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长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的促凋亡作用及其机制被引量：2: 2010年; 目的:观察长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞促凋亡作用,探讨其引起细胞凋亡的分子机制。方法:以0、5、10、20、50、100μg.L-1不同浓度长春新碱处理的MG63细胞,分别经AnnexinV-PI双染和DCFH-DA染色后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧化物(ROS)水平,用实时定量RT-PCR分析mRNA表达水平。结果:较低浓度(10μg.L-1)长春新碱即可使MG63细胞凋亡率升高至17.6%(P<0.05),且随着长春新碱浓度的增加细胞凋亡率增加,呈明确的剂量-效应关系;更低浓度(5μg.L-1)长春新碱即可引起细胞内ROS水平明显升高及过氧化氢酶(CAT)基因表达下调(P<0.05)。结论:长春新碱从较低浓度起即有促进细胞凋亡作用,其作用机制是通过下调CAT基因表达,导致细胞内ROS异常蓄积以促进MG63细胞凋亡。; 王洋苏学今曲珊珊娄楠张海英史艳芬李玉林李荣贵; 关键词：MG63 长春新碱 CAT

亚砷酸钠对血管增殖效应的体内体外研究被引量：1: 2010年; 目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对血管的增殖效应,为地砷病的血管病变提供理论依据。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型研究亚砷酸钠体内对血管增生影响;以人脐静脉内皮细胞(HUV-EC)作为亚砷酸钠对血管增殖的体外研究模型,经Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定HUV-EC细胞增殖;实时定量RT-PCR检测c-myc、c-jun mR-NAs表达水平。结果 NaAsO2对CAM有双向效应,低剂量NaAsO2促进血管增生,高剂量NaAsO2抑制血管增生;在一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,对HUV-EC细胞增殖的抑制呈剂量-效应关系,明显降低c-myc、c-jun mRNA水平。结论亚砷酸钠可能通过下调c-myc、c-jun基因的表达来抑制HUV-EC增殖,可能是砷中毒引起血管疾病的发生机制之一。; 董雪史艳芬吕慧范洪学李荣贵; 关键词：CAM 亚砷酸钠增殖

亚砷酸钠对人脐静脉血管内皮细胞的毒性效应被引量：3: 2012年; 目的探讨亚砷酸钠对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)毒性效应的分子机制。方法通过观察细胞形态和细胞增殖实验分别观察亚砷酸钠对细胞形态及增殖能力的影响;PI染色结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;应用实时定量RT-PCR技术检测c-Jun、c-Myc的mRNA表达水平。结果随着亚砷酸钠浓度增加,漂浮的细胞越来越多;细胞增殖抑制率越来越高;细胞周期结果显示,S期的细胞数明显减少,大多数细胞被阻滞在G0/G1期,呈典型的剂量-效应关系;亚砷酸钠下调HUVEC的c-Myc mRNAs水平。结论亚砷酸钠通过下调c-Myc基因表达,抑制细胞增殖能力,提示其在地砷病引起的血管损伤中发挥重要作用。; 杨陆董雪赵琪珩刘飞; 关键词：亚砷酸钠 HUVECS 增殖

高迁移率蛋白A2基因真核表达载体构建与表达鉴定被引量：2: 2009年; 目的:构建高迁移率蛋白A2(HMGA2)基因的真核表达载体,观察其在真核细胞中的表达,为进一步研究HMGA2基因功能奠定理论基础。方法:采用RT-PCR方法从人乳腺上皮HBL-100细胞中扩增HMGA2基因全长cDNA,扩增产物经双酶切及凝胶回收后,直接克隆至黄绿色荧光真核表达载体YFP-C1中,构建YFP-C1-HMGA2重组质粒。将YFP-C1-HMGA2真核表达载体转染到人前列腺癌PC3细胞中,通过RT-PCR方法验证所构建的真核表达质粒YFP-C1-HMGA2的正确性。结果:RT-PCR获得长度为351bp的HMGA2全长cDNA,经YFP-C1真核表达载体克隆、酶切鉴定及测序分析,测序结果示基因序列与GenBank序列一致,证实真核表达质粒YFP-C1-HMGA2构建成功,并且能够在真核细胞中表达。结论:成功克隆了HMGA2基因,构建了YFP-C1-HMGA2重组质粒。; 曲珊珊王洋张海英史艳芬董雪吕慧李玉林李荣贵; 关键词：真核细胞转染

人前列腺癌PC3细胞亚群的分离及其生物学行为分析: 2010年; 目的研究人前列腺癌PC3肿瘤细胞系中是否存在具有干细胞特征的细胞亚群,并对其形态及克隆生长特征进行分析,同时探讨染料Rho123着色强度是否可用于区分不同的肿瘤细胞亚群。方法采用Rho123染色后流式细胞仪分析;Rho123与DAPI复染后荧光显微镜下形态学观察及细胞克隆生长特征分析等方法。结果PC3细胞中存在对Rho123着色显著差异的两类细胞亚群,其形态结构、增殖能力及克隆生长方式均有明显差别。结论人前列腺癌PC3细胞系中存在具有干细胞特性的细胞亚群,对Rho123拒染的特性可用于区分肿瘤干细胞与其他肿瘤细胞。; 曲珊珊李荣贵苏学今张海英王洋李玉林; 关键词：前列腺癌罗丹明123 肿瘤干细胞

下调HMGA2基因表达对改善骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验研究被引量：3: 2010年; 目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;经Cell Counting Kit-8(CCK8)测定、Hoechst33342染色荧光显微镜观察及Boyden小室法分别检测细胞增殖、凋亡及迁移情况;实时定量RT-PCR检测mRNAs表达水平。结果:稳定转染靶向HMGA2的shRNA可特异性下调U2OS细胞HMGA2 mRNA表达水平;其作用结果使细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,自发凋亡率及Caspase 3和Caspas 9基因表达水平显著升高。结论:HMGA2基因异常表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中起重要作用,靶向HM-GA2的基因治疗可能为骨肉瘤治疗带来新希望。; 曲珊珊李荣贵张海英王洋史艳芬吕慧李玉林; 关键词：SHRNA 细胞增殖

亚砷酸钠对上皮细胞向间充质细胞转变过程的影响被引量：1: 2011年; 目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对上皮细胞向间质细胞的转变(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程的影响。方法①EMT模型的建立:培养小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG),当细胞大约融合50%时,换成3%血清的培养基,24h后加入5ng/ml TGF-β,作用24 h后,观察NMuMG形态,细胞染色检测E-ca、Vimentin表达、实时定量RT-PCR检测E-ca,Vimentin mRNAs表达水平,是否成功的由上皮细胞转变成间质细胞。②加入NaAsO2:以5 ng/ml TGF-β作为阴性对照组,观察组5ng/ml TGF-β+5μmol/ml NaAsO2、5ng/ml TGF-β+10μmol/ml NaAsO2,再次检测上述指标。结果①成功建立EMT模型:细胞形态由立方形的上皮细胞转变成长梭形间质细胞;细胞染色显示,与未诱导组相比,E-ca表达呈阴性,Vim-entin表达明显呈阳性;E-ca基因表达水平显著下降,Vimentin基因表达水平显著上调。②NaAsO2对EMT过程的影响:一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,明显增强了Vimentin表达;E-ca基因水平逐渐降低,Vimentin基因水平明显升高,呈剂量-效应关系。结论 NaAsO2促进了EMT过程,可能是砷中毒引发癌症的发病机制之一。; 董雪李晓翠史艳芬范洪学李荣贵; 关键词：亚砷酸钠转化生长因子-Β

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国家自然科学基金(30872193)