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脑脊液127份14-3-3蛋白检测结果及分析被引量：2: 2005年; 郭燕军周伟冯子敬韩俊李伟荣赵伟秦王得新董小平; 关键词：脑脊液实验室诊断方法病理检测 CJD 克雅病

Tau融合蛋白及其缺失突变体与朊蛋白的体外作用分析被引量：1: 2006年; 在部分朊病毒病(priondiseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prionprotein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RTPCR方法从人源细胞系SHSY5YcDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GSTtau.利用GSTpulldown及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GSTpulldown和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.; 王小凡韩俊董辰方韩露万言珍李锋安润董小平; 关键词：朊蛋白分子间相互作用

一种朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立: 2007年; 目的建立一种类似于PCR的蛋白质扩增方法-蛋白错误折叠循环扩增技术（PMCA），用于朊病毒病脑组织中PrP^sc的检测。方法将不同浓度的羊瘙痒因子263K毒株原液与正常仓鼠脑组织匀浆混合，经反复孵育／超声，共10～15个循环。Western Blot检测扩增产物中蛋白酶K抗性PrP^sc信号。结果在本研究试验体系下，263K毒株可以利用仓鼠脑组织为基质在体外迅速复制。所建立的PrP^sc-PMCA技术可检测到10^-5稀释的毒株原液中的PrP^sc。与常规的脑组织免疫印记方法相比，敏感度提高了10^5～10^6倍。研究还显示PrP^sc。还可利用小脑和脑于为基质进行体外扩增复制。结论成功建立了PrP^sc-PMCA技术，为朊病毒病的早期诊断和朊病毒生物学特性的研究提供了一种新的手段。; 韩俊韩露石琦石菘王新张宝云董小平; 关键词：朊病毒

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国家科技攻关计划(2003BA712A0402)