上海市科学技术委员会资助项目(04JC14041)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：卢健钱关祥葛盛芳俞海徐荣婷更多>>
- 相关机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 特异AT序列结合蛋白-1促进胰岛素样生长因子结合蛋白-2在K562细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1(special AT-rich sequence binding protein,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcDNA3.1-SATB1转染至K562细胞,通过6周G418的筛选获得阳性克隆,RT-PCR、实时PCR及Western印迹验证过表达情况,对阳性克隆细胞中IGFBP2的表达用RT-PCR、实时PCR及Western印迹方法进行检测;然后用RNAi的方法干扰阳性细胞中SATB1的表达后,同样用上述3种方法再次检测IGFBP2的表达状况;用生物信息学方法对IGFBP2基因进行MAR序列与SATB1结合位点搜索分析,寻找SATB1影响IGFBP2基因表达的机制.结果显示,在稳定转染的情况下,实验组K562-SATB1细胞与转染空载体pcDNA3.1的K562-3.1细胞和未转染细胞K562相比,IGFBP2 mRNA水平上调了近7倍,而蛋白水平变化不明显.RNA干扰后,IGFBP2的表达在mRNA水平也相应下调,蛋白水平的变化同样不明显.通过生物信息学分析发现,IGFBP2第1个内含子中可能存在2.5 kb MAR样序列,且MAR样序列上存在多个SATB1的潜在结合位点.综上所述,过表达SATB1可以使K562细胞中IGFBP2 mRNA表达水平提高,而且其调控机制可能与SATB1直接和IGFBP2基因中的MAR样序列结合有关.
- 乔福锋蔡蓉蔡霞许伟榕卢健
- 关键词：核基质结合区胰岛素样生长因子结合蛋白-2K562细胞
- 过表达Notch1对肿瘤细胞增殖的影响被引量：4
- 2007年
- 目的通过在肿瘤细胞内过表达Notch1胞内段活性部分,模拟细胞Notch途径的上调,检测细胞增殖状态的变化。方法利用包含Notch1胞内段的逆转录病毒感染实验细胞。通过CBF-1报告载体检测细胞内Notch信号的激活程度,MTS法检测细胞增殖情况,并对细胞的周期分布进行检测。结果Notch1胞内段的表达引起Notch信号在不同细胞中的上调,并引起Hela和HepG2细胞的增殖抑制和BGC-823细胞的增殖加速,而对Chang细胞的增殖没有明显影响。结论Notch信号的上调能引起不同肿瘤细胞增殖状态的变化,对Notch在肿瘤基因治疗中的应用具有重要意义。
- 俞海葛盛芳卢健钱关祥
- 关键词：NOTCH肿瘤基因治疗
- 核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达被引量：1
- 2006年
- 目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶链反应检测EGFP表达阳性的COS-7细胞比例、荧光表达强度及EGFP基因的转录。通过Southern印迹和质粒还原实验分析质粒DNA在细胞中存在的形式。结果本实验构建的重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在转染进入COS-7细胞后以染色体外附着体的形式存在。由于EBVR的存在,可以在体外获得EGFP较长时间的稳定表达。IFN-MAR替代O riP后,仍可在体外获得EGFP的稳定表达。结论MAR修饰的EBV附着体载体可以在体外获得外源基因高效稳定的表达。
- 梅文瀚吴兆平徐荣婷钱关祥卢健
- 关键词：EB病毒复制子核基质结合区
