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表面等离子体共振传感器技术在检测甲型流感病毒中的应用研究被引量：3: 2011年; 目的建立一种基于表面等离子体共振传感器技术检测人类甲型流感病毒的方法,并进行初步诊断应用。方法分别设计基于甲型流感M基因的引物和探针,制备RT-PCR扩增产物,优化并确定基于传感技术的实验条件,建立高灵敏度和高特异度的表面等离子体共振传感器方法。结果缓冲液的盐离子强度和pH值是影响杂交效果的关键因素,对其优化后标准曲线参数良好,甲型流感病毒标准品的Ru值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好的线性关系(R2>0.99),同时,该传感器在200 mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液中可以有效区分DNA的完全匹配与单碱基错配,以乙型流感探针作为质控,该探针并不与甲型流感扩增产物发生特异性杂交。结论成功建立了高灵敏度和高特异度的甲型流感病毒表面等离子体共振传感器检测方法,为临床诊断或感染病例提供了技术平台。; 滕娟徐云庆顾大勇史蕾刘春晓赵纯中杨燕秋孙秋香欧青叶季明辉; 关键词：甲型流感病毒

SPR传感技术在呼吸道病毒检测中的应用被引量：1: 2012年; 呼吸道病毒感染是临床最常见的疾病之一，目前已证实，95％的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病均由呼吸道病毒感染引起，主要包括流感病毒A（InfluA）、流感病毒B（InfluB）、副流感病毒1（PIV1）、副流感病毒2（PIV2）、副流感病毒3（PIV3）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）等^[1]。近年来，新的致病性病毒不断被发现，如SARS-冠状病毒、; 孙秋香史蕾顾大勇; 关键词：表面等离子体共振呼吸道病毒

分枝PEI修饰的PLGA纳米粒转染DNA的研究: 2012年; 目的:建立基于聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLGA)载DNA的基因转染体系,比较用空白聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLG-A-E)吸附质粒DNA和用分枝PEI修饰后的PLGA纳米粒(PLGA-BPEI)吸附质粒DNA优缺点。方法:用乳化蒸发法制备纳米粒,对纳米粒进行表征研究,包括包封率、Zeta电位、粒径大小、稳定性,用荧光显微镜观察它们对NIH3T3和HEK293细胞的转染效率,用MTT检测对它们细胞的毒性。结果:制备了两种基于PLGA的纳米粒,PLGA-E和PLGA-BPEI粒径大小为200-270nm,zeta电位为0-30mV,在血清和不同的pH值时两者均较稳定,转染效率PLGA-BPEI较PLGA-E高,且释放时间早,但前者较后者对细胞毒性大。结论:这两种基于PLGA纳米粒均能有效转染质粒DNA,它们存在不同的优缺点,应根据不同需要进行选择。; 季明辉胡贵方顾大勇谢伟东谈书勤徐华欧青叶; 关键词：纳米粒基因转染

利用滚环扩增技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因单碱基突变被引量：3: 2013年; 目的应用滚环扩增(rolling circle amplification)技术建立对结核分枝杆菌耐药基因单碱基突变的快速检测方法。方法以结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因为研究对象,设计针对该基因常见突变位点的锁式探针。通过对突变型模板、野生型模板、非结核分枝杆菌基因序列模板及不同比例的突变型模板和野生型模板混合样本的检测,研究本实验方法的特异性和灵敏度。建立特异性地检测rpoB基因单碱基突变的滚环扩增方法。通过对临床样本的检测并与测序结果比较,评价该方法的临床应用价值。结果通过优化反应条件,应用滚环扩增技术能特异性的检测出结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的单碱基突变。通过对含有不同比例突变型模板的混合样本检测,最低能检测出1%突变型/野生型模板的样本。80株临床样本的检测与测序结果一致。结论滚环扩增技术特异性高、灵敏度高,无需特殊昂贵仪器且简单易操作,能够快速有效的检测出耐药结核的单碱基突变,是具有临床应用前景的方法。; 张江峰张亚丽曾照芳顾大勇鲁卫平; 关键词：滚环扩增结核分枝杆菌耐药 RPOB基因

表面等离子共振技术结合滚环扩增法检测丙型肝炎病毒: 2012年; 目的研究滚环扩增(RCA)技术结合特异性表面等离子共振(SPR)金膜芯片检测丙型肝炎病毒(HCV)的方法。方法根据丙型肝炎x-tail区域的特异检测序列,设计并合成针对RCA法检测HCV的探针和引物,分成3组(实验组、阴性样品组和阳性样品组)进行RCA实验,验证RCA法检测HCV的特异性。将模板浓度按10倍梯度稀释,评价SPR技术结合RCA法检测的检测限。在普通金膜芯片的基础上进行表面化学处理,形成高特异性核酸芯片,用抗蛋白实验验证芯片抗蛋白能力。采用双通道SPR仪对RCA反应及信号放大反应进行实时观测。运用SPR技术结合RCA法检测63例临床血液样品,并与Real-Time PCR法比较,评价其灵敏度和特异度。结果 SPR技术结合RCA法对HCV阳性标准品的最低检测浓度为1 pmol/L,低于Real-TimePCR法的检测限(0.1 nmol/L)。SPR芯片具备良好的抗蛋白质非特异性吸附能力。双通道SPR仪对RCA芯片系统的检测信噪比为100,实现了对HCV的检测。对临床样品的检测灵敏度为90.0%(27/30),特异度为84.8%(28/33)(χ2=8.10,P=0.004)。结论 SPR技术结合RCA法将生物传感技术及原位扩增技术相结合,实现了快速、非标记和实时检测HCV。; 季明辉胡贵方郑义顾大勇龙军鲁卫平何建安谈书勤史蕾刘春晓赵纯中徐云庆徐华欧青叶孙秋香滕娟; 关键词：表面等离子共振丙型肝炎滚环扩增

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深圳市科技计划项目(HZ0907004)

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