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周辉云
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- 所属机构:浙江大学动物科学学院
- 所在地区:浙江省 杭州市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 宋成义
- 作品数：121被引量：536H指数：11
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院
- 研究主题：转座子 斑马鱼 苏姜猪 ESR基因 多态性
- 高波
- 作品数：87被引量：289H指数：8
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院
- 研究主题：转座子 斑马鱼 克隆 真核表达 猪精子
- 吴晗
- 作品数：16被引量：54H指数：4
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院
- 研究主题：精子 克隆 生殖道 ESR 质粒DNA
- 李艳华
- 作品数：8被引量：15H指数：3
- 供职机构：浙江大学动物科学学院
- 研究主题：MIR 肝脏 猪肝脏 阉割 MICRORNA-21
- 王宵燕
- 作品数：69被引量：300H指数：9
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院
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- 影响猪精子介导基因转移效果的因素研究
- 2012年
- 为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。
- 宋成义吴晗周辉云谢雨琇李庆平高波王宵燕李碧春毛九德
- 关键词：精子
- 猪垂体特异性转录因子1基因cDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 本试验根据公开发表的猪POU1F1基因序列设计1对引物,提取猪垂体总RNA,通过RT-PCR方法扩增出POU1F1基因cDNA全序列,扩增产物用琼脂糖凝胶检测为预期的876 bp特异性条带。将扩增产物克隆入PTZ57R/T载体进行序列测定。经DNAStar软件分析序列与已发表序列同源性为99.7%,克隆获得的序列为进一步对猪POU1F1基因不同拼接形式功能性研究奠定了基础。
- 孙丽亚宋成义高波赵芹王宵燕周智慧王升智周辉云李碧春
- 关键词：POU1F1CDNA克隆
- SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究
- 2011年
- 为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达。定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mR-NA表达。半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄)。其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P<0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P<0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P>0.05)。这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高。
- 宋成义高波王宵燕吴晗周辉云李碧春陈国宏毛九德
- 关键词：生殖道RT-PCR
- 精浆浓度对17℃保存下猪精子活率和活力的影响被引量：2
- 2011年
- 为了解精浆浓度对精子常温保存的影响,对含不同浓度精浆的商业化CXM稀释剂和自制稀释剂的精液于17℃下的保存效果进行比较。结果表明:当稀释剂为CXM时,25%精浆获得了最好的保存效果,含0、5%精浆也有较好的保存效果;而使用自制稀释剂时,含50%、75%精浆获得了较好的保存效果,其次是含25%精浆。说明在常温保存中一定浓度的精浆有利于维持精子的活力和活率,但这与稀释剂组成有关。在实际生产应用中,在稀释剂中约添加25%精浆对维持精子在常温保存中的活力和活率可能有较好效果。
- 宋成义周辉云查丽莉黄继荣吴晗
- 关键词：精浆精子活率
- 若干精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的mRNA表达研究
- [目的] 揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律.【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,...
