广东省自然科学基金(1015101820100022)
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- 三种非病毒载体对神经母瘤细胞进行转染的效果比较
- 2012年
- 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,研究Lipofectamine2000、改良纳米材料CS(N/P=10)和纳米粒子PAMAM(N/P=20)介导的基因导入系统对神经母瘤细胞SH-SY5Y的毒性及基因转染效率,为神经系统疾病的基因治疗奠定基础。方法制备Lipofectamine2000、CS和PAMAM与质粒DNA(pDNA)的复合物,分别转染在体外培养的人胚肾细胞Hek293和SH-SY5Y,利用噻唑蓝(MTT)比色实验比较三种载体的细胞毒性作用、用激光共聚焦显微镜观察转染后的细胞形态、倒置荧光显微镜检测转染细胞EGFP表达强度、流式细胞仪检测转染效率。结果①Lipofectamine2000、CS和PAMAM转染细胞存活率在Hek293细胞分别为73.09%、73.69%、69.24%,三者比较无显著差异;在SH-SY5Y细胞分别为67.69%、61.71%、42.92%,前两者均显著高于后者(P均<0.05)。②Hek293细胞经Lipofectamine2000和CS与pDNA的复合物分别转染后,细胞形态均未发生明显改变,保持梭状生长;而PAMAM/pDNA复合物转染后,细胞发生皱缩,呈圆形分布生长。经三种载体转染后的SH-SY5Y细胞均发生形态改变,其中PAMAM/pDNA复合物转染者形态改变程度相对较大。Hek293细胞和SH-SY5Y细胞中,均以Lipofectamine2000/pDNA复合物转染者EGFP表达强度最大,其次为CS/pDNA复合物、PAMAM/pDNA复合物转染者。④Lipofectamine2000、CS和PAMAM的转染效率在Hek293细胞分别为60.9%、45.2%、42.7%,前者显著高于后两者(P均<0.05);在SH-SY5Y细胞分别为25.3%、19.2%、8.9%,前两者均显著高于后者(P均<0.05)。结论 Lipofectamine2000为目前最适于神经系统疾病基因治疗研究的非病毒载体;改良后的新纳米材料CS毒性比PAMAM小、转染效率比PAMAM高,有望在神经系统疾病研究中得到进一步运用。
- 高聪李威梁兵袁芳谢富华林哲聪
- 关键词：阳离子脂质体新型纳米材料SH-SY5Y细胞基因转染效率
