国家自然科学基金(41366002)
- 作品数：16 被引量：18H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- α-芋螺毒素TxID对亚基不同配比α3β4乙酰胆碱受体的敏感性研究被引量：3
- 2016年
- 目的研究α-芋螺毒素TxID对具有不同亚基配比组成的大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChRs)的阻断活性敏感性。方法利用非洲爪蟾卵母细胞表达大鼠α3β4乙酰胆碱受体亚型,将其亚基α3和β4的cRNA分别以3种不同比例,即1∶1、1∶10或10∶1注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达,形成不同亚基配比的α3β4受体,分别检测和比较α-芋螺毒素TxID对这些不同亚基配比受体的阻断活性。结果成功表达了α3和β4亚基的3个不同配比的受体,且α-芋螺毒素TxID对它们的敏感性有较大差异,与常规的1∶1α3β4乙酰胆碱受体相比,1∶10α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度与之接近,其活性差异在2倍以内,而10∶1α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度显著下降,其活性差异超过了5倍。结论α-芋螺毒素TxID对不同亚基配比的α3β4乙酰胆碱受体有不同的敏感性,并能反应该受体的α和β亚基不同的组成方式,这对于研究α3β4乙酰胆碱受体的结构和生理功能具有很重要的指导意义。
- 长孙东亭吴勇朱晓鹏罗素兰
- 关键词：非洲爪蟾卵母细胞
- 不同因素对吗啡诱导的小鼠CPP实验的影响
- 2015年
- 为了比较不同因素对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)实验模型的影响,以建立理想的CPP模型,本实验首先筛选出符合条件的小鼠来注射吗啡(5 mg·kg-1),分为皮下注射和腹腔注射2种不同给药方式组,于不同给药时间组连续皮下注射吗啡3 d,5 d,7 d,并于不同测试时间(15 min或30 min)组,分别对小鼠进行CPP训练,然后进行测试,同时以小鼠在伴药箱(白箱)的活动时间为指标进行比较.结果表明:皮下注射和腹腔注射生理盐水组与吗啡组相比较,均存在极显著性差异(P<0.001);皮下注射吗啡组与腹腔注射吗啡组的差异性不显著(P>0.05),连续给药3 d,5 d,7 d均能成功建立CPP模型(P<0.001),CPP训练后,3 d吗啡组与5 d、7 d吗啡组相比较,均存在极显著差异(P<0.001),5 d与7 d吗啡组相比较,则存在显著性差异(P<0.05).在连续给药5 d的基础上,不同测试时间(15 min与30 min)吗啡组与生理盐水组相比较,小鼠在伴药箱的活动时间具有极显著差异性(P<0.001).由此得出结论:皮下注射和腹腔注射2种给药方式对吗啡诱导的小鼠CPP模型的建立无影响;连续注射5 d所建立的CPP模型更稳定,更经济,更理想;测试时间为15 min时更省时,更具代表性.
- 李晓丹胡远艳邴晖于树润丁青罗素兰长孙东亭
- 关键词：吗啡小鼠影响因素
- α-芋螺毒素LtIA镇痛活性的研究被引量：1
- 2016年
- 目的α-芋螺毒素LtIA(α-CTX LtIA,LtIA)是从海南产信号芋螺(Conus litteratus)中发现的α3β2乙酰胆碱受体(nAChRs)的特异阻断剂,拟对α-CTX LtIA的镇痛活性进行研究。方法通过小鼠热板和甩尾两种镇痛模型,采用侧脑室给药方式,测试α-CTX LtIA的镇痛效果。结果 0.2 nmol·只^(-1)的剂量侧脑室给药,在甩尾模型中,给药后15 min最大镇痛百分率为37.74%;在热板模型中,给药后60 min最大镇痛百分率达到48.81%。α-CTX LtIA在两种镇痛模型上都表现出良好的镇痛效果。结论α-CTX LtIA通过与乙酰胆碱受体α3β2亚型相互作用表现出良好的镇痛活性,这对LtIA今后作为镇痛药物的研发具有重要指导意义。
- 朱晓鹏于津鹏胡远艳于海鹏长孙东亭罗素兰
- 关键词：IA镇痛活性
- 人类疼痛实验模型方法及评价研究进展被引量：3
- 2013年
- 疼痛是各种疾病最常见的症状,是当今困扰人类健康最严重的问题之一。目前临床上应用的镇痛药种类有限,且大多具有镇痛效果不强和/或成瘾、耐受等明确的副作用,致使大量的疼痛患者得不到有效的治疗。因而急需开发新型不成瘾和副作用小的镇痛药。由于难以在人体对疼痛进行深入的机制和药效研究,往往通过建立疼痛的动物模型来筛选和鉴定镇痛候选药物。很多研究表明,根据动物疼痛模型的镇痛效果,很难预测其在人类身上的镇痛作用,导致临床研究常常出现令人困惑和模糊混乱的评价结果。新兴的人类疼痛实验模型,有望成为镇痛新药研发中联系动物实验和临床试验的有机桥梁,用于评价候选镇痛新药的作用机制和疗效,可为临床试验提供更加科学的设计方案,增加临床试验的成功率。该文拟对在健康志愿者身上进行的人类疼痛实验模型的研究进展进行综述,以期为加快新型镇痛药物的研发进程提供借鉴和参考。
- 长孙东亭罗素兰
- 关键词：镇痛
- 作用于肌肉型乙酰胆碱受体的生物毒素研究进展
- 2017年
- 目的近几十年,肌肉型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)成为神经生理学、药理学、药物设计及相关疾病研究的重要靶点。包括横纹肌肉瘤、小儿软组织瘤、肌源性紊乱等疾病都与肌肉型nAChRs的异常有关。因此寻找针对肌肉型nAChRs的特异性探针,对于研究受体的结构、功能及相关疾病发病机理与治疗药物研发至关重要。方法通过查阅相关文献对近年来发现的特异作用于肌肉型nAChRs的生物毒素进行了综述。结果与结论自然界中存在许多天然生物毒素,能特异作用于肌肉型nAChRs,这些毒素对于研究肌肉型nAChRs的结构和功能,以及相关疾病的诊断和治疗有着非常重要的应用价值。
