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抗内皮细胞抗体介导的内皮细胞损伤机制被引量：3: 2008年; 目的探讨抗内皮细胞抗体(antiendothelial cell antibody,AECA)对内皮细胞凋亡的影响及重组α-烯醇化酶对内皮细胞凋亡的阻断作用。方法以EA.hy926细胞(内皮细胞永生细胞)提取物蛋白为抗原,采用免疫印迹法检测并筛选47000-AECA阳性患者血清,用蛋白G亲和层析法纯化IgG,在体外诱导内皮细胞凋亡,观察重组α-烯醇化酶对凋亡的阻断作用。结果含47 000-AECA IgG在体外可诱导内皮细胞凋亡,荧光染色可见明显的核形态变化及典型的凋亡小体;含47 000-AECA系统性红斑狼疮患者的IgG作用于EA.hy926细胞24、48和72小时后,凋亡率均明显高于相同剂量正常人IgG作用EA.hy926细胞的凋亡率;而经重组α-烯醇化酶预处理后EA.hy926细胞凋亡率则明显降低。含47 000-AECA IgG作用于EA.hy926细胞8小时后,Annexin V^+细胞数明显增加,并随IgG作用时间和浓度的增加而升高;而经重组α-烯醇化酶预处理的含47000-AECA IgG作用于EA.hy926细胞后,AnnexinV^+细胞有所减少。结论AECA在体外可诱导内皮细胞凋亡,引起内皮细胞损伤;重组α-烯醇化酶可部分阻断47 000-AECA体外诱导内皮细胞凋亡的作用,α-烯醇化酶是AECA识别的自身抗原之一。; 郑文洁许江南阳洪波赵岩唐福林; 关键词：内皮细胞抗内皮细胞抗体细胞凋亡

系统性血管炎患者抗内皮细胞抗体的临床意义及其靶抗原被引量：9: 2008年; 目的研究抗内皮细胞抗体（AECA）在系统性血管炎（SV）中的阳性率、抗原成分及临床意义。方法免疫印迹法检测系统性血管炎、系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）、干燥综合征（pSS）及正常人血清中AECA阳性率，分析各组AECA与临床表现的相关性。结果（1）SV、SLE及SS中AECA阳性率明显高于RA及正常人组（P〈0．01）。（2）AECA为一异质性抗体，其抗原分子质量在16～110ku。SV和SLE中均有与分子质量47ku抗原结合的AECA。（3）AECA阳性的TA其血沉高于阴性组（P〈0．05）；WG、MPA、CSS中，AECA阳性者伯明翰血管炎活动性评分（BVAS）高于阴性组（P〈0．05）；BD中，47ku—AECA阳性组神经系统受损和CRP升高者多于阴性组（P〈0．05）。结论AECA与疾病活动性相关，在不同SV及SLE中可能存在共同靶抗原，且与疾病临床表现相关。; 王汉萍郑文洁唐福林赵岩田新平陈华; 关键词：内皮细胞抗内皮细胞抗体免疫印迹

系统性血管炎中抗内皮细胞抗体的检测及其靶抗原研究被引量：17: 2005年; 目的检测抗内皮细胞抗体(AECA)在系统性血管炎中阳性率,探讨其可能致病机制.方法实验组选取113例系统性血管炎患者,对照组为57例系统性红斑狼疮(SLE)、15例类风湿关节炎(RA)及20名正常人.提取EA.hy926内皮细胞株蛋白质,免疫印迹法检测以上各组患者血清中AECA阳性率,进而应用双向电泳结合免疫印迹法、液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,分离和鉴定AECA靶抗原.结果免疫印迹法检测结果显示,系统性血管炎、SLE患者AECA阳性率明显高于RA患者及正常对照组(P<0.01):系统性血管炎组AECA阳性率为69.0%(78/113) ,SLE和RA患者AECA阳性率为分别66.7% (38/57)、6.7%(1/15),20名正常人血清中均未检出AECA;系统性血管炎患者AECA主要识别的蛋白质相对分子质量为26 000～125 000,SLE患者主要识别的蛋白质相对分子质量为15 000～97 000.47000-AECA常见于AECA阳性的不同系统性血管炎和SLE患者血清中,经蛋白组学方法分离鉴定,其成分为α-烯醇化酶.结论不同的系统性血管炎和SLE患者血清中均有较高的AECA阳性率,AECA为一组与内皮细胞多种蛋白相结合的异质性抗体;不同系统性血管炎和SLE患者的AECA可能存在有共同的靶抗原(47 000 内皮细胞蛋白质),其成分为α-烯醇化酶.; 郑文洁唐福林赵岩陈华董怡; 关键词：抗内皮细胞抗体自身抗原双向电泳质谱分析

