国家自然科学基金(30130260)
- 作品数：14 被引量：61H指数：5
- 相关作者：吴开春魏于全樊代明田聆邓洪新更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院四川大学华西医院四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗肿瘤血管治疗的新进展被引量：4
- 2003年
- 赵敏彭芝兰赵霞
- 关键词：抗肿瘤血管治疗肿瘤血管生成抑制免疫基因治疗
- Vasostatin重组腺病毒的构建和体外表达的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 构建 vasostatin重组腺病毒表达载体 ,并进行体外表达研究。方法 根据 Gen Bank中提供的钙网蛋白序列 ,设计并合成引物 ,以人骨骼肌 c DNA文库为模板用 PCR扩增出人 vasostatin基因 ,将其克隆入 T载体。经酶切及测序鉴定后亚克隆至穿梭载体 ,与经过限制酶处理的骨架腺病毒载体 DNA- TPC复合物共转染 2 93细胞。用 Western blot检测体外表达。结果 PCR扩增出约 5 90 bp产物 ,测序结果与文献报道一致。用 PCR及Western blot证实重组腺病毒构建成功 ,能有效的表达出 vasostatin蛋白。结论 vasostatin重组腺病毒载体能有效的在体外表达出
- 丁振宇杨莉田聆刘芬肖飞魏于全
- 关键词：VASOSTATIN腺病毒基因治疗
- Id1真核表达载体的构建及胃黏膜上皮细胞系的转染
- 2004年
- 目的 :扩增Id1基因 ,构建Id1真核表达载体pcD NA3.1 /V5HisA Id1 .方法 :以胃癌细胞SGC790 1cDNA为模板 ,以Id1基因编码区外的两段特异性序列为引物 ,获得Id1基因的全长 .将目的基因插入载体pUCm T ,经序列测定证实后 ,亚克隆至pcDNA3.1 /V5HisA并经酶切鉴定 .采用脂质体转染的方法将重组质粒稳定转染至胃粘膜上皮永生化细胞系GES 1中 .结果 :经RT PCR方法扩增出大小为 6 0 8bp的基因片断 ,序列测定其编码序列及读框正确 .亚克隆经酶切鉴定正确 .经过 8wkG4 1 8筛选后 ,获得稳定表达Id1的细胞亚系 .经Westernblotting证实 ,Id1蛋白表达水平高于对照组 .结论 :成功地构建了Id1真核表达载体 。
- 韩霜丁杰郭长存韩者艺申慧琴陈瑜扎西措姆乔泰东吴开春樊代明
- 关键词：胃肿瘤ID1
- 鸡tie-2受体胞外片段重组蛋白的制备及其抗血管生成作用的研究被引量：10
- 2004年
- 目的 设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法 用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western印迹检测抗血清中抗体的存在 ;分离纯化抗体 ,用流式细胞仪体外观察其对血管内皮细胞生长情况的影响用体内藻酸盐包裹肿瘤细胞实验和肿瘤内微血管 CD31免疫组化观察其对血管生成情况的影响。结果 经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 tie- 2受体胞外目的片段的p QE原核表达载体 ,且高效表达目的蛋白 ,其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体 ;体外细胞培养结果显示免疫后产生的抗体明显的诱导血管内皮细胞凋亡 ;藻酸盐包裹实验表明此抗体能显著降低肿瘤新生血管的形成 ;CD31微血管计数显示此抗体能明显减少肿瘤内微血管数。结论 用原核表达的方法成功制备了鸡 tie- 2受体胞外片段 (配体结构域 )的蛋白疫苗 ,且此疫苗能明显产生抗血管生成作用。
- 罗彦文艳君田聆吴扬刘继彦李秋李炯毛咏秋邓洪新阚兵何秋明杨金亮魏于全
- 关键词：TIE-2受体重组蛋白抗血管生成原核表达
- 防御素2融合VE-Cadherin重组质粒的抗血管生成免疫作用被引量：3
- 2006年
- 目的构建β防御素2(BD2)融合血管内皮钙粘附素(VE-Cadherin)胞外段重组质粒,以期探讨其免疫后抗肿瘤血管生成作用。方法PCR扩增成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段。以连接肽连接成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段,通过重叠PCR构建融合分子。将所得三种片段插入到pSecTag2B真核表达质粒。转染CT26肿瘤细胞,RT-PCR检测其表达。取转染COS细胞后的上清液做趋化实验,检测融合分子对树突状细胞(DC)的趋化作用。所得质粒经肌肉注射免疫小鼠后,皮下植入包裹CT26肿瘤细胞的藻酸盐微球,检测血管生成情况。结果测序证实三种质粒构建正确,能在真核细胞中顺利表达。BD2融合重组质粒和未融合的BD2质粒转染细胞后的上清液趋化DC的能力相近(P>0.05)。与其余各组质粒免疫相比,融合重组质粒免疫后能够显著抑制藻酸盐微球中肿瘤细胞诱导的血管生成(P<0.01)。结论BD2融合血管生成相关分子后的重组质粒免疫动物后能在体内有效地打破机体对肿瘤新生血管的免疫耐受。
- 王国庆王永生王瑞吴杨杜小波徐建容刁鹏
- 关键词：防御素血管生成免疫作用
- 促血管生成素及其受体TEK在血管形成中的调节作用被引量：11
- 2006年
- 促血管生成素(angiopoietins,ANGPT)及其受体TEK是新发现在机体的生理、病理性血管形成中发挥重要调节作用的信息途径。生理情况下,ANGPT1激活TEK受体,促进血管生成、维持血管完整稳定;ANGPT2则竞争性拮抗ANGPT1的作用,当血管内皮生长因子存在时,可促进血管重建,血管内皮生长因子缺乏时,则促进血管退化。肿瘤发生时,ANGPT及TEK受体在肿瘤组织中表达明显增高,特别是ANGPT2特异表达于肿瘤新生血管区,参与肿瘤血管新生的起始及延续过程。阻断ANGPT及TEK信号传导途径可抑制肿瘤生长,有望为肿瘤的临床治疗提供一种新途径。
