国家自然科学基金(30540071)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 相关作者：井健张鑫蕊李森岳俊杰尹吉伟更多>>
- 相关机构：北京师范大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学机械工程更多>>
- 人胎盘膜联蛋白V cDNA的克隆及检测被引量：1
- 2007年
- 提取新鲜人胎盘组织的总RNA,利用RT-PCR技术扩增出膜联蛋白V(Annexin V)基因的编码序列,将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV5并转化到大肠杆菌DH5α中.对重组质粒进行DNA测序,其测序结果完全正确.成功地从人胎盘组织中克隆出Annexin V的全长基因并构建了该基因的真核表达载体,为今后该基因的表达及其生理作用的研究奠定了基础.
- 张鑫蕊井健
- 关键词：膜联蛋白VRT-PCR真核表达载体抗凝血
- 关于(A6,A11)-双位点突变胰岛素原作为外源肽呈递骨架可行性的研究
- 2009年
- 通过重组DNA技术,以(A6,A11)-双突变胰岛素原分子为支架构建了含有外源抗栓肽功能区的嵌合分子,并在大肠杆菌进行了表达和纯化.对嵌合分子进行胰岛素受体结合活性、放射免疫活性及抗血小板聚集活性分析,结果表明该嵌合分子具有较强的血小板聚集抑制活性,而无胰岛素生物活性,证明以(A6,A11)-双突变胰岛素原作为外源肽序列呈递骨架是可行的.
- 井健唐建国
- 人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达被引量：1
- 2007年
- 采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138-139位点插入了赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（KGD）序列的2种尿激酶原嵌合体基因（proUK-KGDW,proUK-KGDS）,并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34μkat·mL^-1,细胞密度为10^6·mL^-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×10^4,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性.
- 尹吉伟岳俊杰李森井健
- 关键词：尿激酶原纤溶活性
- 人膜联蛋白A5:从生物标志物到药物候选物
- 2022年
- 人膜联蛋白A5(human annexin A5,hAnxA5)是人体中一种重要的功能蛋白质分子,广泛存在于人体的细胞和体液中。hAnxA5作为具有特定结构、隶属于一个复杂成员膜联蛋白家族的一个成员分子,其生化特性也是非常独特的。它以钙离子依赖方式,可逆、特异性、高效地结合磷脂酰丝氨酸分子;并基于此特性发挥重要生物学功能,在诸多人体生理、病理现象中发挥重要作用。本文就hAnxA5的结构特点、生化特性、作用机制、影响效应以及在生物医学领域中的重要应用进行了较为系统的归纳与总结。游离态hAnxA5以单体形式存在,发挥生物学活性时通常形成聚合体形式。hAnxA5影响了人体的血管血栓疾病、自身免疫性疾病、肿瘤疾病、肺纤维化及肺损伤、非酒精性脂肪性肝炎等病理现象的发生与发展;hAnxA5作为疾病生物标志物,也应用在肿瘤、神经退行性疾病、心力衰竭、急性肾损伤和哮喘等疾病的研究中;作为新型药物候选物,hAnxA5及其衍生物被多次设计、运用于多类疾病的治疗探索,尤其在血管血栓类疾病的治疗探索上。对于hAnxA5的研究,仍存在某些空白与不足。对其研究的深入,不仅将拓展对于hAnxA5结构与功能关系的认识,而且将促进其在相关生物医学领域的应用。
- 张茜孟庆玉井健
- 关键词：磷脂酰丝氨酸生物标志物靶向药物凋亡检测
- 人膜联蛋白的表达及性质初步研究
- 2009年
- 基于人膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)cDNA分子构建了相应的大肠杆菌融合表达体系.通过摸索和优化表达条件,表达并纯化出可溶的GST-重组人Annexin Ⅴ融合蛋白.通过活化部分凝血活酶时间(tAPT)实验测定表明,GST-重组人Annexin Ⅴ融合蛋白能有效延长tAPT,具有较强的抗凝活性,且延长时间与剂量成线性关系.
- 梁盼盼张鑫蕊井健
- 关键词：融合蛋白部分凝血活酶时间
- 使用无细胞翻译体系合成尿激酶原突变体蛋白
- 2008年
- 应用无细胞翻译体系对KGD-尿激酶原重组蛋白质进行表达,表达产物以可溶状态存在,约占体系总蛋白质量分数的5%.使用亲和层析技术对表达产物进行纯化,纯化产物具有较好的分子均一性,并表现出明显的纤溶活性.
- 井健
- 关键词：纯化纤溶活性
