国家科技重大专项(2009ZX10004-103)
- 作品数：9 被引量：19H指数：2
- 相关作者：金宁一田明尧孙珊珊鲁会军李洋更多>>
- 相关机构：军事医学科学院沈阳农业大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项吉林省科技发展计划基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 乙肝纤维化分级相关血浆蛋白标志物的定量蛋白质组筛选被引量：5
- 2011年
- 非创伤性肝纤维化检测对于评价肝炎进程、临床治疗以及药效评价等方面,都具有非常重要的作用.通过N末端标签的蛋白质组定量手段,从血浆中筛选肝纤维化分级相关的蛋白候选标志物.首先利用目前纤维化诊断黄金标准——肝穿病理检测,获得纤维化不同分级的合格样本血浆,并对肝纤维化各级间的血浆混合样本进行了蛋白质组定量比较分析,发现了72个与乙肝纤维化分级呈明显相关性的血浆蛋白,构成了一个有重要参考价值的、纤维化分级诊断的候选蛋白标志物库.用WB法进一步验证了定量结果的准确性.利用IPA在线分析后获得了4个生理代谢网络图,提示这些差异蛋白在肝纤维化进程中代表的不同功能影响.总之,利用N末端标签定量蛋白质组技术,全面定量挖掘了血浆中与乙肝纤维化分级相关的差异蛋白及变化规律,对于加深肝纤维化发病机制的认识和理解具有很大帮助,同时也为肝脏纤维化临床诊断和治疗提供有益信息和参照.
- 李树龙刘新魏来王慧芬张继阳魏汉东钱小红姜颖贺福初
- 关键词：定量蛋白质组学肝脏纤维化标志物血浆乙型肝炎
- 抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立
- 2009年
- 目的:制备针对嗜肺军团菌血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。方法:用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果:研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM(2株)、IgG3(1株)和IgG1(5株);利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2.6×105cfu/mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心ELISA检测方法。
- 郭景玉朱紫雯王津杨瑞馥宋亚军
- 关键词：单克隆抗体
- 重配H9N1亚型流感病毒感染性克隆的构建及鉴定
- 2012年
- 为了研究禽流感病毒的反向遗传,试验采用霍夫曼发明的8质粒拯救系统,将分离得到的AIV Isolate3(H9N2)基因组,通过RT-PCR得到HA基因,并克隆到以pcDNA3质粒为骨架自行构建的双向转录/表达载体pHW2008上,得到HA转录/表达质粒,再将HA表达质粒与构建好的包含A/Puerto Rico/8/34(H1N1)7个内部基因双向转录/表达质粒共转染人肾上皮细胞(293T)与犬肾细胞(MDCK)混养细胞。结果表明:试验成功构建了重配H9N1亚型流感病毒减毒株。
- 龙川赵权田明尧杨晓琳李洋任静强吕亚楠王成颜雯金宁一
- 关键词：禽流感病毒病毒拯救
- 甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒检测基因芯片的制备与初步应用被引量：10
- 2010年
- 建立DNA微列阵技术检测甲型H1N1和季节性H1N1流感病毒的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。通过生物医学数据库甲型H1N1流感病毒及季节性H1N1亚型流感HA与NA基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证。试验所设计的探针可以对甲型H1N1流感与季节性H1N1流感病毒进行区分,用该方法检测了长春市CDC送检的6份疑似甲型H1N1流感病毒临床病例,4份阳性,检测结果同实时荧光定量PCR方法一致。结果表明,利用本研究建立的DNA微列阵技术检测甲型H1N1流感病毒方法,特异性和敏感性强,可作为甲型H1N1流感病毒临床标本检测方法。
- 孙珊珊沈国顺田明尧鲁会军李昌李霄颜雯谭磊李洋韩佳丽金宁一
- 关键词：甲型H1N1流感病毒核酸探针
- 单克隆抗体2A10在蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的 本研究拟探讨1株黄病毒属特异的单克隆抗体2A10作为检测抗体在同时检测5种黄病毒属病毒的蛋白芯片中的应用价值.方法 将病毒的特异性单抗作为捕获抗体进行点样,制备用于检测5种黄病毒属病毒的抗体芯片,然后分别加入拟检测的病毒灭活抗原,捕获病毒颗粒后,加入荧光染料CY3标记的2A10检测抗体进行孵育,通过扫描并分析芯片上不同抗体的荧光强度,确定2A10检测抗体的效价和可检测的病毒滴度,并对2A10的检测效果进行评价.结果 蛋白芯片检测结果表明,2A10可作为检测抗体用于对5种黄病毒属病毒的检测,CY3标记的2A10效价为1∶160,以脾传脑炎（TBE）病毒为例,可检测的病毒滴度为1250 PFU.结论 单克隆抗体2A10作为一株黄病毒属特异的单抗,可以用于蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒.
