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非糖基化促红细胞生成素的聚乙二醇定点修饰及修饰产物性质被引量：7: 2010年; 临床用重组人促红细胞生成素(rhEpo)是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)表达的糖蛋白,糖基对稳定蛋白的结构和生物活性非常重要,但CHO表达体系生产成本高、产量低.以大肠杆菌表达的促红细胞生成素为非糖基化蛋白(rh-ngEpo),对其进行聚乙二醇(PEG)修饰可以提高蛋白稳定性和体内循环半衰期.本文采用分子量为20000的N-末端专一性的单甲氧基聚乙二醇-丙醛(mPEG-ALD)修饰rh-ngEpo,对影响修饰反应的因素进行了考察.结果表明,在最佳反应条件下,单修饰率可达55%.修饰混合物经离子交换层析分离,获得了纯度大于95%的单修饰产物,其二、三级结构证明与原蛋白相似.肽图分析结果表明,PEG绝大部分修饰在蛋白N-末端的氨基酸残基上.ELISA分析表明,单修饰产物的体外活性虽然比修饰前减少30%,但热稳定性得到显著增强,在SD大鼠体内的药代动力学性质得到显著提高.研究结果表明,PEG可以在一定程度上替代糖基的作用,PEG修饰的非糖基化Epo有望成为一种新型的促红细胞生成蛋白药物.; 郝素娟汪音爵康爱君刘永东李秀男石红马润宇马光辉苏志国; 关键词：促红细胞生成素聚乙二醇修饰

PEG-MAL修饰蛋白中硫醚键在常规电泳分析的不稳定现象: 聚乙二醇修饰是一种有效改善药用蛋白在体内的成药性的技术手段。SDS-PAGE是除了高效液相之外最常采用的用于表征PEG修饰蛋白的分析技术,包括纯度分析,修饰率、反应收率分析,修饰度分析等。然而在采用常规分析手段对经聚乙二...; 张纯刘永东苏志国余蓉

PEG-MAL修饰蛋白中硫醚键在常规电泳分析的不稳定现象: <正>聚乙二醇修饰是一种有效改善药用蛋白在体内的成药性的技术手段。SDS-PAGE是除了高效液相之外最常采用的用于表征PEG修饰蛋白的分析技术,包括纯度分析,修饰率、反应收率分析,修饰度分析等。然而在采用常规分析手段对经...; 张纯刘永东苏志国余蓉; 文献传递

层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质: 2010年; 为建立一种基于阴离子交换介质辅助的含多对二硫键的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽．瑞替普酶融合蛋白质（HV12p—rPA）的复性方法，采用Q Sepharose XL作为层析复性介质，通过正交实验考察蛋白质上样量、流速、脲梯度、洗脱液中精氨酸浓度、脲浓度、pH、还原型及氧化型谷胱甘肽等因素对复性过程的影响，探索最佳层析复性条件。结果表明：脲梯度、上样量及精氨酸浓度是影响复性的3个主要因素。脲梯度是复性成功的关键，上样量增大时复性蛋白质比活降低，精氨酸辅助HV 12p—rPA复性的最佳浓度为1mol／L。创建了脲、pH双梯度下的阴离子交换层析辅助HV12p—rPA的复性方法，复性后蛋白质的溶栓比活达到46520IU／mg，抗凝比活达到9980ATU／mg，与稀释复性方法相比，该方法能使复性蛋白质的溶栓比活提高14～15倍，抗凝比活提高7～8倍。; 谢伟全张贵锋高玲刘永东余蓉苏志国; 关键词：复性二硫键

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国家自然科学基金(20976178)