国家自然科学基金(30200061)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 分子印迹固相萃取生物样品中的胆固醇被引量：8
- 2005年
- 目的研究胆固醇分子印迹聚合物(MIPs)作为固相萃取(SPE)材料,固相萃取血液、蛋黄、牛奶等样品中胆固醇的效率。方法分别采用非共价热启动和紫外聚合方法合成胆固醇MIPs,功能单体为甲基丙烯酸(MAA),交联剂乙烯二醇二甲基丙烯酸酯(ethylene glycol dimethacrylate,EDMA),引发剂偶氮二异丁腈(2,2-azobisisobutyronitrile,AIBN)。分析合成的MIP的吸附特异性后,利用两种MIPs作为固相萃取的固定相,对血液、蛋黄、牛奶等样品进行固相萃取,并与常规C18固相萃取方法进行比较。结果胆固醇MIPs对胆固醇有特异性识别和结合能力,对与胆固醇结构类似的雌二醇、雌三醇的结合能力远远小于胆固醇。紫外聚合的MIPs吸附能力和吸附特异性均明显好于热启动MIPs。两种MIPs的固相萃取效率主要与上样和洗脱的溶剂密切相关,最佳固相萃取条件为:正己烷平衡后,正己烷上样,然后用正己烷加正乙烷∶甲苯(9∶1)淋洗除去非特异性结合的胆固醇,氯仿∶乙醇∶乙酸(3∶1∶1)洗脱特异性结合的胆固醇。回收率大于70%。结论胆固醇MIPs可特异性地识别和分离胆固醇,可用于固相萃取,快速分离不同生物样品中的胆固醇。
- 吕斌石丹张江华江明石云戴康
- 关键词：胆固醇分子印迹聚合物固相萃取生物样品
- 分子印迹技术在生物医学分析研究中的进展被引量：3
- 2005年
- 张江华石丹吕斌
- 关键词：分子印迹技术分子印迹聚合物MIP
- 人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达被引量：2
- 2004年
- 目的 构建人共刺激分子CD80 (B7 1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原 3(Sart3)融合基因真核表达载体 ,并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法 采用RT PCR技术 ,从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列 (第 1～ 12 81bp) ,此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7 1cDNA和Sart3cDNA共克隆入真核表达载体 pEGFP N1,测定核苷酸序列确定重组成功后 ,分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞 ,利用流式细胞仪和Westernblot检测B7和Sart3的表达。结果 构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列 (NM_0 0 5 191、NM_0 14 70 6 )一致 ,阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强 ,免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应 ,融合蛋白分子量与B7 Sart3 EGFP的预测分子量相当。结论 成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN ,并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。
- 黄方敏郑启新吕斌鲍同柱
- 关键词：B7基因克隆RT-PCR技术共刺激分子肿瘤疫苗
- 胆固醇MIPs的合成及其免疫吸附性能评价和应用被引量：5
- 2006年
- 分别采用热和紫外光辐射引发合成胆固醇的非共价型M IPs,评价了不同M IPs的吸附特性,以合成的2种M IPs为免疫吸附剂,优化吸附和洗脱条件,对血液、蛋黄、牛奶等生物样品进行免疫吸附。结果表明,M IPs可有效萃取3种生物样品中的胆固醇,其中对血清的效果最好,蛋黄的效果最差。紫外光引发M IPs对胆固醇的回收率明显高于常规的C18柱萃取法。
- 吕斌江明石丹张江华梅素容朱业湘郝巧玲周宜开
- 关键词：胆固醇分子印迹聚合物固相萃取生物样品
- 基于分子印迹技术的环境监测新方法被引量：1
- 2005年
- 石丹张江华吕斌
- 关键词：分子印迹技术环境污染物高特异性高灵敏度模板分子分子结构
