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银杏内酯B与低氧预适应对氧-葡萄糖剥夺星形胶质细胞的保护途径被引量：2: 2006年; 目的:观察银杏内酯B与低氧预适应对氧葡-萄糖剥夺模型中星形胶质细胞的影响,分析该影响作用途径。方法:实验于2004-10/2005-10在南通大学航海医学研究所完成。①选用新生1d的ICR小鼠15只,雌雄不拘。②传3代后的星形胶质细胞,将培养基换成无糖DMEM培养,加入银杏内酯B,置入体积分数0.95空气+体积分数0.05CO2培养箱24h后,进行氧-葡萄糖剥夺实验,培养基换成无糖Hank溶液,置37°C体积分数0.01O2+体积分数0.94N2+体积分数0.05CO2培养箱进行缺氧24h后,换成含150g/L新生牛血清的DMEM/F12完全培养液在体积分数0.95空气+体积分数0.05CO2培养箱复氧24h。③低氧预适应0.5或3h,用原完全培养基培养24h后进行氧-葡萄糖剥夺实验。④利用相差显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐比色法测定线粒体脱氢酶活性。免疫印迹分析促红细胞生成素表达的变化。⑤计量资料差异比较采用单因素方差分析,组间差异比较采用Q检验(Newman-Keuls法)。结果:①氧-葡萄糖剥夺实验对星形胶质细胞活性的影响:氧-葡萄糖剥夺0.5或3h后星形胶质细胞活性增强;氧-葡萄糖剥夺24h后,细胞活性明显下降(P<0.01)。②银杏内酯B对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞活性的影响:预先给予120μmol/L银杏内酯B作用24h,再进行氧-葡萄糖剥夺24h,细胞形态基本正常;在一定浓度范围内银杏内酯B对缺氧损伤有明显的保护作用,以120μmol/L银杏内酯B预处理后细胞活性明显高于氧-葡萄糖剥夺24h后(P<0.01)。③银杏内酯B(120μmol/L)对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞表达促红细胞生成素的影响:经氧-葡萄糖剥夺0.5或3h或单纯用银杏内酯B处理后的比值明显高于未进行氧-葡萄糖剥夺者(P<0.01);银杏内酯B预处理后再进行氧-葡萄糖剥夺24h表达明显高于氧-葡萄糖剥夺24h后(P<0.05)。④低氧预适应对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞活性的影响:低氧预适; 杜方朱俐; 关键词：星形细胞红细胞生成素

缺血预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受与缺氧诱导因子-1α的表达被引量：2: 2008年; 目的:在PC12细胞水平上研究缺血预处理诱导的缺血耐受与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。方法:采用氧葡萄糖剥夺(OGD)的方法建立PC12细胞缺血模型。用MTT比色分析法观察随缺血时间的延长,细胞存活率的变化,观察短时间缺血预处理(IP)是否能在24h后诱导细胞耐受长时间的缺血。用WesternBlot法检测缺血预处理后HIF-1α的表达。结果:随缺血时间的延长,细胞存活率逐渐下降,缺血6.0h和9.0h存活率较低(P<0.01)。IP0.5h,IP1.0h和IP1.5h后间隔24h分别再经缺血6.0h和9.0h,细胞存活率均显著高于单纯缺血组,其中IP1.0h组高于IP0.5h组,IP1.5h组高于IP1.0h组。IP1.0h和IP1.5h组HIF-1α蛋白的表达均明显增加,IP1.5h组的蛋白表达量比IP1.0h组高(均P<0.01)。结论:IP0.5h和IP1.0h,IP1.0h和1.5h分别可以诱导PC12细胞对缺血6.0h和9.0h的耐受,其中IP1.0h对缺血6.0h的保护作用比IP0.5h强;IP1.5h对缺血9.0h的保护作用比IP1.0h强,与IP1.5h时HIF-1α蛋白表达高有关。; 陈建朱俐潘永进肖峰姚茂元; 关键词：缺血预处理缺氧诱导因子-1Α