- 黄艺罗素兰长孙东亭
- 关键词：芋螺毒素蛇毒蜘蛛毒素
- α7烟碱型乙酰胆碱受体点突变体的制备及其功能研究被引量：4
- 2017年
- 目的利用氨基酸定点突变技术以大鼠野生型α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)为模板制备α7nAChR突变体。方法采用体外转录、定点突变、凝胶电泳、双电极电压钳等技术对α7nAChR进行点突变,在非洲爪蟾卵母细胞上表达α7nAChR及其突变体,并研究其受体活性功能。结果将α7nAChR第111位的丙氨酸突变为丝氨酸,制备了α7nAChR的点突变体,测定了突变体对激动剂乙酰胆碱(ACh)的半数效应浓度(EC_(50))为165.6μmol/L。结论该结果不仅为受体定点突变提供了1种方法,同时为药物筛选和研究α7nAChR结构与功能关系提供了模型。
- 朱晓鹏于津鹏雷宇苗黄艺长孙东亭罗素兰
- 关键词：定点突变
- α-芋螺毒素TxID异构体对人类乙酰胆碱受体的活性研究被引量：1
- 2016年
- 研究α-芋螺毒素Tx ID 3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体的阻断活性。采用Fmoc固相合成法,分别合成α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体的线性肽,利用2步氧化法进行氧化折叠,获得具有定点连接二硫键的异构体多肽。利用非洲爪蟾卵母细胞表达人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型,测定3个异构体对该乙酰胆碱受体的电流与洗脱速率的影响情况。α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性差异很大,阻断是可逆的,洗脱速率较快。其中具有天然构象的球状异构体活性最强,其半数阻断剂量(IC50)仅约为9.3 nmol/L;其次是带状异构体具有很微弱的抑制活性,其IC50大于5μmol/L;而珠子状异构体几乎没有阻断活性,其IC50大于10μmol/L。成功合成了α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体,并获知了3个二硫键异构体分别对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性,为α-芋螺毒素Tx ID后续海洋新药研发提供理论基础。
- 长孙东亭朱晓鹏吴勇胡远艳邴晖罗素兰
- 关键词：ID
- 芋螺毒素MrIA的串联表达、纯化及生物活性鉴定
- 2016年
- 芋螺毒素(Conotoxins,CTxs)是一类特异作用于离子通道和膜受体的小分子多肽,是研究受体结构和功能及其相关疾病的重要工具。Mr IA是进入临床研究可用于镇痛治疗的一种T超家族的芋螺毒素。传统获取芋螺毒素是通过化学合成的方法,成本高、产量低。实验利用串联表达技术,构建原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中成功表达了芋螺毒素Mr IA(recombinant Mr IA,r Mr IA)。通过溴化氰切割和纯化,最终1L菌液可获得纯度高达95%的r Mr IA30mg。小鼠热板实验表明,r Mr IA具有较好的镇痛活性。这为大量获得Mr IA以及其他芋螺毒素小肽的表达提供了方法。
- 朱晓鹏张亚宁于津鹏李晓丹罗素兰长孙东亭
- 关键词：纯化电生理
- 转染乙酰胆碱结合蛋白基因到昆虫细胞的研究被引量：1
- 2014年
- 海兔(Aplysia californica)乙酰胆碱结合蛋白(Ac-AChBP)是研究烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的结构模板之一,它的高效表达对研究神经性相关疾病具有重要的意义。高效表达关键是要有高的转染效率,通过构建含(Ac-AChBP)基因的昆虫杆状病毒表达载体Bcmid,对脂质体转染Bcmid的多个条件进行探索,研究发现,当采用对数生长中期的细胞、细胞密度为2.5×106cells/mL,质粒DNA浓度为4.5×10-2g/mL和脂质体浓度为0.8 mL/L时,转染效率达到较高值,滴度为2×107±10%pfu/mL,同时证明高滴度病毒具有高的表达效率,而且表达蛋白具有生物活性。
- 林波孟海玲吴勇邴晖长孙东亭罗素兰
- 关键词：脂质体转染转染效率
- 静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达、纯化与结晶被引量：1
- 2014年
- 表达、纯化静水椎螺(Lymnaea stagnalis)乙酰胆碱结合蛋白(Ls-AChBP)并得到晶体。将静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白cDNA序列克隆到表达载体pFastBac1上,构建了重组表达质粒pFastBac1-Ls-AChBP-His,经重组子筛选,得到重组杆状病毒质粒Bacmid,采用CellfectinⅡ脂质体,把带有外源基因的杆状病毒质粒Bacmid转染到昆虫细胞中,经镍柱和凝胶色谱柱对重组蛋白进行纯化得到五聚体,并用机器人进行结晶筛选获得其蛋白晶体。重组蛋白Ls-AChBP在Bac-to-Bac表达系统中得到高效表达并被纯化,结晶筛选得到晶体。
- 林波孟海玲吴勇邴晖长孙东亭罗素兰
- 关键词：纯化
