国家自然科学基金(31060292)
- 作品数：8 被引量：46H指数：4
- 相关作者：马纪石萌刘晓静刘小宁张瑞更多>>
- 相关机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金博士科研启动基金更多>>
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- 荒漠甲虫光滑鳖甲和小胸鳖甲抗冻蛋白基因及其3'-UTR的序列分析被引量：3
- 2013年
- 拟步甲科昆虫光滑鳖甲Anatolica polita Kaszab和小胸鳖甲Microdera punctipennis Kaszab分别是新疆准噶尔盆地荒漠地区的广布种和特有种。它们的生活习性有很大差异,光滑鳖甲白天活动,且活动范围广,而小胸鳖甲喜阴避光夜晚活动,活动范围小,但在两者体内都发现有多拷贝的抗冻蛋白基因,并且抗冻蛋白基因在夏季也有表达。为了比较这两种昆虫的抗冻蛋白序列以及不同时期表达的抗冻蛋白序列的差异情况,本研究分别以光滑鳖甲和小胸鳖甲的过冬和夏季成虫为材料,根据已克隆的抗冻蛋白基因序列设计通用引物,扩增新的抗冻蛋白基因及其3'-非翻译区(3'-UTR)。序列分析结果表明,无论是冬季还是夏季表达的抗冻蛋白在两种昆虫中都具有拟步甲科昆虫抗冻蛋白的特点,即含有不同数量的"TCTXSXXCXXAX"12个氨基酸的重复序列;光滑鳖甲抗冻蛋白基因的变异性大于小胸鳖甲,并且在重复基序的保守位点都有突变现象。小胸鳖甲抗冻蛋白在C末端有较大变异。光滑鳖甲抗冻蛋白基因的3'-UTR区变异较大,而小胸鳖甲抗冻蛋白基因的3'-UTR区几乎没有变异。推测两种昆虫抗冻蛋白及抗冻蛋白基因3'-UTR的变异性可能与抗冻蛋白的表达调控以及昆虫对微环境的适应性有关。
- 侯小娟梁娜邱立明马纪
- 关键词：光滑鳖甲抗冻蛋白
- 小胸鳖甲各龄期幼虫过冷却点的测定被引量：7
- 2012年
- 【目的】了解新疆荒漠甲虫准噶尔小胸鳖甲幼虫耐寒性的发育阶段性变化。【方法】对新疆荒漠甲虫准噶尔小胸鳖甲各龄期幼虫的过冷却点进行测定。【结果】同一虫期个体间的过冷却点出现不同程度的变异,但均服从正态分布。不同虫期的过冷却点差异显著,其中1龄的过冷却点最低(-19.4～-24.1℃),且个体差异不大。老熟幼虫的过冷却点个体差异较大,其中7龄幼虫中过冷却点在个体间差异达到15.7℃(-5.6～-21.3℃)。【结论】老龄幼虫最有可能是该虫在荒漠环境地区越冬的虫态。
- 刘晓静石萌马纪
- 关键词：幼虫过冷却点越冬耐寒性
- 小胸鳖甲热激蛋白基因(Mphsp70)的克隆、序列分析及温度对其表达的影响被引量：13
- 2012年
- 采用RACE-PCR技术,从荒漠甲虫小胸鳖甲Microdera punctipennis Kaszab克隆hsp70基因全长cDNA序列,命名为Mphsp70。测序结果表明,序列全长2207bp,该序列覆盖了完整编码区,编码647个氨基酸,分子量大小为70.69ku,理论等电点为5.57(GenBank登录号JF421286.1)。此序列包含142bp的5'端非翻译区和124bp的含有多聚腺苷酸信号序列AATAAA和poly A尾的3'端非翻译区以及1941bp的开放阅读框。该基因无内含子,符合诱导型Hsp70的特征。经BLAST检索分析,由Mphsp70的核苷酸序列推定的氨基酸序列与已知的光滑鳖甲Hsp70高度同源,同源性高达97.22%。通过荧光定量RT-PCR技术研究昆虫受到高温胁迫时该基因的表达,结果表明:经37℃和42℃处理昆虫1h后诱导昆虫体内hsp70的表达,其表达量分别为对照组(25℃)的21.57倍和389.3倍,随着处理时间的延长,表达量降低。该研究结果为深入研究小胸鳖甲的抗逆机理提供了新的思路。
- 马文静马纪
- 关键词：热激蛋白70高温处理实时定量PCR
- 温度对荒漠昆虫小胸鳖甲幼虫肌动蛋白基因表达的影响被引量：1
- 2014年
- 【目的】肌动蛋白β-actin是应用实时荧光定量PCR检测基因表达的常用内参基因,测定和分析荒漠昆虫小胸鳖甲幼虫中β-actin基因表达的稳定性,判断其是否可作为内参基因。【方法】选取不同龄期的小胸鳖甲幼虫经过42、5、10和15℃处理不同时间后,利用实时荧光定量PCR检测β-actin基因的表达,以基因绝对拷贝数的对数进行单因素方差分析。【结果】小胸鳖甲幼虫在不同龄期β-actin的表达有显著差异;1龄幼虫在不同温度处理后,β-actin的表达都有显著升高;4龄幼虫在不同温度处理后β-actin的表达基本上没有变化;7龄幼虫在10、15和42℃条件下β-actin的表达都显著升高,但5℃处理没有影响。【结论】小胸鳖甲幼虫的β-actin基因具有发育阶段性差异性表达特点,温度对不同龄期幼虫的β-actin基因表达的影响不同,β-actin基因可能不适合在小胸鳖甲幼虫基因表达分析中作为内参基因。
