广州市天河区科技计划项目(108ZH044)
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 相关作者：王宏向军俭骆敏儿宋其芳邓宁更多>>
- 相关机构：暨南大学广东省农业科学院更多>>
- 发文基金：广州市天河区科技计划项目“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定。结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在"内影像"关系。结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测。
- 余涛李大刚邓宁向军俭宋其芳贾彦琼王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮抗独特型抗体FAB片段
- 玉米赤霉烯酮多克隆抗体的制备及特性分析被引量：5
- 2012年
- 合成玉米赤霉烯酮半抗原,应用液相色谱-质谱联用法进行鉴定,并采用活泼酯法将半抗原与载体蛋白OVA或BSA偶联,分别作为免疫原或包被原,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描法鉴定偶联效果,免疫3只BALB/c小鼠,制备玉米赤霉烯酮多克隆抗体。结果表明:抗血清效价最高达1∶32 000,以此多抗建立的玉米赤霉烯酮间接竞争标准曲线IC50为39.8ng/mL,IC10为0.71ng/mL,多抗与玉米赤霉烯酮类似物β-zearalenol、zear-alanone、α-zearalanol、β-zearalanol交叉反应率分别为4.80%,3.07%,0.96%,0.09%。说明试验成功制备了玉米赤霉烯酮人工抗原及高特异性多克隆抗体。
- 余涛李大刚邓宁向军俭宋其芳王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮F-2毒素人工抗原酶联免疫吸附试验多克隆抗体
- 玉米赤霉烯酮抗独特型单抗的制备及特异性分析被引量：2
- 2013年
- 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5。方法将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化。间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性。结果共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度最高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好。结论已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在"内影像"关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术。
- 贾彦琼黄建芳向军俭邓宁唐勇骆敏儿王宏
- 关键词：单克隆抗体抗独特型抗体
- 基于独特型-抗独特型初步建立玉米赤霉烯酮无毒ELISA定量检测技术被引量：3
- 2013年
- 目的:初步建立以玉米赤霉烯酮(ZEN)抗独特型单抗替代玉米赤霉烯酮标准品,检测ZEN残留的无毒ELISA定量检测技术。方法:以ZEN-BSA为包被原,ZEN单抗(1G4)为反应抗体,分别以不同浓度的ZEN毒素或ZEN抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)为竞争物,建立竞争抑制曲线。根据抑制率在20%~80%间,在相同抑制率条件下,ZEN与1D5间浓度对应关系,绘制替代标准曲线及对应的浓度转换方程。以ZEN类似毒素代替ZEN作为竞争抗原,检验方法的特异性;板内、板间试验检验方法的精密度。结果:初步建立了ZEN无毒ELISA定量检测技术,1D5与ZEN毒素之间的替代标准曲线方程为:y=1.2846x1.9310(y为ZEN毒素浓度ng/ml,x为抗独特型抗体浓度(μg/ml)。检出限(IC2 0)为1.041 ng/ml,检测范围为1.041~25.99 ng/ml。方法的批内平均变异系数为3.88%,批间平均变异系数为4.96%。方法特异性好,与ZEN类似毒素几乎无交叉反应。结论:利用ZEN单抗和ZEN抗独特型单抗初步建立了ZEN的无毒ELISA定量检测方法。
- 宋其芳向军俭骆敏儿钟娜黄婉君贾彦琼王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立被引量：15
- 2013年
- 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法。结果经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功。经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL。mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8%外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL。结论成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL。
- 骆敏儿唐勇向军俭张晓丽付强强王宏
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金免疫层析法
