国家重点基础研究发展计划(1999011904)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：武汉大学中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
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- 口蹄疫病毒诱导BHK-21细胞产生凋亡的研究
- 2007年
- 试验利用口蹄疫病毒感染BHK-21细胞,通过MTT法、Hoechst 33258染色、原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和链特异性荧光定量RT-PCR,分别就口蹄疫病毒对BHK-21细胞生长的抑制作用、凋亡细胞的形态学和分子生物学特征、凋亡峰的出现和细胞周期的变化以及口蹄疫病毒基因组在BHK-21细胞内的复制情况进行了检测。结果表明:口蹄疫病毒可抑制BHK-21细胞的生长并诱导其产生凋亡,呈现典型的凋亡细胞特征,出现细胞凋亡峰并且细胞周期明显被阻滞在G1/G0期,同时对凋亡率和口蹄疫病毒基因组复制的关系做了初步研究。
- 鲁彬
- 关键词：口蹄疫病毒凋亡原位末端标记
- 口蹄疫病毒持续感染细胞系的快速选择及其特性研究被引量：4
- 2003年
- 采用NH_4C1弱碱法处理感染口蹄疫病毒的叙利亚仓鼠肾细胞系(BHK-21),存活细胞经过单克隆和选择,获得32株阳性克隆细胞株。随机选取一株(BHK-ROp),常规传代并采用RT-PCR,透射电子显微镜,流式细胞仪进行持续感染特性分析,结果表明,BHK-ROp第4,16,36代细胞中病毒持续存在,但不影响细胞的生长特性,表现出病毒持续感染的基本特征。可见,NH_4C1弱碱法用于建立病毒持续感染细胞系是十分有效的。
- 顾潮江郑从义吴继彬屈三甫杨薇常惠芸
- 关键词：口蹄疫病毒细胞系
- 口蹄疫病毒3D基因的克隆表达及功能分析被引量：1
- 2006年
- 利用RT-PCR技术扩增了口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,并将其克隆到原核表达质粒载体pET-28a(+)中。3D基因经测序确认后在大肠杆菌BL-21中表达,表达产物纯化的目的蛋白进行Western-blotting检测,获得分子量约55KDa的单一3D基因表达产物。利用RNA体外复制体系和荧光定量PCR技术,证明纯化的3D基因表达产物RNA依赖的RNA聚合酶具有较高的酶活性,可以在体外从头合成FMDVRNA,且主要以引物依赖的方式合成病毒基因组。
- 张倩顾潮江石立立李勇屈三甫郑从义
- 关键词：口蹄疫病毒荧光定量PCR
- 应用改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术检测口蹄疫病毒及其3D基因转录水平被引量：4
- 2006年
- 将改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术应用于口蹄疫病毒感染体内和体外的定量检测以及其3D基因转录水平分析。结果表明:对样品中口蹄疫病毒基因组RNA的检测灵敏度可达l0个基因拷贝,可同时检测病毒正负链复制水平且重复性较好,所测口蹄疫病毒3D基因转录水平可高达6.9×104拷贝/μL;与实时SYBRGreenⅠ染料RT-PCR技术比较,改良的实时TagMan荧光定量RT-PCR技术检测灵敏度高6.7倍。以上结果证实,改良的实时TaqMan荧光定量RT-PCR技术在病毒检测和基因表达水平分析方面有更高的灵敏度和特异性。
- 石立立顾潮江张倩张玮莹李勇鲁彬何成屈三甫郑从义
- 关键词：口蹄疫病毒