Induction of Endothelial Cell Apoptosis by Anti-alpha-enolase Antibody被引量：3: 2011年; Objective To assess the prevalence of anti-alpha-enolase antibody in systemic autoimmune diseases in Chinese patients and its role in endothelial cell apoptosis.Methods The reactivity of anti-alpha-enolase antibody in a variety of autoimmune disorders in Chinese patients was evaluated by dot blot assay.Endothelial cell apoptosis was investigated by in vitro incubation of endothelial cells with IgG purified from anti-alpha-enolase antibody-positive sera,with or without pre-incubation with recombinant alpha-enolase.Results Anti-alpha-enolase antibody was prevalent in different systemic autoimmune diseases with relatively high reactivity in Chinese patients.In vitro incubation of endothelial cells with IgG containing anti-alpha-enolase antibody induced apoptosis in a time-and dose-dependent manner.Apoptosis was partly inhibited by pre-incubation of the endothelial cells with recombinant alpha-enolase.Conclusions Our data suggest that alpha-enolase is a common auto-antigen recognized by anti-endothelial cell antibodies in connective tissue disease.Interaction between alpha-enolase and its autoantibody plays a role in endothelial cell apoptosis.Changes other than cell killing may contribute to the pathogenesis of endothelial damage and microvascular lesions.; Hong-bo YangWen-jie ZhengXuan ZhangFu-lin Tang; 关键词：烯醇化酶抗体反应斑点杂交

白塞病患者中抗内皮细胞抗体的研究被引量：13: 2005年; 目的研究白塞病患者抗内皮细胞抗体(AECA)的阳性率,并分析其临床意义。方法以固定的人脐静脉内皮细胞为抗原,细胞ELISA法检测59例白塞病患者中AECA的阳性率,分析其AECA与临床生化指标的相关性。同时检测70例其他原发性系统性血管炎(包括大动脉炎28例,韦格纳肉芽肿20例,结节性多动脉炎8例,显微镜下多血管炎9例,变应性肉芽肿血管炎5例)、57例系统性红斑狼疮(SLE)、25例类风湿关节炎和85例正常对照者中AECA阳性率。结果以人脐静脉内皮细胞为底物,细胞ELISA法检测的白塞病患者的AECA阳性率为47.5%(28/59),与类风湿关节炎患者(4.0%)和正常人组(1.2%)相比,白塞病、其他系统性血管炎(68.6%)和SLE(45.7%)患者AECA阳性率明显增高(P<0.01)。白塞病患者中,AECA阳性病人具有皮肤针刺反应阳性率明显增多(P<0.05)。随诊的6例白塞病患者治疗前后AECA滴度和血沉的变化,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白塞病患者有较高的AECA阳性率,且此抗体与白塞病的临床活动度明显相关,可作为观察其病情活动的指标之一。但其他原发性系统性血管炎和SLE患者亦有一定的AECA阳性率。; 郑文洁赵岩唐福林董怡; 关键词：贝赫切特综合征自身免疫疾病抗内皮细胞抗体

