海南省自然科学基金(310106)
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 相关作者：高慎阳李丹丹王绥家李一经马广鹏更多>>
- 相关机构：辽宁医学院海南出入境检验检疫局东北农业大学更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 间接竞争性ELISA法快速诊断TGEV的研究被引量：3
- 2012年
- 利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中的最佳反应条件。在间接竞争性ELISA中,最佳抗原包被量为0.25μg/孔;竞争抗原与单克隆抗体作用的最适时间为1h,反应温度为37℃;选择1h作为酶标抗体作用的最佳时间;底物液最佳作用时间为10min;选择样品的抑制率50%为其临界值;所用封闭液0.5%的聚乙烯醇PBS溶液在4℃冰箱中可密封保存6个月,封闭时间为120min;特异性试验表明与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。本试验建立的间接竞争性ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定了基础。
- 李丹丹朱振营徐义刚刘志强高慎阳李一经
- 关键词：TGEV单克隆抗体
- 动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 根据志贺氏菌属高度保守的ipaH基因序列,设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物源性食品中志贺氏菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物源性食品中志贺氏菌的快速检验。结果表明,该法灵敏度约为2.8 cfu·mL-1,经对205份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出13份阳性样本,与国标(GB 4789.5-2012)方法的检测结果一致。表明建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经
- 关键词：志贺氏菌IPAH基因荧光定量PCR
- 动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：8
- 2014年
- 根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳马广鹏
- 关键词：沙门菌实时荧光定量PCR
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL,对310份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出阳性样本20份,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。表明建立的实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。
- 李丹丹徐义刚王绥家高慎阳李一经
- 关键词：H7荧光定量PCR