NGF对CoCl_2诱导的化学性缺氧神经元HIF-1α表达的影响: 2008年; 以CoCl2诱导的原代培养胚胎小鼠大脑皮层神经元为缺氧模型,Western blot分析神经生长因子(NGF)对神经元低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响。发现正常培养的神经元HIF-1α、p-ERK表达水平较低,CoCl2缺氧处理后表达升高;单独NGF处理或预加NGF再缺氧处理时两者表达均明显上调;ERK特异性抑制剂PD98059处理后两者表达下调,NGF能阻止这种抑制作用;酪氨酸蛋白激酶的抑制剂Genistein处理能下调HIF-1α的表达,NGF不能阻止这种抑制作用;Genistein处理后p-ERK表达无变化,预加NGF则表达水平上调。认为NGF抗缺氧损伤作用可能与HIF-1α、p-ERK信号通路的激活有关。; 顾建兰金淑仪朱俐; 关键词：神经生长因子氯化钴化学性缺氧低氧诱导因子-1Α

银杏内酯诱导的缺血耐受与HIF-1α表达的研究被引量：1: 2007年; 目的研究银杏内酯(Gin)预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受,以及相关的缺氧诱导因子-1α的表达调控机制。方法采用氧葡萄糖剥夺法在PC12细胞上建立缺血模型。观察Gin预处理后PC12细胞磷酸化糖原合成激酶-3β(p-GSK-3β)和HIF-1α的表达及其表达能否被PI3K抑制剂LY294002所抑制。结果MTT结果显示,缺血9 h处理后,PC12细胞活力明显降低,Gin预处理对细胞具有保护作用,细胞活力明显增加;加入LY后Gin预处理组细胞活力有部分降低。Western Blot结果表明,Gin预处理后p-GSK-3β和HIF-1α蛋白的表达均明显增加;Gin的表达诱导作用可被LY所抑制,p-GSK-3β表达明显减少,HIF-1α表达部分减少。结论Gin预处理可以诱导PC12细胞对缺血的耐受;Gin预处理诱导PC12细胞表达的HIF-1α蛋白可能与PI3K/Akt/GSK-3信号通路的激活有关。; 陈建朱俐潘永进; 关键词：银杏内酯 PC12细胞缺血预处理缺氧诱导因子-1Α

银杏内酯对培养的皮层神经元的影响及机制: 2005年; 目的:探讨银杏内酯(Gin)对体外培养的皮层神经元的影响及机制。方法:用Gin处理皮层神经元,以细胞活性、丙二醛(MDA)含量、促红细胞生成素(EPO)的表达为指标。结果:经Gin处理的神经元,胞体饱满,突起变粗变长,细胞活性明显升高,MDA含量降低,EPO表达显著上升。结论:Gin对神经元生长有营养保护作用,其机制可能与提高神经元EPO表达水平,增强神经元抗氧化能力有关。; 吴小梅杜方朱俐; 关键词：银杏内酯神经元丙二醛促红细胞生成素

星形胶质细胞低氧预适应对缺氧神经元的保护作用被引量：1: 2005年; 目的:观察星形胶质细胞低氧预适应对神经元缺氧损伤的影响及机制。方法:收集低氧预适应后星形胶质细胞条件培养液(ACM)用于神经元培养。用MTT比色法检测细胞活性,W estern B lot法分析星形胶质细胞促红细胞生成素的表达。结果:星形胶质细胞缺氧0.5h和3h后,活性升高,促红细胞生成素表达增多;神经元缺氧后活性明显降低,但低氧处理的ACM可阻止此变化的发生。结论:低氧预适应的ACM对神经元缺氧具有明显的保护作用,其机制可能是星形细胞表达促红细胞生成素增多,通过培养液作用于神经元,从而抑制神经元缺氧后活性的降低。; 吴小梅杜方朱俐; 关键词：星形胶质细胞条件培养液低氧预适应神经元促红细胞生成素

刺五加皂甙诱导PC12细胞对缺血的耐受与缺氧诱导因子-1α的表达被引量：1: 2006年; 目的研究刺五加皂甙(ASS)预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。方法采用氧葡萄糖剥夺(OGD)方法在PC12细胞上建立缺血模型。用MTT比色分析法观察ASS预处理是否对缺血的PC12细胞有保护作用及其保护作用能否被PI3K抑制剂LY294002所阻断。用Western-blot法检测PC12细胞予ASS预处理后磷酸化糖原合成激酶-3β(p-GSK-3β)和HIF-1α的表达及其表达诱导作用是否被LY294002所抑制。结果MTT结果显示,缺血9 h处理后,PC12细胞活力明显降低(P<0.01);ASS预处理对细胞具有保护作用,细胞活力有明显增加(F=552.6 P<0.01);ASS保护作用可被LY294002处理部分阻断,细胞活力有部分降低(P<0.01)。与正常对照组比,ASS预处理后p-GSK-3β和HIF-1α蛋白的表达均明显增加。ASS表达诱导作用可被LY294002处理所抑制,p-GSK-3β表达明显减少,HIF-1α表达部分减少。结论ASS预处理可诱导PC12细胞对缺血的耐受;ASS预处理诱导PC12细胞表达的HIF-1α蛋白可能与PI3K/Akt/GSK-3信号通路的激活有关。; 陈建朱俐潘永进; 关键词：刺五加皂甙缺血耐受缺氧诱导

