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王恒樑
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- 所属机构:上海海洋大学食品学院
- 所在地区:上海市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 冯尔玲
- 作品数：104被引量：248H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：志贺菌 双向电泳 炭疽杆菌 痢疾杆菌 基因敲除
- 朱力
- 作品数：69被引量：120H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：志贺菌 双向电泳 糖蛋白 蛋白质组学 细菌
- 刘先凯
- 作品数：49被引量：53H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：炭疽杆菌 炭疽芽孢杆菌 志贺菌 蛋白质组学 炭疽芽胞杆菌
- 黄留玉
- 作品数：248被引量：1,085H指数：17
- 供职机构：中国人民解放军
- 研究主题：布鲁氏菌 试剂盒 引物 核酸 基层医疗卫生单位
- 苏国富
- 作品数：105被引量：354H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：痢疾 疫苗 融合蛋白 痢疾杆菌 PCR
- 猪链球菌2型双组分信号转导系统gene0906-0907插入失活突变体的构建及活性分析被引量：3
- 2008年
- 目的:构建猪链球菌2型89K毒力岛上的双组分信号转导系统(TCSTS)gene0906-0907的插入失活突变株,分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病过程中的作用提供实验基础。方法:以猪链球菌2型05ZYH33基因组为模板,扩增gene0906-0907反应调节子gene0907内部的440bp片段为同源臂,并克隆到自杀载体pSET4s上,构建出插入失活载体pSET4s-P0907,将pSET4S-P0907转化05ZYH33,筛选出质粒整合到染色体gene0907内部的插入失活突变株05ZY△0907,PCR方法验证突变体。对突变株和野生株的生物学特性和小鼠致病性进行了初步比较。结果与结论:成功构建了89K TCSTS gene0906-0907插入失活突变株05ZY△0907,突变株的生物学特性和对小鼠的致病性与野生株相比差异不显著。
- 李文君袁媛郑玉玲王恒樑姜永强
- 关键词：猪链球菌2型
- 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点被引量：5
- 2014年
- 【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。
- 高志奇王东澍冯尔玲王秉翔惠一鸣韩少波焦磊刘先凯王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌分子分型
- 一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法
- 本发明公开了一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法。本发明提供了一种DNA分子，其核苷酸序列为序列表中的序列1。含有所述DNA分子的重组载体、转基因细胞系或重组菌。所述重组载体为将所述的DNA分子插入穿梭...
- 王恒樑刘先凯王东澍王华贵冯尔玲
- 文献传递
- 新型促细胞粘附重组人源性胶原的原核表达及功能性研究
- 2007年
- 选择一段与COL1A1基因相应序列同源、适合于在大肠杆菌E.coli中表达、含有编码促细胞粘附位点GER三肽密码子的基因序列。利用RT-PCR技术从人组织扩增该序列,构建pET28a(+)-COL重组表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。IPTG诱导表达获得重组人源性胶原RHDC,表达量达到菌体总蛋白的40%左右,SDS-PAGE和Western blot结果推测该胶原具有三螺旋结构,细胞粘附试验证明RHDC具有促细胞粘附能力,有应用于生物材料领域的潜力。
- 胡堃崔福斋徐莉王恒樑黄留玉
- 关键词：细胞粘附原核表达
- 一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用。该方法包括如下步骤：灭活甲型副伤寒沙门氏菌的O抗原链长控制酶基因cld，得到O‑抗原链长控制酶基因cld缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；使鼠伤寒沙门氏菌O抗原链长控制...
- 吴军孙鹏刘波唱韶红巩新王恒樑朱力潘超冯尔玲
- 文献传递
- 炭疽芽胞杆菌A16R株FtsE蛋白的可溶性表达和纯化
- 2014年
- 目的:构建炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白的原核表达载体,实现其在原核表达系统中的可溶性表达,并纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从炭疽芽胞杆菌A16R株扩增得到ftsE基因片段,酶切后连接到pET28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET28a-ftsE,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,筛选可溶性诱导表达与纯化融合蛋白的条件,以获得高纯度融合蛋白。结果:构建了FtsE蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;在20℃下,经0.1 mmol/L IPTG诱导3 h表达的产物主要是可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化获得了高纯度的FtsE融合蛋白,经Western印迹检测,目的蛋白表达正确。结论:实现了炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白原核表达系统的可溶性表达并获得了高纯度融合蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 李强刘先凯冯尔玲朱力王沛王红杨新华赵美玲姜永强王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌
- 弗氏2a志贺菌htrA基因突变体的构建
- 2011年
- 目的:构建弗氏2a志贺菌2457T的htrA基因缺失突变株及HtrA酶失活突变株,以便进一步研究HtrA蛋白的功能。方法:用PCR扩增htrA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对htrA基因进行缺失,用PCR进行验证;通过定点突变的方法构建HtrA酶失活突变株,并测序验证。结果与结论:构建了2457T htrA缺失突变株和2457T/htrAFSA酶失活突变株。
- 马姗姗朱力古月华刘先凯冯尔玲王恒樑
- 关键词：缺失突变体定点突变
- 志贺氏菌Ⅲ型分泌系统及其致病机理被引量：6
- 2010年
- 志贺氏菌的侵袭能力归功于其具有的特殊武器——Ⅲ型分泌系统,这方面的研究一直以来都是病原微生物领域关注的焦点,本文将对近年来志贺氏菌Ⅲ型分泌系统的研究进展进行简要综述。
- 朱力王恒樑
- 关键词：志贺氏菌致病机理
- 一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的重组融合蛋白的制备方法，是将重组融合蛋白和脑膜炎奈瑟球菌O‑寡糖转移酶PglL在O‑抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表达，脑膜炎奈瑟球...
- 吴军潘超孙鹏王恒樑刘波彭哲慧朱力唱韶红巩新冯尔玲王斌曾明
- 文献传递
- 生物法合成伤寒O-糖蛋白结合疫苗及其免疫原性评估被引量：3
- 2015年
- 伤寒由伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)引发,至今在发展中国家仍是备受关注的重要公共卫生问题。文章通过敲除伤寒菌脂多糖合成途径中O-抗原连接酶基因,转入含脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)蛋白糖基化途径中糖基转移酶的表达载体,以及改构的重组铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa)外毒素A(r EPAN29)的表达载体,使细胞内能够诱导合成以伤寒O特异性多糖(O-specific polysaccharides,OPS)为目标抗原、以r EPAN29为载体蛋白的伤寒OPS-r EPAN29糖蛋白复合物,并对纯化所得复合物进行了免疫原性评价。ELISA测定血清抗体滴度表明,r EPAN29作为载体蛋白能有效增加糖链的免疫原性,糖蛋白比单独的多糖能诱导产生更好的免疫应答;3次免疫、间隔3周比间隔2周Ig G滴度稍有提高;而免疫过量的糖蛋白,抗O-多糖的血清抗体效价并无提升。文章为生物法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了新思路,理论上也适用于其他革兰氏阴性菌的疫苗研发。
- 彭哲慧潘超孙鹏冯尔玲吴军朱力彭清忠王恒樑
- 关键词：结合疫苗伤寒沙门氏菌合成生物学
