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利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒MP互作的寄主因子被引量：2: 2015年; 为了找到与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)运动蛋白(Movement protein,MP)互作的寄主因子,首先构建了ACLSV MP酵母双杂交诱饵载体,然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)cDNA文库中筛选互作基因;在GenBank中对互作寄主基因进行BLAST分析,根据基因注释推测其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。结果表明,构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-MP无自激活性、无毒性。筛选到69个与ACLSV MP互作的苏俄苹果寄主因子,包括水解酶活性、病程相关蛋白、氧化还原酶活性、磷酸酶活性、催化活性、连接酶活性、苯丙氨酸解氨酶活性、过氧化物酶活性、DNA结合功能和未知蛋白,共10类不同功能的蛋白。通过生物信息学分析,推断蛋白磷酸酶、病程相关蛋白及3-磷酸甘油醛脱氢酶可能在互作过程中起重要作用。该研究为深入了解ACLSV致病特征及病原与寄主互作机制奠定基础。; 何乙坤钟敏张瑜王亚南曹克强; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交

黄瓜绿斑驳病毒人工诱变方法的研究被引量：3: 2014年; 以黄瓜绿斑驳病毒(Cucumber green mottle mosaic virus)野生株系为试材,采用高温处理、亚硝酸处理及复合处理对其进行人工诱变,比较3种诱变方法致弱效果。结果表明:3种方法均具有削弱病毒群体在苋色藜上枯斑扩展的能力,野生株系接种苋色藜后,直径小于1mm枯斑比率为1.99%,亚硝酸处理、高温处理、复合处理小枯斑比率分别为11.41%、12.87%、14.20%,复合处理致弱效果最好。该结果有助于快速有效的筛选CGMMV弱毒株,也将为弱毒疫苗的开发和致病相关基因功能的研究奠定基础。; 钟敏赵绪生何乙坤王亚南曹克强; 关键词：人工诱变弱毒株

苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的鉴定: 苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leafspot virus,ACLSV）是苹果上危害最大的一类潜隐性病毒,广泛分布于世界各地。该病毒单独侵染或与其他病毒混合侵染严重影响果树产量及果实品质,造成严重的经...; 王亚迪李楠吕运霞王树桐胡同乐王亚南曹克强; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交; 文献传递

苹果ACLSV CP基因酵母双杂交诱饵载体构建及自激活鉴定: 构建了用于苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorot(i)c leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)酵母双杂交试验的诱饵载体,并进行了自激活及毒性验证。以含有ACLSV ...; 段豪王亚南曹克强; 关键词：酵母双杂交诱饵载体

黄瓜绿斑驳病毒河北分离物基因组克隆及序列分析被引量：4: 2015年; 为揭示河北省黄瓜绿斑驳病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)分类地位及系统进化情况,通过分子克隆测定了来自河北省西瓜产区分离获得的分离物CGMMV-chb的近全基因组序列,分析其基因组结构特征;并依据近全基因组核苷酸序列及外壳蛋白氨基酸序列进行了系统进化关系分析。结果表明,CGMMV-chb近全基因组大小为6 383 nts,Gen Bank登录号为KJ658958,含4个开放阅读框,编码4种蛋白;与Gen Bank库中的其它12个CGMMV分离物的核苷酸相似性为92%~100%,氨基酸相似性为98%~100%。CGMMV-chb与韩国分离物CGMMV-KW基因序列相似性最高,为98%~100%,与以色列分离物CGMMV isolate Ec基因序列相似性最低,为92%~99%;系统进化关系中CGMMV-chb与其它中国分离物、日韩分离物亲缘关系较近,处于同一亚组的不同分支中,与以色列分离物亲缘关系相对较远。; 钟敏赵绪生胡同乐王树桐王亚南曹克强; 关键词：基因组