- 罗彦魏于全
- 关键词：促血管生成素血管形成
- 趋化因子受体CXCR3在胃癌中的表达被引量：11
- 2004年
- 背景近年来,趋化因子及其受体在肿瘤转移中的作用引起了重视,但有关趋化因子受体CXCR3在胃癌中的表达尚无报道。目的检测胃癌组织和细胞系中CXCR3在mRNA和蛋白水平的表达,为进一步研究其在胃癌转移中的作用奠定基础。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测胃癌细胞系CXCR3mRNA的表达,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测胃癌组织和细胞系CXCR3蛋白的表达,流式细胞仪检测胃癌细胞系表面CXCR3的表达。结果在所检测的胃癌组织中,CXCR3蛋白的表达量明显高于相应癌旁组织。所检测的胃癌细胞系均有CXCR3mRNA和CXCR3蛋白表达,但仅KATOⅢ细胞表面CXCR3的表达较明显。永生化胃上皮细胞系GES鄄1的CXCR3蛋白表达量明显低于胃癌细胞系。结论胃癌细胞系有CXCR3表达,胃癌组织中CXCR3的表达高于癌旁组织。
- 陈瑜张德新郭长存乔泰东樊代明吴开春
- 关键词：趋化因子受体CXCR3胃癌
- 胃癌组织中COX-2和VEGF表达及其相关性研究被引量：11
- 2005年
- 目的探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growthfactor,VEGF)在人胃癌组织中表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测53例人胃癌组织中COX-2、VEGF和CD34的表达,并以40例正常胃粘膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数。对COX-2和VEGF的表达采用半定量计分法判定,并结合临床资料进行统计学分析。结果53例人胃癌组织中,COX-2表达阳性者44例,阳性率为83.0%;VEGF表达阳性者45例,阳性率为84.9%。COX-2表达与VEGF表达相关显著(P<0.05)。并且,COX-2和VEGF的表达与TNM分期(P<0.05,P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01,P<0.05)和远处转移(P<0.01,P<0.05)相关。COX-2/VEGF同高表达组中MVD值(79.5±25.8)高于COX-2/VEGF同低表达组中的MVD值(45.0±13.9),差异非常显著(P<0.01)。结论胃癌组织中COX-2与VEGF共表达,并相互协同促进肿瘤血管生成和转移。
- 唐红卫王钧孙力军宁晓喧谢华红毕锋吴开春樊代明
- 关键词：胃癌环氧合酶-2血管内皮生长因子血管生成
- 人血管生成素-1对血管内皮细胞增殖及凋亡影响的研究
- 2004年
- 目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin—1,Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilican vein endothelia cell,HU-VEC)增殖和凋亡的影响,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制。方法:构建.pcDNA3.1-V5-HisC-Ang-1真核表达载体,并瞬时转染293细胞;取新生儿脐带经胶原酶消化等方法分离培养HUVEC;分别通过MTT比色和细胞计数法,分析Ang-1瞬时转染上清对HUVEC增殖的影响;通过流式细胞仪分析在血浆饥饿实验条件下,Ang-1对HUVEC凋亡的影响。结果:成功克隆了Ang-1基因,构建了其正义真核表达载体,并在293细胞中瞬时表达;成功进行了HUVEC的原代分离及传代培养;MTT法检测HUVEC增殖结果:只加培养液组、加空载体转染上清组、加Ang-1转染上清组HUVEC OD490值分别为0.36±0.11,0.40±0.03,0.68±0.10(P<0.05);细胞计数法检测结果依次为:(10.13±2.06)×104,(8.7±1.73)×104,(15.03±1.98)×104(P<0.05)。流式细胞仪检测HUVEC凋亡率依次为:21％,19％和6％。结论:Ang-1能显著促进血管内皮细胞体外增殖,抑制血浆饥饿时HUVEC的凋亡。
- 王钧吴开春张德新幺立萍樊代明
- 关键词：血管生成素血管生成凋亡脐静脉内皮细胞
- Osteopontin特异性siRNA真核表达载体的构建及其在GC9811胃癌细胞中沉默效应的鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的:构建骨桥蛋白(OPN)特异性siRNA(smallin terfereRNA)真核表达载体,体外观察对OPN基因的沉默作 用.方法:采用基因克隆技术,将合成的特异性OPNRNA干 扰寡核苷酸序列插入真核表达载体mU6pro,构建OPNsiRNA 真核表达载体.以脂质体法将mU6pro空载体和2个 (mU6pro/OPN siRNA1和mU6pro/OPN siRNA2)重组质粒分 别导入具有高转移特性的GC9811胃癌细胞系.72h后用 RT PCR和Westernblotting技术检测各实验组胃癌细胞内 OPNmRNA及蛋白水平的表达情况.结果:成功构建OPN siRNA真核表达载体.转染OPN siRNA的胃癌细胞,72h后 OPNmRNA及蛋白表达下调,而以mU6pro/OPN siRNA1的抑 制效果更为明显.结论:构建的RNA干扰真核表达载体能明 显干扰OPNmRNA及蛋白的表达,为将其进一步应用于胃癌 的治疗研究奠定了基础.
- 唐红卫潘阳林聂勇战孟凡平谢华红王均吴开春
- 关键词：骨桥蛋白小干扰RNA真核表达
