国家高技术研究发展计划(2008AA101005)
- 作品数：23 被引量：52H指数：4
- 相关作者：曹贵方丛姗宋瑾李岩刘春霞更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学西北农林科技大学内蒙古大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 定量分析诱导山羊体细胞重编程过程中端粒酶的表达变化被引量：4
- 2010年
- 动物体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS)是目前干细胞生物学研究的热点。文中重点对山羊体细胞重编程过程中端粒酶(TERT)基因的相对表达量进行了检测,探讨了山羊重编程细胞的形成与端粒酶基因表达的关系。从关中奶山羊胎儿皮肤分离得到的胎儿成纤维细胞(GEF),其增殖能力较强,核型正常(60条XY),通过转录因子在体外诱导得到山羊重编程细胞。利用Real-timeRT-PCR方法首先对关中奶山羊胎儿各种组织的TERT表达进行了检测,结果表明睾丸组织中TERT的表达显著高于上皮组织(P<0.01),在山羊胎儿的其他组织中TERT也有不同程度的表达。对原代重编程细胞和4株不完全重编程细胞株的TERT表达检测结果发现,碱性磷酸酶(AP)阳性的重编程细胞端粒酶表达量要显著高于AP阴性的重编程细胞(P<0.01)。这一结果揭示,激活端粒酶活性并使其保持较高的表达水平对体细胞的重编程至关重要。
- 张淑金孟书燕雷蕾程祥王华岩
- 关键词：端粒酶细胞重编程关中奶山羊
- 牛和小鼠胎儿成纤维细胞混合制成的饲养层对牛胚胎干细胞的体外培养被引量：1
- 2012年
- 【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1﹕1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合;③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。【结论】小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1﹕1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好。
- 丛姗王瑞温建勋郝斐李硕梁浩刘东军
- 关键词：胚胎干细胞成纤维细胞
- 犬间充质干细胞的研究进展和临床应用被引量：1
- 2015年
- 间充质干细胞是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的多能干细胞,在兽医临床逐渐成为研究的热点。犬是一种理想的实验动物模型,经常被用于新药或治疗方法的疗效与安全性测试。犬间充质干细胞在犬病治疗上的应用将有助于人类疾病的研究,而目前犬间充质干细胞的分离方法、培养条件、纯化技术、鉴定方法等基础性研究仍较少,临床应用的标准还没有建立,治疗疾病的范围仅限于骨与软骨损伤的修复和炎症性疾病等。为此,综述犬间充质干细胞的来源、鉴定方法、临床应用和存在的问题,以期为相关研究人员提供参考。
- 李岩张钰堃曹贵方
- 关键词：间充质干细胞干细胞
- 诱导多能干细胞(iPS)的诱导培养与鉴定被引量：8
- 2010年
- 通过外源转录调控因子的诱导,使成体细胞重编程为胚胎干细胞(ES细胞)样的多能细胞,这种细胞称为诱导多能干细胞(iPS细胞),这一方法被称为iPS技术。目前,iPS技术已先后在小鼠、人、猕猴、大鼠和猪中成功应用,建立了相应的iPS细胞系,并获得了iPS细胞嵌合小鼠和四倍体克隆小鼠。尽管iPS与ES细胞在形态和生长特性上有许多相同之处,但iPS细胞的建立需要较独特的诱导培养体系和鉴定方法。以下结合近年来iPS技术的发展和本实验室的相关研究,对iPS细胞的建立和培养体系的优化进行了深入探讨。
- 成德雷蕾卢智娟李珍王华岩
- 关键词：诱导多能干细胞转录因子细胞重编程胚胎干细胞
- 肝细胞治疗的新型种子细胞——诱导性多能干细胞被引量：2
- 2010年
- 在回顾iPS细胞研究的基础上,针对肝细胞治疗的研究现状,就iPS细胞诱导分化为肝细胞的研究进展及其在肝病细胞治疗中的潜力进行了探讨,并提出了目前面对的主要问题,希望促进iPS细胞在肝病细胞治疗上的应用。
- 闫益波齐巍巍钟部帅吴勇聪王锋
- 关键词：胚胎干细胞诱导性多能干细胞肝病细胞治疗分化
- 绵羊胚胎干细胞的分离与增殖培养
- 2015年
- 研究了囊胚(胚龄、处理方法)、传代方法(机械法和酶法)及培养液对绵羊类胚胎干细胞生长的影响,建立了绵羊类胚胎干细胞的分离培养体系.结果表明,实验获得的体外受精胚用于类胚胎干细胞的分离,具有较好的增殖及传代能力;囊胚的质量和胚龄影响绵羊类胚胎干细胞的贴壁及增殖;机械切割(半胚法)处理囊胚,可获得跟免疫法相近的内细胞团贴壁率(半胚法46%,免疫法53.6%);添加了一定浓度的胎牛血清、细胞生长因子、胰岛素及维生素C的DMEM高糖培养液可一定程度地促进类胚胎干细胞的增殖,适于绵羊类胚胎干细胞的培养.
