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美洲南瓜(Cucurbita pepo)种皮苯丙氨酸解氨酶基因克隆与表达分析被引量：29: 2014年; 【目的】克隆有壳美洲南瓜种皮PAL基因(CP-PAL),研究PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育过程中的表达特性,为揭示美洲南瓜种皮发育机理及木质素积累在南瓜种皮发育中的作用等方面提供理论依据。【方法】利用RT-PCR,结合RACE技术克隆CP-PAL的全长序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术,采用2-△△Ct方法对种皮发育过程中PAL基因的表达进行分析。【结果】CP-PAL序列全长为1 720 bp,含有一个1 359bp的ORF,114 bp 5′端非翻译区、236 bp 3′端非翻译区及11 bp polyA结构,可编码452个氨基酸,分子量为48.86 kD,等电点为6.55,原子总数为6 885个,分子式为C2158H3449N607O657S14。通过BLASTX比对表明CP-PAL核苷酸序列及其氨基酸序列与黄瓜PAL核苷酸及其氨基酸序列的相似性最高。CP-PAL包含PAL-HAL、PLN02457及phe_am_lyase 3个结构域及酶活性中心序列(GTITASGDLVPLSYIA),属于Lyase_I_Like超家族。CP-PAL不具有导肽及信号肽,为非跨膜蛋白,可能定位于细胞质及内质网上,属可溶性蛋白。CP-PAL蛋白含有4个酪蛋白激酶Ⅱ识别位点、6个蛋白激酶C识别位点、12个豆蔻酰化位点及2个糖基化位点。此外,分析可知CP-PAL有18个丝氨酸磷酸化位点、6个苏氨酸磷酸化位点及5个酪氨酸磷酸化位点。无规则卷曲是CP-PAL蛋白二级结构中最大量的结构元件,α-螺旋和延伸链分散于整个蛋白质中,且N-末端以无规则卷曲形式存在,C-末端以延伸链形式存在。CP-PAL氨基酸序列同挑选的其他14种植物的PAL氨基酸序列进行多重序列比较,发现功能区域的氨基酸序列较为保守,N-端的差异最大。系统进化树分析表明CP-PAL和黄瓜PAL蛋白的亲缘关系最近。CP-PAL蛋白三级结构以α-螺旋为主要结构元件,β-转角和无规则卷曲较少。实时荧光定量PCR分析表明PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育中呈现反向对应的变化趋势:有壳美洲南瓜种; 刘佳徐秉良薛应钰张树武陈荣贤; 关键词：美洲南瓜种皮苯丙氨酸解氨酶基因克隆

西瓜花叶病毒诱导对不同抗性美洲南瓜防卫基因表达的影响被引量：1: 2015年; 为了明确防卫基因PAL与美洲南瓜抗西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)之间的关系,通过室内接种和实时荧光定量PCR技术,测定了WMV侵染对不同抗性美洲南瓜体内防卫基因PAL表达的影响。结果表明:(1)室内测定显示,抗病品种GBRV-8发病率和病情指数(15.6%和14.2)显著低于感病品种‘光板’(91.1%和65.9)。(2)实时荧光定量PCR表明,接种WMV后不同抗感品种不同组织部位PAL基因相对表达量随着接种时间增加,整体呈现出先增加后降低的趋势,而且不同组织部位PAL基因相对表达量总体呈现出叶片较高,叶柄和茎秆次之。(3)接种后5个品种不同组织部位PAL基因相对表达量与对照相比均存在显著差异,且抗病和中抗品种不同组织部位PAL基因相对表达量显著高于感病品种,尤其抗病品种GBRV-8不同组织部位PAL基因相对表达量最高,感病品种光板最低。研究认为,防卫基因PAL表达量与美洲南瓜品种抗病毒病强弱密切相关。; 张树武徐秉良刘佳薛应钰陈荣贤; 关键词：美洲南瓜

白粉病菌侵染对美洲南瓜不同抗性品种PAL基因表达量的影响被引量：4: 2015年; 为明确白粉病菌侵染对不同美洲南瓜抗性品种PAL基因表达量的影响,采用室内接种和qRTPCR技术分别测定不同美洲南瓜抗性品种接种苍耳单囊白粉菌后发病率和病情指数,并分析接菌后其不同组织部位PAL基因表达量的变化情况。室内测定结果表明,抗病品种小三星F2发病率和病情指数显著低于感病品种金12F2,尤其接菌后第13天,小三星F2发病率和病情指数分别为17.3%和15.6,而金12F2发病率和病情指数分别为93.3%和83.0。PAL基因表达量测定结果表明,不同抗性美洲南瓜接菌后,PAL基因相对表达量显著升高,且随着接种天数增加,其不同组织部位PAL基因相对表达量呈现出先增加后降低的趋势。抗病品种小三星F2接菌后叶片中PAL基因相对表达量增加较为显著,叶柄和茎秆次之,并且其相对表达量分别在第7和第9天达到最大值;感病品种金12F2接菌后叶片中PAL基因相对表达量较抗病品种低,但与对照相比,其PAL基因相对表达量显著增加,并分别在第9和第11天达到最大值。因此,PAL基因相对表达量与美洲南瓜抗白粉病强弱具有密切的关系。本研究可为南瓜抗病品种的选育提供科学依据。; 张树武徐秉良刘佳薛应钰陈荣贤; 关键词：美洲南瓜