- 肖荣刘小静石萌马纪
- 关键词：荧光定量PCRΒ-ACTIN基因表达温度处理
- 拟步甲科昆虫不同抗冻蛋白的免疫交叉性分析被引量：2
- 2013年
- 目的利用甲虫小胸鳖甲的抗冻蛋白MpAFP698制备抗血清,分析拟步甲科不同种类昆虫抗冻蛋白的免疫同源性。方法通过DNA疫苗初次免疫-蛋白质加强的策略免疫新西兰大白兔,先以重组质粒pcDNA3-Mpafp698作为DNA疫苗免疫接种2次,再以融合蛋白His-MpAFP698进行蛋白质加强免疫2次。采用ELISA检测MpAFP698抗体的效价,Western blot法检测抗体的特异性及不同昆虫抗冻蛋白与MpAFP698抗体的免疫交叉反应。结果兔抗血清的效价可达1:40万,Western blot结果显示抗血清分别与His-MpAFP698及GST-MpAFP698蛋白有特异性结合,与小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP149、MpAFPS77以及来自不同昆虫的抗冻蛋白ApAPAFP914、OcAFP4有特异性结合。结论荒漠地区不同甲虫的抗冻蛋白具有相同的抗原表位,可以发生免疫交叉反应。
- 李洁琼侯晓娟王岩刘小宁马纪
- 关键词：拟步甲科昆虫抗冻蛋白
- 昆虫过冷却点的影响因素概述被引量：17
- 2013年
- 昆虫体液可以耐受0℃以下的低温仍不结冰,这种现象称为"过冷却"。当外界温度继续下降到一定温度时,虫体开始结冰,此时的虫体温度即为过冷却点。过冷却点可被用来代表昆虫的耐寒性,因此在昆虫耐寒性研究中常常需要测定过冷却点。有多种因素影响过冷却点,笔者从环境因素与食物、昆虫发育阶段与生物学状态、含水量与生化物质以及冰核物质4个方面综述了昆虫过冷却点的影响因素,这些影响因素相互关联共同发挥作用。研究昆虫的过冷却点对于认识其抗冻耐寒特性与机理、保护益虫、防治害虫都具有重要的意义。
- 张瑞马纪
- 关键词：过冷却点环境因素发育阶段生化物质抗冻蛋白
- 温度胁迫对荒漠昆虫小胸鳖甲(鞘翅目:拟步甲科)幼虫热激蛋白基因hsp70表达的影响被引量：4
- 2014年
- 热激蛋白在昆虫响应环境胁迫中发挥作用,然而在准噶尔盆地的拟步甲科特有种小胸鳖甲Microdera punctipennis幼虫对环境的适应过程中热激蛋白如何发挥作用尚不清楚。本研究利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术测定了高低温处理后小胸鳖甲各龄幼虫热激蛋白hsp70基因的表达变化,以探讨小胸鳖甲幼虫hsp70对温度胁迫的响应方式。结果显示,在6-7龄幼虫中hsp70基因的表达水平是5龄之前幼虫的3-5倍,表明hsp70具有发育阶段性差异表达;各龄幼虫经42℃高温处理1 h后hsp70基因的表达量都迅速增加并达到高峰,其中2-5龄的响应非常强烈,可达对照的一千至数千倍;冷驯化低温5℃和10℃对不同龄期幼虫hsp70表达的影响有所不同,其中1龄和4龄幼虫对5℃和10℃均有上调响应,且1龄的响应程度远高于4龄;而7龄幼虫的hsp70表达则受5℃抑制,在10℃短时间内受到诱导,长时间则受到抑制;耐寒性测定结果显示,1龄和7龄幼虫无冷驯化现象,而4龄幼虫经过5℃或10℃冷驯化2 h可使其在-10℃的存活率提高25%,表明hsp70基因表达与小胸鳖甲耐寒性无直接相关性。本研究结果将有助于全面认识HSP70在荒漠昆虫环境适应性中的作用机制。
- 石萌刘晓静刘小宁马纪
- 关键词：幼虫温度胁迫HSP70基因
- 荒漠拟步甲科昆虫总RNA的有效提取及电泳图谱分析被引量：1
- 2013年
- [目的]获得高质量的总RNA是开展分子生物学研究的重要一步,由于不同生物的机体组成成分有较大差异,需要针对不同类型的物种建立各自有效的RNA提取方法。鞘翅目昆虫富含几丁质的外壳,常规方法难以获得高质量的RNA。[方法]以鞘翅目拟步甲科昆虫小胸鳖甲(Microdera punctipennis)为例,采用TRIzol试剂提取分离总RNA,方法略有改进,并对总RNA的电泳谱带特征进行鉴定。[结果]利用该方法从小胸鳖甲成虫中所获得的总RNA纯度较高完整性好,进一步实验证明提取的总RNA可满足RT-PCR等多种后续实验。琼脂糖凝胶电泳分析表明,其总RNA电泳谱带主要以18S带为主,28S则很弱。[结论]该提取方法对其他荒漠拟步甲科昆虫,尤其是含几丁质外壳的甲虫总RNA提取具有指导作用,小胸鳖甲总RAN的电泳谱带与哺乳动物肿瘤细胞的不同。
- 陆雪莹马纪
- 关键词：RNA提取TRIZOL法