黄瓜绿斑驳病毒河北分离物外壳蛋白基因序列分析及其分组被引量：3: 2015年; 为了揭示黄瓜绿斑驳病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）河北分离物分子变异及系统进化情况。本研究自河北省5个代表性西瓜产区采集病样,分离纯化获得5个CGMMV河北分离物,经RTPCR扩增、基因克隆获各分离物的外壳蛋白（Coat protein,CP）基因序列。使用Vector NTI 10.0软件（Informax,Frederick,MD,USA）和MEGA5.0软件（Koichiro,Tokyo,Japan）对河北省5个分离物及GenBank已登录其它分离物CP进行序列分析,构建系统发育树。系统进化关系分析表明：所有CGMMV分离物可划分为5个组,CGMMV河北分离物与中、日、韩三国分离物亲缘关系较近,位于同一组别。与希腊2个分离物（CGMMV-GR5、GR3）亲缘关系最远。CGMMV CP序列相似性分析结果表明：河北省5个分离物CP核苷酸、氨基酸序列相似性在99%~100%之间,与其它17个分离物序列相似性在92%~100%之间。与中国LN及Liaoning两个分离物及韩国Watermelon分离物相似性最高为100%,与希腊2个分离物（GR5、GR3）序列相似性最低为92%~99%。揭示了CGMMV河北分离物的分类地位及其与不同来源分离物之间的遗传进化关系,为进一步研究CGMMV株系划分、基因遗传变异提供了理论基础。; 钟敏赵绪生何乙坤胡同乐王树桐王亚南曹克强; 关键词：外壳蛋白系统进化关系

利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子被引量：2: 2014年; [目的]利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[方法]首先构建ACLSV CP的酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold中,测定转化菌在SD/-Trp、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上的生长情况,从而判断其在酵母双杂交过程中对报告基因的自激活活性。将p GBKT7-CP及p GBKT7分别转化至酵母菌株Y2H gold,培养不同时间后,用紫外分光光度计测定OD600值,分析p GBKT7-CP对酵母菌生长的影响;然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)c DNA文库中钓取与ACLSV CP互作的因子,最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选生长良好的蓝色阳性菌落,测定序列,并在Gen Bank中对其进行BLAST分析,根据基因注释推断其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[结果]成功构建了酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold后,转化菌只能在SD/-Trp平板上正常生长,不能在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上生长,表明重组质粒自身不能激活报告基因His及Ade的表达,没有自激活活性。酵母双杂诱饵载体p GBKT7-CP与对照空质粒转化菌生长情况相似,证明诱饵载体对酵母菌没有毒性;筛选到了69个互作寄主基因,包括转录因子活性、碳固定活性、细胞内铁离子平衡、防御反应、水解酶活性、氧化酶活性、氧化还原酶活性、光系统II组件、绑定蛋白等10类蛋白,经生物信息学分析,其中8个寄主基因(Malus3-1、Malus4-2、Malus4q1、Malus31-3、Malus49q2、Malus15-1、Malus6-2、Malus91-4)可能在病毒与寄主互作过程中起重要作用。[结论]分析筛选到的重要寄主蛋白功能,推测ACLSV CP与BZIP类、MYB类转录因子、病程相关蛋白(PR-5、PR-8、PR-10)互作,可�; 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交

利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子: 利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,了解其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。...; 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交; 文献传递

我国苹果褪绿叶斑病毒的发生及分子变异: 苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leafspot virus,ACLSV)是苹果上为害最大的一类潜隐病毒,世界性分布。本研究通过对我国13个省(市/区)的苹果产区327份疑似病毒病样本的RT-PCR检测...; 钟敏何乙坤冀志蕊王亚南曹克强; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒分子变异; 文献传递

苹果ACLSV CP基因酵母双杂交诱饵载体构建及自激活鉴定: 构建了用于苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV）外壳蛋白（coat protein,CP）酵母双杂交试验的诱饵载体,并进行了自激活及毒性验证。以含有ACLSV CP...; 段豪王亚南曹克强; 关键词：酵母双杂交诱饵载体

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国家自然科学基金(31201487)

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