- 孙婷婷李裕昌刘洪康晓平林方祝庆余杨银辉鲁承
- 关键词：蛋白芯片高通量黄病毒属单克隆抗体
- N亚型流感病毒分型基因芯片检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 利用生物信息学软件对流感病毒9种N亚型基因序列进行分析筛选,设计用于9种N亚型流感病毒基因芯片分型的特异性探针,制备了针对N1~N9亚型流感病毒的鉴定基因芯片,对9种N亚型流感病毒基因芯片分型检测方法进行初步研究。结果表明：所建立的N亚型流感病毒分型芯片检测方法可以检测A型流感病毒,可对N1~N9亚型进行特异性区分,待检样品的拷贝数需大于1×102个/μL,并且重复性好,稳定性高。
- 杨晓琳彭丽萍田明尧孙珊珊龙川金宁一
- 关键词：流感病毒基因芯片
- 不同种型布鲁菌间的基因获得与缺失研究
- 2011年
- 目的:了解不同种型布鲁菌间的基因差异及基因的获得与缺失情况。方法:采用生物信息学方法比较分析已测序的10株布鲁菌基因水平的差异,分析它们的核心基因组与泛基因组,对得到的差异基因用PCR验证其在19株不同生物型标准菌株中的分布情况。结果:不同种型布鲁菌在基因水平上存在较大差异,差异基因主要位于Ⅱ号染色体上;根据差异基因,鉴定了42个差异区段,这些差异区段在19株不同生物型标准菌株中存在差异分布。结论:布鲁菌在进化过程中分别获得或失去了不同的基因区段,从而适应不同的宿主环境。
- 杨毅颜焱峰陈燕芬周晓燕王玉飞周冬生杨瑞馥姜海崔步云陈泽良黄留玉
- 关键词：布鲁菌比较基因组学
- 季节性和大流行性H1N1流感血凝素DNA疫苗电穿孔免疫小鼠及攻毒保护实验
- 2011年
- 在流感病毒疫苗中,DNA疫苗有望成为常规疫苗的替代品.研究构建了两个分别编码A/New Caledonia/20/99(H1N1)和A/California/04/2009(H1N1)流感病毒株血凝素抗原的DNA疫苗pV1A5和pVEH1,目的抗原经验证能够正确表达后,利用小鼠模型通过电穿孔方法肌肉注射免疫进行疫苗免疫效力评价.采用血凝抑制实验和酶联免疫吸附实验对免疫小鼠的血清进行血凝素特异性抗体检测,对血凝素特异性的T淋巴细胞经IFN-γ酶联免疫斑点实验进行检测.然后选择小鼠适应株A/NewCaledonia/20/99(H1N1)100个半数致死剂量对候选疫苗免疫的小鼠攻毒并监测生存率和体重变化率,以此评价疫苗保护效力.两疫苗组免疫小鼠T淋巴细胞和体液免疫水平显著高于pVAX1空载体对照组(P<0.05).此外,pV1A5组能够100%保护免疫小鼠抵抗100致死剂量同源病毒小鼠适应株的攻毒,而同种病毒下pVEH1组只有40%的保护率.结果表明,本实验构建的季节性流感DNA疫苗能够对同源病毒攻毒提供完全保护,而大流行流感株DNA疫苗只能部分抵抗季节性流感病毒.
- 谭磊鲁会军张丹王开艳田明尧刘存霞刘燕瑜胡博金宁一
- 关键词：血凝素DNA疫苗电穿孔H1N1流感病毒
- 6种虫媒病毒PCR-Mass检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 建立了一种可快速、同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、西尼罗病毒(WNV)、森林脑炎病毒(TBEV)和圣路易脑炎病毒(StLEV)等6种虫媒病毒的PCR-Mass检测方法。根据GenBank登录的上述6种病毒的序列信息,经过分析比对,设计6组扩增引物和延伸探针,初步建立针对上述6种病毒的PCR-Mass检测体系。采用上述6种虫媒病毒和其他常见致病性病毒为检测对象,确定PCR-Mass体系的特异性;通过对重组质粒的定量检测,确定该体系的检测灵敏度;并利用该体系对12份TBE阳性和10份JEV阳性脑脊液样本进行检测,评价检测方法的实用性和临床应用价值。结果表明:PCR-Mass检测方法可同时检测上述6种虫媒病毒,而对其他病毒检测均为阴性,无交叉反应现象;6种虫媒病毒的最低检出浓度均为102copies.mL-1;对22份阳性样本的检测结果均呈阳性。本研究建立的PCR-Mass检测方法可实现对6种虫媒病毒的快速、同时检测,具有良好的特异性和较高的灵敏度。
- 朴静子王晓宏陈唯军杨银辉姜永强曹远银
- 关键词：虫媒病毒
