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广东省自然科学基金(S2012040006975)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
吴炳义
曾勇
胡子有
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T4噬菌体32蛋白的表达、纯化及鉴定
被引量:1
2012年
目的构建T4噬菌体32蛋白的原核表达质粒T4—32-pET28b,并表达、纯化和鉴定重组目的蛋白。方法以T4噬菌体DNA基因组为模板,PCR扩增得到32蛋白基因片段,定向克隆到原核表达载体pET28b中,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达目的蛋白,然后进行镍柱纯化和G-25脱盐,获得纯化目的蛋白,并进行核酸酶和细菌基因组污染检测及结合DNA单链能力检测。结果构建的T4-32-pET28b质粒经酶切及测序鉴定正确,在BL21(DE3)成功表达了T4-32蛋白,经镍柱和脱盐纯化获得了高纯度的目的蛋白。结论成功构建了T4噬菌体32蛋白的原核表达载体T4—32-pET28b,并实现高表达和纯化了目的表达产物。
胡子有
曾勇
吴炳义
关键词:
T4噬菌体
纯化
BL21(DE3)
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