系统性血管炎中抗内皮细胞抗体的检测及其临床意义分析被引量：15: 2005年; 目的研究抗内皮细胞抗体(AECA)在系统性血管炎中阳性率,并分析其临床意义。方法固定的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为抗原,细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测129例系统性血管炎,57例系统性红斑狼疮(SLE)、25例类风湿关节炎(RA)等患者和85名正常对照者AECA阳性率并分析系统性血管炎组AECA与临床生化指标的相关性。结果系统性血管炎(58.9%)和SLE(46%)患者的AECA阳性率明显高于RA(4%)和正常人组(2.4%)(P<0.01)。AECA在不同系统性血管炎中阳性率分别为:白塞病(BD)48%(28/59)、大动脉炎(TA)79%(22/28)、韦格纳肉芽肿病(WG)65%(13/20)、结节性多动脉炎(PAN)63%(5/8)、显微镜下多血管炎(MPA)44%(4/9)、变应性肉芽肿血管炎(CSS)80%(4/5)。AECA阳性的TA患者的血沉(ESR)平均水平明显高于AECA阴性组(P<0.05)。PAN、WG、MPA、CSS患者中,AECA阳性者ESR水平(P<0.05)和伯明翰系统性血管炎临床活动评分标准(BVAS)值(P<0.01)明显高于AECA阴性者,BD患者中,AECA阳性病人具有皮肤针刺反应阳性率明显增多(P<0.05)。随诊的11例系统性血管炎患者治疗前后AECA滴度和ESR的变化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同的系统性血管炎和SLE患者血清中均有较高的AECA阳性率,且此抗体与系统性血管炎的临床活动度明显相关,可作为观察病情活动的指标之一。; 郑文洁赵岩唐福林; 关键词：血管炎酶联免疫吸附测定内皮细胞抗体抗内皮细胞抗体系统性血管炎 SLE患者

重组人内皮细胞抗原成分α烯醇化酶的表达及其在弥漫性结缔组织疾病中的意义被引量：2: 2008年; 目的对蛋白质组学分离和鉴定的抗内皮细胞抗体（AECA）相关抗原-α烯醇化酶进行基因重组和表达，检测其特异性抗体在血管炎和其他自身免疫性疾病患者血清中的阳性率。方法聚合酶链反应（PCR）扩增人enol基因CDS片段并与表达载体重组，在大肠杆菌中表达和纯化重组人α烯醇化酶。用质谱鉴定后的重组蛋白作为抗原，用点印迹法和酶联免疫吸附试验（ELISA）法分别检测健康人和不同结缔组织病患者血清中抗人α烯醇化酶抗体水平。结果克隆了人enol基因cDNA片段，将重组的人α烯醇化酶在大肠杆菌中进行原核表达和纯化。用重组蛋白作为抗原，点印迹法检测健康对照和不同结缔组织病患者血清中抗人α烯醇化酶抗体，证实：①系统性血管炎（SV）、系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）和类风湿关节炎（RA）患者血清中抗α烯醇化酶抗体的阳性率分别为76．7％、78．3％、63．6％和78．9％，均明显高于多发性肌炎／皮肌炎（PM／DM）组和健康对照组（P〈0．01）。②系统性血管炎中自塞病（BD）、多发性大动脉炎（TA）、韦格纳肉芽肿病（WG）、显微镜下多动脉炎（MPA）和Churg-Strauss综合征（CSS）患者血清中抗α烯醇化酶抗体阳性率各为74．0％、81．5％、62．5％、92．3％和80．0％。③SV和SLE患者血清中抗α烯醇化酶抗体的阳性率与SS和RA患者血清中该抗体的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。④不同患者血清中抗α烯醇化酶抗体强阳性者所占比例分别为：SV51．7％，SLE33．3％，SS42．9％，RA20．0％。RA组与SV组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SV和SLE、SS、RA患者血清中均存在不同水平的抗α烯醇化酶抗体，α烯醇化酶是AECA识别的自身抗体之一。; 阳洪波郑文洁王汉萍姚志建; 关键词：结缔组织疾病磷酸丙酮酸水合酶抗内皮细胞抗体

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国家自然科学基金(30400411)

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