以及扫描电镜来评估细胞层面安全性;通过SD大鼠全身毒性评估材料在体安全性;通过金黄地鼠黏膜刺激实验评估材料口腔应用安全性。结果:利用上述技术可在PEEK表面成功构建具有梯度形貌的HA涂层;该涂层可促进细胞黏附、伸展与增殖;且无全身毒性,对动物体重与体内重要脏器HE染色均无显著性影响(P>0.05);同时该涂层在一定程度上减轻了单纯磺化带来的口腔黏膜刺激。结论:基于磁控溅射技术可稳定制备HA涂层,并满足临床应用的生物安全性需求。; 马天源陆斌刘富伟辛河陈怡成贾雪连朱思敏张浚睿宁小娜; 关键词：磁控溅射生物安全性

HA/H_(2)O_(2)体系对磺胺噻唑降解的机理与效能: 2024年; 以盐酸羟胺/过氧化氢(HA/H_(2)O_(2))作为研究体系,考察其对于磺胺噻唑(STZ)的降解效能。文章考察了HA初始浓度、H_(2)O_(2)初始浓度、STZ初始浓度、pH、天然有机物(NOM)、阴离子(SO_(4)^(2-)、Cl-和NO_(3)^(-))对STZ降解的影响。结果表明:在pH值=3.0的条件下,HA/H_(2)O_(2)体系对STZ具有高效的降解效果,当HA的物质的量浓度由2 mmol/L增加到10 mmol/L时,对STZ的去除率从56.06%增加到85.26%;当H_(2)O_(2)的物质的量浓度从2 mmol/L增加到10 mmol/L时,对STZ的去除率从58.96%增加到85.26%,当STZ的物质的量浓度从2μmol/L增加到10μmol/L时,对STZ的去除率从98.72%降低到71.86%。随着pH的增大,STZ的去除率逐渐降低,在pH值>7的条件下对STZ的去除率可以忽略不计。向反应体系中分别投加5 mmol/L的SO_(4)^(2-)和5 mmol/L的NO_(3)^(-)都可以有效促进STZ的降解,而5 mmol/L的Cl^(-)则会抑制STZ的降解。当向体系中投加小于5 mg/L的NOM则对STZ的降解的影响可以忽略不计。测定了体系中共有17种降解产物,并推测STZ通过取代反应、羟基化反应等方式逐步被降解。通过明亮发光杆菌发光值变化分析降解过程中溶液毒性的变化,测定发现STZ降解过程中急性毒性不高。实际水体试验结果表明,HA/H_(2)O_(2)系统对二级出水中的荧光类物质具有较好的降解效果。; 武玮郑伟杰许荣刚罗从伟任会学陈飞勇

H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化: 2024年; 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。; 屈小天王雅楠许倩茹李雪洋张申立张二芹张改平; 关键词：H5N1亚型禽流感病毒 HA蛋白蛋白质纯化

H5N8亚型禽流感病毒HA蛋白的原核及真核表达及兔多克隆抗体的制备: 2024年; 目的构建H5N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)HA基因的原核和真核表达载体,分别在E.coli Rosetta(DE3)和Sf9中进行表达,并制备兔多克隆抗体。方法采用RT-PCR扩增H5N8亚型AIV的HA基因,并将其克隆至原核表达载体pTac-His-MBP-PreScission中,再转化至Rosetta(DE3)中,利用IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE及蛋白免疫印迹(Western blot, WB)鉴定HA蛋白的表达,并优化IPTG浓度、诱导时间和温度以提高表达效率。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗H5N8亚型AIV的HA蛋白多克隆抗体,通过酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其特异性和效价。同时,将HA基因克隆到真核表达载体pFastBacHTA中,将其瞬时转染Sf9细胞并扩增3代,最后通过WB和间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay, IFA)验证表达产物。结果成功构建了HA基因的原核重组质粒pTac-HA-DE3和真核重组质粒pFast-HA。经SDS-PAGE及WB验证该蛋白分子质量约110 ku,最佳表达条件为IPTG浓度为0.8 mmol/L、温度37℃和诱导时间为4 h。ELISA检测显示兔多克隆抗体效价为1∶102 400。成功将真核重组质粒pFast-HA转化入DH10Bac感受态细胞中,证明HA基因成功转座。Bacmid-HA转染Sf9细胞后观察到细胞病变,WB和IFA检测表明重组杆状病毒Bac-HA感染的Sf9细胞能够表达HA蛋白。结论本研究初步探究了H5N8亚型AIV HA蛋白的表达条件及免疫原性,并且具有良好的免疫原性和反应原性,为后续建立ELISA诊断试剂盒及H5N8 AIV疫苗的研制提供了一定的参考价值。; 刘静王聪颖梁志鹏梁昭平刘闰栀张新宇何杰珩陈高婕闫战飞池仕红袁生郭锦玥黄淑坚温峰; 关键词：禽流感病毒 HA蛋白原核表达真核表达多克隆抗体

HA@Fe_(3)O_(4)修饰阳极增强微生物燃料电池降解类固醇雌激素: 2024年; 利用腐植酸(HA)与具有较强电容性的纳米Fe_(3)O_(4)颗粒形成的金属化合物(HA@Fe_(3)O_(4))修饰微生物燃料电池(MFC)阳极,探究含有以17α-乙炔基雌二醇(EE2)为代表性类固醇雌激素(SEs)的模拟废水在MFC阳极的降解特性,并对EE2降解过程中MFC的产电特性进行了表征。电化学交流阻抗测试结果表明,与不存在HA@Fe_(3)O_(4)的MFC相比,存在HA@Fe_(3)O_(4)的MFC的欧姆阻抗降低了79.58%,电荷转移阻抗降低了89.60%。循环伏安扫描结果显示,HA@Fe_(3)O_(4)的存在显著增加了阳极板的电容。HA@Fe_(3)O_(4)修饰阳极后MFC最大功率密度可达537.37 mW/m~2。HA@Fe_(3)O_(4)修饰的阳极可显著提高MFC对EE2的去除率,EE2在低浓度下(≤5.0μmol/L)可以介导电子转移,提高MFC的产电性能,进而提高MFC去除EE2的能力,但高浓度(5.0~10.0μmol/L)时会抑制微生物的活性并降低MFC产电效率。; 王昌鲁余厂黄斌来超超郭子维潘学军; 关键词：17Α-乙炔基雌二醇水处理技术

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