康乃馨锈病病原鉴定及药剂筛选被引量：6: 2013年; 通过鉴定发现引起甘肃省康乃馨锈病的病原为石竹单胞柄锈菌(Uromyces dianthi Niessl.);分别采用孢子萌发法和田间喷雾法、灌根法对防治康乃馨锈病的药剂进行了室内筛选和田间药效试验。结果表明,12.5%烯唑醇可湿性粉剂、25%嘧菌酯悬浮剂等7种药剂对康乃馨锈病夏孢子的萌发抑制率均超过50%;对筛选出的7种药剂进一步进行田间药效试验,发现采用喷雾法时12.5%烯唑醇可湿性粉剂、25%嘧菌酯悬浮剂和10%苯醚甲环唑水分散粒剂三种药剂的防效高于其他几种药剂,分别达70.2%、68.3%和65.0%,而灌根法对康乃馨锈病的防效并不理想,最高防效仅为8.1%。; 陈刚梁巧兰徐秉良徐琼彭志云; 关键词：锈病病原鉴定药剂筛选

硅酸钠对裸仁美洲南瓜酚类物质含量的影响与抗白粉病的关系被引量：2: 2012年; 以裸仁美洲南瓜抗、感病品种为材料,测定了硅酸钠溶液喷雾处理南瓜幼苗后诱导接种白粉菌对不同抗病品种裸仁美洲南瓜叶片中酚类物质、绿原酸、类黄酮3种物质在不同处理时期含量变化的影响。结果表明,硅酸钠诱导处理后不同抗性品种南瓜叶片中的酚类物质、绿原酸、类黄酮等物质含量均明显升高,抗病品种中酚类物质含量在第5 d、7 d、9 d时分别高于对照和接菌处理的,绿原酸含量在各个处理时间均高于对照和接菌处理的,类黄酮含量在第7 d、9 d时分别高于对照和接菌处理的;感病品种中酚类物质含量和绿原酸含量分别在第5 d、7d和9 d时高于对照和接菌处理;类黄酮含量在第3 d、5 d、7 d和9 d时均高于其他处理;硅酸钠诱导处理后,大多数情况下抗病品种的酚类物质(除第7 d外)、绿原酸(除第7 d、9 d外)、类黄酮等含量均高于感病品种,差异显著,且在接种后第10 d和第15 d白粉病病情指数明显下降。; 梁巧兰魏列新徐秉良; 关键词：白粉菌硅酸钠酚类物质

裸仁美洲南瓜白粉病菌对几种杀菌剂敏感性及抗药性诱导被引量：4: 2012年; [目的]研究南瓜白粉病菌对几种杀菌剂敏感性及抗药性产生情况。[方法]防效试验采用室内盆栽方法和离体叶片含药培养基法。[结果]筛选出10%苯醚甲环唑WG、62.5%锰锌.腈菌唑WP、5%腈菌唑EC、2%农抗120 AS、70%甲基托布津WP和5%己唑醇ME 6种杀菌剂对南瓜白粉病菌有较好防效。接种后不同施药时间能够影响南瓜白粉病菌对杀菌剂的敏感性。[结论]筛选出的6种杀菌剂防效均在80%以上;几种药剂在不同时间对南瓜白粉病的EC50值测定结果表明:5%腈菌唑EC和70%甲基托布津WP、5%己唑醇ME和62.25%锰锌.腈菌唑WP、2%农抗120 AS分别在接菌后48、96、120 h施药较为敏感,而10%苯醚甲环唑WG和70%甲基托布津WP在接菌前24 h施药敏感;连续2次使用相同杀菌剂防治南瓜白粉病菌后,病原菌对5%己唑醇ME产生了轻度抗性,抗性倍数为6.79。; 梁巧兰魏列新徐秉良; 关键词：白粉病菌杀菌剂敏感性

康乃馨锈病病原生物学特性研究被引量：3: 2013年; 采用孢子萌发法对引起甘肃省康乃馨锈病病原菌的生物学特性进行研究,结果表明:25～28℃、100%相对湿度、1%的葡萄糖液和无菌蒸馏水、黑暗、pH7等有利于康乃馨锈病病原菌夏孢子的萌发,夏孢子的致死温度为42℃(20min)或43℃(10min);对冬孢子采用与夏孢子相同的研究方法,但均未见有萌发。; 梁巧兰陈刚徐秉良徐琼彭志云; 关键词：锈病生物学特性

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国家自然科学基金(31060261)

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