银杏内酯B对培养星形胶质细胞的抗缺血作用及其机制: 2006年; 目的探讨银杏内酯B(Ginkgolide B,Gin B)对缺血中的星形胶质细胞的作用及其机制。方法以新生小鼠纯化的星形胶质细胞,通过缺血(1%O2)或经Gin B预处理,观察细胞形态,活力的变化;利用Westernblot分析bystin与磷酸化Bad蛋白(phosphorylated-Bad,p-Bad)表达的变化。结果星形胶质细胞在缺血0.5h或3h后,变成有反应性特征的星形胶质细胞,活性增高,bystin、p-Bad表达均增加;缺血24h后,细胞变稀疏,胞体变小,突起减少;活性降低;bystin、p-Bad表达明显减少甚至消失;经过Gin B(120μmol/L)预处理后再进行缺血24h,细胞形态较直接缺血明显改善,细胞活性与bystin、p-Bad的表达量均增加。结论Gin B对缺血星形胶质细胞具有保护作用,其作用机制与刺激bystin生成以及增加p-Bad表达有关。; 杜方吴小梅朱俐; 关键词：星形胶质细胞银杏内酯B

银杏内酯诱导原代培养神经元低氧诱导因子1α的表达及与ERK通路的关系被引量：1: 2007年; 目的:研究银杏内酯(Gin)对氯化钴(CoCl2)诱导的化学性缺氧原代培养神经元低氧诱导因子-α(HIF-1α)表达的影响及其与细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路之间的关系。方法:以CoCl2(125μmol/L)诱导的原代培养胚胎小鼠大脑皮层神经元为缺氧模型,观察Gin(终浓度37.5mg/L)对神经细胞形态和活力的影响,Western blot HIF-1α和磷酸化ERK(p-ERK)的表达。运用ERK特异性抑制剂PD98059观察HIF-1α表达与ERK通路之间的关系。结果:Gin能明显提高CoCl2处理的神经细胞的活力。在正常培养的皮层神经元中HIF-1α和p-ERK的表达水平较低,CoCl2处理4h后表达水平明显上调;Gin预处理24h其表达强度进一步提高。PD98059能部分抑制CoCl2诱导的HIF-1α的表达,显著抑制p-ERK的表达;预加Gin能完全阻止该抑制作用。结论:Gin对CoCl2诱导的化学性缺氧损伤神经元有保护作用,该作用与HIF-1α表达上调、ERK通路的激活有关。; 顾建兰季秋虹吴小梅金淑仪朱俐; 关键词：银杏内酯低氧诱导因子1Α 原代培养神经元磷酸化细胞外信号调节激酶

小鼠大脑皮层星形胶质细胞不同体外培养方法的比较被引量：5: 2006年; 目的:比较离体纯化和培养星形胶质细胞的不同方法,旨在获得高纯度的星形胶质细胞,为进一步研究奠定基础。方法::用原代培养、传代纯化和一次或两次振荡纯化的方法培养星形胶质细胞。结果:原代培养的星形胶质细胞纯度不高;经传代纯化培养后纯度达到99%以上,bystin表达量较少,且能经短时间模拟缺血诱导活性明显增高;经振荡纯化后bystin表达量明显增多,GFAP免疫荧光变亮,能耐受长时间模拟缺血,提示经振荡后星形胶质细胞已经处于“活化”阶段。结论:经过传代纯化的星形胶质细胞纯度最高,可以经模拟缺血诱导成反应性星形胶质细胞,因此能更好地反映其在脑中的功能,是研究星形胶质细胞在脑中的功能和反应性星形胶质细胞较好的培养方法。; 杜方吴小梅朱俐; 关键词：星形胶质细胞离体培养反应性星形胶质细胞

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江苏省高校自然科学研究项目(04KJB310113)

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