- 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德
- 关键词：精子抗原生殖道精子
- 精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性被引量：4
- 2010年
- 【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P<0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P<0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P<0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P<0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。
- 宋成义高波吴晗王霄燕王升智周辉云陈国宏毛九德
- 关键词：精子抗原生殖道精子
- 猪miR-let-7i的组织表达谱分析被引量：1
- 2015年
- Let-7是最早发现的miRNA之一,参与动物多个器官发育的调控过程,也在多种癌症发生中发挥抑癌作用。本研究采用Rt-qPCR(PCR)方法首先检测金华猪不同发育时期肝脏组织中let-7家族成员之一的miR-let-7i的表达变化,同时比较金华猪和大约克猪心、肝、脾、肺、肾、胰脏、小肠和皮脂中miR-let-7i的表达差异。结果表明:miR-let-7i在金华猪肝脏发育过程中表达总体趋势为胚胎期低于生长阶段,幼年期低于成年期;比较不同猪种间组织表达差异发现,在胚胎80d时,miR-let-7i在小肠中的表达量最高,在心、肝、脾、肺、小肠、皮脂中,金华猪的相对表达量极显著高于大约克(P<0.01),而在肾和胰脏中的表达却极显著低于大约克(P<0.01)。在出生后90日龄时,miR-let-7i在金华猪的心、肺和小肠中表达较高,在约克猪的胰、心和脾脏中表达较高;金华猪的肝、脾、胰脏中miR-let-7i的表达量极显著低于大约克(P<0.01),而在肺、肾、小肠、皮脂中极显著高于大约克(P<0.01)。本研究为探究miR-let-7i在动物发育过程的功能和分子机制奠定了基础。
- 赵俊生李艳华周辉云徐宁迎
- PRLR、RBP_4基因与苏姜猪繁殖性能的相关性分析被引量：11
- 2011年
- 采用PCR-RFLP方法对71头苏姜猪的PRLR基因、RBP4基因的多态性进行了检测,分析不同多态性间繁殖性能的差异,探讨将PRLR基因、RBP4基因作为标记辅助选择用于苏姜猪核心群选育的可行性,从DNA水平上为苏姜猪的选育提供技术性支持。结果表明:PRLR、RBP4两个基因位点在苏姜五世代母猪中均存在多态性。在该试验中,PRLR基因、RBP4基因各自基因型的效应差异均不显著(P>0.05),合并基因型的效应显著(P<0.05),可以联合标记用于苏姜猪核心群的选育。
- 何庆玲王宵燕经荣斌李碧春王升智周辉云
- 关键词：苏姜猪PRLR基因RBP4基因繁殖性能
- MicroRNA-21参与调控金华猪肝脏生长发育被引量：4
- 2013年
- microRNAs是一种小分子非编码RNA,广泛参与细胞的生长发育、分化和凋亡等生物学过程.microRNA-21(miR-21)是一个在实体肿瘤中高表达的miRNA,可促进癌细胞增殖.为了研究miR-21在金华猪生长过程中的作用,本试验选取了金华猪80日龄胚胎的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胰脏、皮脂组织,进行miR-21组织表达谱研究,结果发现miR-21在肝脏中的表达最高.进一步以肝脏为对象,研究miR-21在金华猪不同生长阶段中的表达,结果显示胚胎80日龄的miR-21表达量最高(P<0.01),其次是胚胎期的60日龄和105日龄,出生后1至120日龄miR-21的表达量均维持在较低的水平且相互之间差异不显著(P>0.05).利用KEGG软件对miR-21预测的靶基因进行通路归类分析表明,miR-21参与细胞代谢、生长等过程,从中选择2个抑制细胞增殖的靶基因,增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein,Cebpa)和原肌球蛋白1基因(tropomyosin 1,Tpm1),qRT-PCR检测二者在不同生长阶段的mRNA表达量,结果其表达趋势与miR-21相反,其中胚胎期80 d表达量最低(P<0.05).综上表明,miR-21可能具有促进胚胎肝脏生长的作用.
- 李艳华马义涛周辉云王颖徐宁迎
- 关键词：MICRORNA-21金华猪肝脏
- 猪精浆蛋白基因PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ启动子序列克隆及生物信息学分析
- 2011年
- 分别用PCR方法扩增了1.7kbp和1.6kbp的猪PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因的启动子,并进行TA克隆,测序鉴定,测序结果用DNAstar程序与Genebank中的相应序列进行对比分析,结果显示与已发表序列的同源性分别为99.8%和96.3%。利用生物信息学的方法对克隆的1.7kbp和1.6kbp的猪PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因的启动子区进行了预测分析。PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ基因序列对比(mVista)分析发现,启动子0→-1000bp的保守性较高,其中0→-200bp核心启动子部分的序列同源性达到了100%,而-1000bp上游序列的保守性则较低。启动子的位置预测(Promoter Scan)结果显示,转录起始点上游200bp的区域为两基因的核心启动子位置。启动子区转录因子结合位点预测(TFSEARCH)发现,转录起始位点上游的1000bp区域内含有大量的顺式调控元件,并且得到了一系列潜在的转录因子结合位点。
- 周辉云李庆平吴晗何庆玲宋成义陈国宏
- 关键词：启动子
