吉林省科技发展计划基金(20030406)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：刘永茂赵之恭朱武飞刘亚珍更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 人β-NGF蛋白的原核表达、纯化及其生物活性被引量：2
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人神经生长因子β(β-NGF)蛋白,并进行纯化及生物活性检测。方法以人外周血基因组DNA为模板,PCR扩增人β-NGF基因片段,克隆并测序后,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a-β-NGF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。采用分子筛层析法对表达产物进行纯化,复性后用鸡胚背根神经节培养试验检测其生物活性。结果酶切和测序证实,PCR扩增的人β-NGF基因片段为β-NGF成熟肽编码序列;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的23.5%,主要以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,表达量为4.8mg/L菌液,且可明显促进鸡胚背根神经节神经突起生长。结论已在大肠杆菌中成功表达了人β-NGF蛋白,纯化后的重组蛋白具有良好的生物活性。
- 朱武飞刘亚珍赵之恭刘永茂
- 关键词：大肠杆菌纯化生物活性
