新疆维吾尔自治区自然科学基金(2012211A018)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 新疆一支蒿提取物诱导棉铃虫解毒酶P450 CYP6B6的表达规律被引量：1
- 2013年
- 旨在利用实时荧光定量PCR和Western blot分别研究新疆一枝蒿提取物黄酮及萜类对棉铃虫P450 CYP6B6在mRNA水平和蛋白水平上表达的影响。实时荧光定量PCR结果表明,P450 CYP6B6在mRNA水平的表达量受到诱导。时间效应为P450 CYP6B6在处理的12 h时能够被黄酮和萜类提取物显著诱导表达,并且在24 h时表达受到抑制;浓度效应为处理24 h时,黄酮和萜类提取物浓度分别为20 mg/100 g和1 mg/100 g时显著诱导P450 CYP6B6的表达,并且在40 mg/100 g和2 mg/100 g时抑制P450 CYP6B6的表达;Western blot检测结果表明,萜类和黄酮在时间和浓度效应上都能显著诱导P450 CYP6B6蛋白表达,并且蛋白水平在时间与浓度效应中的表达趋势与mRNA水平相似。
- 何海刘宁朱燕刘小宁
- 关键词：棉铃虫P450
- 棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6多克隆抗体的制备被引量：3
- 2015年
- 利用核酸免疫蛋白加强法制备兔抗棉铃虫CYP6B6的多克隆抗体。构建重组质粒pcDNA3-CYP6B6并测序验证序列的正确性后,采用皮下多点注射法将重组质粒注射到新西兰大白兔体内,免疫3次后,第4次使用融合蛋白MBP-CYP6B6加强免疫。用ELISA法检测抗体的效价,并利用免疫组化法对抗体的特异性进行检测,得到的兔抗CYP6B6血清的效价达到1︰50 000。免疫组化法检测显示此抗血清能与棉铃虫不同组织中存在的CYP6B6蛋白特异性结合,说明利用核酸免疫蛋白加强法制备了高滴度、特异性强的兔抗棉铃虫CYP6B6的多克隆抗体。
- 魏原杰张雷程婷婷马纪刘小宁
- 关键词：棉铃虫细胞色素P450多克隆抗体
- 棉铃虫中肠谷胱甘肽S-转移酶(GST)对新疆一枝蒿黄酮提取物和萜类提取物的响应被引量：2
- 2012年
- 【目的】研究新疆一枝蒿提取物黄酮及萜类提取物对棉铃虫解毒酶谷胱甘肽S-转移酶(GST)的影响,探明外源有毒物质对该解毒酶表达规律的影响,阐明棉铃虫与植物次生物质相互作用的机制,为发展新型无公害植物源农药提供理论依据。【方法】从新疆一枝蒿中分离提纯黄酮与萜类提取物,以室内饲养棉铃虫(3龄幼虫)为对象,利用生物测定、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附测定法,分别测定新疆一枝蒿中黄酮与萜类提取物对棉铃虫的毒杀效果及其在mRNA水平和蛋白水平上对GSr表达的影响。【结果】黄酮和萜类提取物对棉铃虫3龄幼虫在24 h时的半致死浓度LC_(50)分别是21.4和4.1 mg/100 g,在48 h时的半致死浓度LC_(50)分别是19.3和3.1 mg/100 g;实时荧光定量PCR结果表明GST在mRNA水平的表达量受到诱导,时间效应为当黄酮和萜类提取物浓度分别为20和2 mg/100 g时,GsT在12 h时能够被两种物质显著诱导表达,而在24 h时表达受到抑制;浓度效应为在18 h时,黄酮和萜类提取物浓度分别为20和2 mg/100 g时显著诱导GST的表达,而在40和4 mg/100 g时抑制GST的表达;酶联免疫吸附测定结果表明,萜类和黄酮在时间和浓度效应上都能显著诱导GSI蛋白表达,并且蛋白水平在时间与浓度效应中的表达趋势与mRNA水平相类似。【结论】GST对外源物质新疆一枝蒿的黄酮提取物和萜类提取物存在积极响应,低浓度或短时间内黄酮和萜类均能诱导GSI的过表达,从而化解外源毒性,而浓度过高或时间过长则抑制其表达。
- 何海朱燕刘宁晁群芳刘小宁
- 关键词：新疆一枝蒿棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶生物测定
