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胡晓梅
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- 所属机构:第三军医大学
- 所在地区:重庆市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 饶贤才
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- 胡福泉
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- 黎庶
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- 李明
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- 重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选被引量：1
- 2004年
- 目的 测定重组人肽抗生素 h PAB- β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法 应用平板法和 MIC测定法检测重组表达的 h PAB- β及突变体 h PAB- β38、h PAB- β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素 h PAB- β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目标分子 ,并分析突变体结构的变化对其功能的影响。结果 重组 h PAB- β及突变体 h PAB- β38与化学合成的天然分子抗菌活性相当 ,对革兰氏阳性菌的 MIC在 12 5～ 2 5 0 μg/ml之间 ,对革兰氏阴性菌的MIC在 31～ 12 5 μg/ml范围内 ;突变体 h PAB- β34活性下降 4倍左右 ;结构分析表明 h PAB- β38与 h PAB- β参与二级结构中 α螺旋和 β片层构成的氨基酸残基完全相同 ,而 h PAB- β34则有显著不同 ,α螺旋少了 2个残基 ,3个 β片层中除 β2与 h PAB- β相同外 ,β1和 β3的构成均多 2个残基 ,推测 h PAB- β34二级结构的改变是其活性降低的主要原因。结论 重组肽抗生素 h PAB- β具有抗菌活性 ,删除 3个端残基的突变体 h PAB- β38活性不变 ,可作为 h PAB- β走向临床应用的一个新侯选者。
- 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉
- 关键词：肽抗生素突变体抗菌活性
- 重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化
- 2004年
- 目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。
- 胡金川汪正清胡福泉金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军陈志瑾饶贤才
- 关键词：抗生素重组蛋白纯化融合蛋白
- pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。
- 李欢胡晓梅杨杰饶贤才丛延广黎庶周莹冰朱军民胡福泉
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白基因克隆蛋白表达蛋白鉴定
- 改革教学方法和教学手段,提高微生物学教学质量被引量：16
- 2005年
- 探讨改革微生物学教学的方法、手段及效果.根据不同的微生物学课程内容,灵活运用"问题式"、"讨论式"、"学导式"等不同的教学方法,寓法于文,文法结合;充分利用多媒体网络为代表的现代教育技术手段,取得了明显的教学效果.
- 汪正清黎庶谭银玲朱军民胡晓梅程小星
- 关键词：教学方法教学手段教学质量微生物学教学多媒体网络讨论式学导式
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的结构蛋白及其编码基因的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸残基序列在PaP2预测基因编码的蛋白质中检索 ,从而逆推其编码基因。 结果 :SDS PAGE显示PaP2含有 10条带 ,其中 1、3、4、5、8、9等 6条带的含量足以回收进行N端测序 ,测得N端氨基酸残基分别依次为 :Met Ile Glu Leu Gly、Ala Ile Ser Pro、Ala Arg Phe Ile Asp、Ser Val Tyr Ala Gly、Ala Ile Ser Arg Asn 和Ser Phe Ser Leu Gly。据此推论出它们的编码基因分别是ORF18340 2 3889、ORF4 4 19 6 4 19、ORF16 5 89 1832 2、ORF82 74 95 30、OrF15 70 8 16 6 2 5、ORF75 6 3 830 9。 结论 :噬菌体PaP2含有 10个结构蛋白 ,其中 6个主要结构蛋白的编码基因分别是orf 2 4、orf 8、orf 2 3、orf 12、orf 2 2、orf 11。
- 黄建军胡晓梅朱军民申晓冬李明饶贤才胡福泉
- 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体编码基因
- 对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法 将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果 第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分子 ;再次电泳回收的单一目的片段中 ,肉眼已看不见其它DNA分子 ,其纯度已大为提高 ;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段。结论 琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开 ,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子。
- 黄建军饶贤才胡晓梅金晓琳朱军民胡福泉
- 关键词：DNA琼脂糖凝胶电泳
- 铜绿假单胞茵噬菌体PaP3生物学特性的研究
- 噬菌体是在细菌体内营高度寄生的非细胞型生命现象。临床分离的细菌几乎均带有噬菌体,具有极大的多样性。因此,分离鉴定新的噬菌体并认识其基本生物学特性是生命科学的一个热点领域。噬菌体PaP3(Pseudomonas aerug...
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- 文献传递
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1内溶素基因克隆、表达及活性分析被引量：5
- 2008年
- 目的构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性。方法利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组融合蛋白,利用酶谱电泳、抑菌实验等技术检测酶学活性及抑菌活性。结果酶谱电泳方法结果显示重组融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖有降解作用,抑菌活性检测结果显示重组融合蛋白对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果。结论该研究从实验方面证实了噬菌体PaP1内溶素基因的生物学功能。
- 孙卫忠胡晓梅饶贤才谭银玲陈志谨丛延广胡福泉
- 关键词：噬菌体基因表达活性鉴定
- 课堂知识,课后延伸——记本科生《医学微生物学》第二课堂活动被引量：1
- 2011年
- 第一课堂知识的传授是目前高校培养人才的主要阵地,而第二课堂教学则是第一课堂的拓展和延伸,对于拓宽学生学习的深度和广度,提升学生的创新思维能力有重要作用。《医学微生物学》是一门形态学学科,也是一门重要的基础与临床的桥梁课。近年来,我教研室针对医学微生物学教学特点,精心组织并开展了以学生为中心的第二课堂教学活动。实践效果证明第二课堂教学以其内容上的新颖性和形式上的灵活性,激发了学生对医学微生物学的学习兴趣,使学生的课堂知识在课后得到有效延伸,有助于学生思维能力、实践能力和创新能力的培养,提高了学生的综合素质。
- 饶贤才袁文常胡晓梅
- 关键词：第二课堂医学微生物学
- 铜绿假单胞菌外毒素A全长基因的扩增与克隆被引量：8
- 2003年
- 目的 从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法 从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论 成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。
- 胡晓梅胡福泉饶贤才黄建军金晓琳
- 关键词：铜绿假单胞菌扩增克隆
