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应用激光共聚焦显微技术研究Ca^2＋在三角帆蚌组织内的积累与分布被引量：12: 2011年; 为了探讨淡水贝类Ca2+吸收和转运信号传递机理,采用激光共聚焦技术研究了三角帆蚌不同组织细胞在静息状态下细胞内游离Ca2+浓度,以及水体Ca2+浓度对外套膜组织细胞内钙沉积的影响。试验选取10只健康的三角帆蚌,分别获得外套膜外膜、内膜、斧足、腮及内脏团上表皮组织细胞,短期培养后用Fluo-3/AM荧光探针孵育细胞1 h,观察细胞内Ca2+荧光强度。研究结果表明,蚌不同组织细胞内Ca2+荧光强度存在显著差异,外套膜外膜细胞内Ca2+荧光强度最高,内脏团上表皮细胞的最低(P<0.05);育珠三角帆蚌在相同Ca2+浓度的孵育水平下,外套膜细胞内Ca2+荧光强度比非育珠蚌都有增加的趋势,其中在1.25 mmol/L添加组中,两组外套膜内膜细胞内Ca2+荧光强度差异达到显著水平(P<0.05);不同Ca2+孵育水平对细胞内Ca2+荧光强度有显著影响(P<0.05),随着Ca2+在孵育液中浓度的升高,外套膜细胞内Ca2+荧光强度显著增强(P<0.05),表明外套膜是从外界吸收Ca2+的主要组织,蚌体珍珠的培育增强了其对Ca2+的沉积,并且水体Ca2+浓度在1.25～3.00 mmol/L有助于蚌体内Ca2+的贮藏,这对进一步开展淡水蚌类育珠学研究提供了基础理论,为珍珠培育的生产实践工作提供了依据。; 李文娟施志仪郝莹莹叶显峰; 关键词：三角帆蚌细胞培养

维生素D_3对三角帆蚌外套膜细胞内Ca^(2+)浓度的影响被引量：2: 2011年; 采用胰酶消化法获得三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜细胞,用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)检测外套膜内外表皮细胞在静息状态下细胞的游离Ca2+浓度及不同浓度维生素D3(VD3)孵育后的外套膜细胞的Ca2+的动态情况。结果表明,未添加VD3(1.25 mmol/L Ca2+)时,外套膜外表皮细胞的Ca2+荧光强度显著高于内表皮细胞内的Ca2+(P<0.05)。在添加不同浓度VD3后,内表皮细胞与外表皮细胞内Ca2+浓度变化趋势一致,表现为细胞内Ca2+沉积量的变化是随着VD3浓度的增大而增大,其中,对照组与添加50 IU/L组差异不显著(P>0.05);当添加浓度为100 IU/L时,与对照组和50 IU/L组差异显著(P<0.05);当添加组浓度达到500IU/L时,与前3组有显著差异(P<0.05);当添加的浓度增大到1 000 IU/L后与500 IU/L组差异不显著(P>0.05),但与其他组均存在显著差异(P<0.05)。本实验为外套膜细胞的钙代谢机制研究提供了实验依据。; 郝莹莹施志仪李文娟靳雨丽; 关键词：三角帆蚌激光共聚焦扫描显微镜

三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响被引量：7: 2010年; 为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3′-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3′端序列进行克隆,得到850bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%。试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60kD的Nacrein蛋白。此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要早。研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响。本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义。; 韩健李文娟施志仪郝莹莹靳雨丽

三角帆蚌外套膜细胞体外培养优化及体内植入培养对细胞生长的影响被引量：6: 2014年; 以DMEM为基础培养基,通过优化改良培养基及缓冲液的配方,对三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜进行细胞培养,并且以显微观测、RNA/DNA的比值作为该细胞增殖的评价指标,分别对体外培养细胞的迁出时间、速度、数量以及增殖活力进行测定。分别取体外培养第24、108、120小时的细胞进行Hoechst DNA荧光标记,然后将3组标记细胞植入三角帆蚌外套膜中在蚌体内培养,在植入后第24、72、120、168、216小时运用RNA/DNA指标检测活体培养的细胞增殖活力。结果表明,经过优化后的缓冲液和培养基更有利于细胞从外套膜组织中迁出,迁出速度和细胞数量显著增加(P<0.05),且细胞的活力随着培养时间的延长而逐渐增大,培养至108 h时,细胞活力达到最大,RNA/DNA比值为24.53,在108 h后显著下降(P<0.05),显微观测的细胞生长状况与RNA/DNA指标测定相吻合。对体外培养的细胞植入蚌体外套膜中再进行培养时发现,对体外培养活力较好的细胞,活体内环境可增大细胞的活力,RNA/DNA比值最高达到25.45,但在活体培养168 h后活力显著下降(P<0.05);而对体外培养活力较差的细胞,活体内环境对细胞活力影响不显著(P>0.05)。本研究旨在为三角帆蚌外套膜细胞增殖的深入研究及建株提供基础性资料。; 李倩施志仪李文娟黄凯祁晓翔; 关键词：三角帆蚌外套膜细胞培养 RNA 淡水珍珠

三种不同因子对三角帆蚌外套膜细胞Ca^(2+)流动性的影响被引量：5: 2010年; 三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我国主要的育珠母蚌,其所培育出的珍珠色泽鲜艳、细腻光滑,因而成为目前淡水育珠生产中首选的育珠母蚌之一。蚌的外套膜是贝壳和珍珠形成的重要组织器官,有内外两层表皮细胞及其间的结缔组织构成。它对钙具有高度通透性,其上皮细胞具有通过细胞膜主动吸收Ca（2＋）和贮存Ca（2＋）的功能,并通过胞吐作用排出钙至外套膜外腔中,这些钙就是形成珍珠的基础。; 施志仪郝莹莹李文娟韩健靳雨丽; 关键词：三角帆蚌

基于高通量测序的三角帆蚌生物矿化形成珍珠的分子基础研究: 在中国淡水珍珠养殖产业中，高产低值现象十分严重，急需提高我国淡水珍珠颗粒大小和品质，进而提升珍珠养殖效益，这也符合水产养殖转型升级与绿色高质量发展的要求。　　外套膜作为首选的育珠部位，空间小、组织薄，限制了大核珍珠的培育...; 轩兴荣; 关键词：三角帆蚌高通量测序基质蛋白基因筛选; 文献传递

运用微电极技术测定三角帆蚌外套膜Ca^(2＋)流量的研究被引量：8: 2011年; Ca既是珍珠和贝壳中的主要组成成分（CaCO3占95%以上）,又是普遍存在的细胞内第二信使,在生物体内承担着非常重要生理功能。生物矿化的研究表明外套膜细胞在珍珠和贝壳生长中起着非常重要的作用[1,2],并且Ca^2＋在外套膜中也保持一个较高的水平^[3]。研究贝类Ca代谢，特别是外套膜组织的Ca^2＋跨膜转运，对进一步阐明贝壳以及珍珠形成机理，提高优质珠的产量都有着重要意义。; 李文娟施志仪郝莹莹韩健靳雨丽叶显峰; 关键词：三角帆蚌

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上海市博士后科研资助计划资助(09R21413200)

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