- 刘春霞赵瑞媛周欢敏
- 关键词：绵羊内细胞团胚胎干细胞传代
- 蒙古绵羊原始生殖细胞(PGCs)的分离培养与鉴定
- 2012年
- 本试验从绵羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞,经体外培养后进行了初步鉴定。为建立绵羊原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的培养体系,试验对比了不同培养条件对蒙古绵羊PGCs生长的影响,将得到的胚胎生殖细胞(EG细胞)作形态学、酶学和免疫荧光鉴定。结果表明:绵羊EG细胞集落隆起,边缘整齐,呈鸟巢状,细胞排列紧密;AKP染色为弱阳性;免疫荧光检测特异标志物Oct3/4呈弱阳性,SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-61、TRA-1-80呈强阳性。
- 刘春霞赵瑞媛李少伟周欢敏
- 关键词：绵羊原始生殖细胞
- ICR小鼠胚胎干细胞的分离与培养被引量：2
- 2011年
- 为了研究不同条件对ICR小鼠ES细胞的影响，试验以12．5～13．5dICR小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）为饲养层，以3．5dICR小鼠胚胎为试验材料，探讨了血清、生长因子及传代方法对ICR小鼠Es细胞分离培养的影响。结果表明：采用含15％FBS的Es细胞培养液的囊胚贴壁率及ICM增殖率（79．3％，69．0％）均比含15％KSR、5％FBS＋10％KSR的细胞培养液高（42．9％，28．6％；75．0％，54．2％），Es细胞最高传至6代；培养液中添加10．g／m LLIF＋10ng／mLSCF的效果比单独添加1种因子的效果好，最高传至6代，高于单独添加1种因子的传代数（4代，2代）；用3种传代方法进行传代时，采用差异贴壁法传代效果最佳，最高传至8代，酶消化法传至4代，机械加酶消化法传至6代。
- 崔雯熊浩王杏龙
- 关键词：ICR小鼠胚胎干细胞
- 马羊膜上皮干细胞的分离培养和鉴定
- 2015年
- 通过Tryp LE消化马羊膜收集羊膜上皮细胞,经过传代培养后,用免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞技术(FACS)分析其干细胞特征。免疫荧光染色发现马羊膜上皮细胞表达SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,只有少量的半贴壁细胞表达Oct4;RTPCR进一步证实马羊膜上皮细胞表达Oct4、Nanog和Sox2,而不表达STAT-3;流式细胞技术分析显示马羊膜上皮细胞也表达CD44、CD90、CD105,但不表达CD45。马羊膜上皮细胞培养三代时,平均倍增时间为(1.25±0.17)d。研究结果表明,通过Tryp LE消化马羊膜上皮可以分离获得马羊膜上皮细胞。
- 张福全丛姗温世勇郭继彤曹贵方
- 关键词：羊膜上皮干细胞
- 过表达磷脂酶D3影响成肌细胞中Akt磷酸化水平被引量：1
- 2009年
- 磷脂酶D(PLD)催化卵磷脂(Phosphatidylc holine,PC)水解产生胆碱(Choline)和磷脂酸(Phosphatidic acid,PA),其代谢产物参与调控细胞内许多生理和生化过程。在过表达磷脂酶D3(PLD3)的成肌细胞(C2C12细胞)中,研究了PLD3对胰岛素刺激后Akt通路激活的影响。研究结果表明,PLD3过表达细胞的Akt磷酸化水平比对照组低,并且不受胰岛素浓度变化的调控。虽然PLD3过表达细胞中Akt磷酸化水平随胰岛素刺激时间的延长而有所增加,但磷酸化总水平比对照组低。磷脂酶D抑制剂丁-1醇能够抑制对照组胰岛素刺激下Akt磷酸化,却不能抑制PLD3过表达细胞的Akt磷酸化,并且PLD3过表达细胞Akt磷酸化水平比对照组高6倍。用磷脂酸(PA)做刺激时,对照组的Akt磷酸化明显增加,而PLD3过表达细胞株的Akt磷酸化没有显著变化;用PA和胰岛素同时刺激时,PLD3过表达株和对照组的Akt磷酸化均比PA单独刺激时降低。这说明PLD3的过表达抑制成肌细胞内胰岛素信号的传导。
- 张军林陈帅张淑金卢智娟杨和平王华岩
- 关键词：AKT胰岛素C2C12细胞
