国家自然科学基金(30400475)
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 相关作者：崔保霞马道新孔北华杨兴升乔云波更多>>
- 相关机构：山东大学潍坊市人民医院山东省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小染色体维持蛋白5基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达与意义
- 2006年
- 目的:探讨微小染色体维持蛋白5(MCM5)基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法分别半定量检测MCM5mRNA和MCM5蛋白在正常卵巢、卵巢上皮性肿瘤组织中的表达。结果:MCM5mRNA和蛋白在不同卵巢组织中的表达趋势是一致的,上皮性癌组织中的表达高于正常和上皮性良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。MCM5mRNA和蛋白在不同年龄组、不同病理类型的肿瘤中表达差异无统计学意义(P>0.05)。MCM5mRNA和蛋白的表达水平随组织学级别的升高而升高,在低分化(G3)上皮性癌中的表达高于高分化(G1)和中分化(G2)癌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MCM5的表达可能参与卵巢上皮性癌的发生发展过程,其表达水平与肿瘤的分化程度有关,可能做为新的卵巢肿瘤增生标志物。
- 钟艳慧杨兴升曲迅李华刘洁崔保霞
- 关键词：微小染色体维持蛋白5卵巢肿瘤基因表达
- hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达被引量：4
- 2007年
- 目的研究hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达,探讨CD137L靶向基因治疗的可行性。方法采用RT-PCR法从K562细胞中克隆CD137L全长基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建的质粒为pcDNA3-hCD137L,用HindⅢ和XbaⅠ双酶切后将CD137L再定向插入pBTdel-279中,构建成hTERT启动子调控下CD137L表达载体pBTdel-279-hCD137L,采用酶切法和测序法鉴定。用Fugene6转染试剂盒将两种重组质粒分别瞬时转染人卵巢癌细胞株OVCR3和人胚肺成纤维细胞株HELF,RT-PCR和流式细胞仪检测CD137L的表达。结果测序证实所克隆的CD137L基因序列与GENE-BANK中的序列相符。经限制性内切酶酶切,电泳后显示片段插入正确,证实构建成功。pcDNA3-hCD137L转染后OVCR3细胞和HELF细胞均可检测到CD137L的表达,但pBTdel-279-hCD137L转染后仅在OVCR3细胞中检测到其表达,在HELF细胞中无表达。流式细胞显示pBTdel-279-hCD137L转染效率低于pcDNA3-hCD137L。结论hTERT启动子调控下CD137L表达载体构建正确,并可在卵巢癌细胞中较高表达,为探讨靶向基因治疗提供了实验依据,但hTERT启动子活性仍低于CMV启动子。
- 张溪崔保霞马道新孔北华
- 关键词：CD137L人端粒酶逆转录酶基因疗法
- VP22增强慢病毒介导的自杀基因治疗抑制人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤生长的研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨单纯疱疹病毒壳膜蛋白VP22的细胞间传递作用促进HSV-TK/GCV(单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦)系统对卵巢癌腹腔移植瘤的杀伤效应。方法:将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞293T,收集病毒上清,并建立人上皮性卵巢癌(3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为TK+生理盐水(NS)组、VP22-TK+NS组、NS+NS组,分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK或NS1ml,继而腹腔注射NS;联合用药组分为TK+GCV组、VP22-TK+GCV组、NS+GCV组分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK及NS,24h后腹腔注射GCV治疗。每组裸小鼠均为5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果:平均生存时间TK+NS组、VP2-TK+NS组、NS+NS组、NS+GCV组、TK+GCV组、VP2-TK+GCV组分别为18.3±2.7d、18.4±1.9d,17.2±1.3d、18.7±1.9d、21±4d和46±22d,6组差异有显著性(χ2=24.81,P=0.002);并且VP2-TK+GCV组平均生存时间较TK+GCV组裸鼠明显延长(χ2=7.42,P=0.006)。结论:VP22介导的自杀基因产物的细胞间扩散作用可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。
- 王文霞崔保霞马道新
- 关键词：更昔洛韦自杀基因治疗裸小鼠
- 细胞外信号调节激酶信号通路对蛋白酶体抑制剂MG262诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的调控作用
- 2008年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路对蛋白酶体抑制剂MG262诱导卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞凋亡的调控作用。方法不同浓度（1、10、20、40、60、80nmol／L）的MG262分别处理卵巢癌细胞株SKOV3细胞24、48h后，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测SKOV3细胞的存活率。MG262及ERK抑制剂PD98059分别及联合处理24h后，流式细胞仪检测SKOV3细胞及胚肾上皮细胞株293T细胞的凋亡率；酶联免疫吸附试验（ELISA）及蛋白印迹法分别检测SKOV3细胞培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度及细胞内VEGF蛋白的表达。MG262处理不同时间（3、6．9、12h）后，蛋白印迹法检测SKOV3细胞内磷酸化ERK（p-ERK）及野生型p53蛋白的表达。以上实验以未加药物者为对照。结果MTr比色法检测发现，随着MG262浓度的增加，SKOV3细胞的存活率明显下降（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现，MG262、PD98059分别或联合处理SKOV3细胞后，其细胞凋亡率分别为（30．7±4．3）％、（26．8±8．6）％、（50．3±10．6）％，与对照细胞的（7．9±1．9）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；两药单独处理者分别与联合处理者比较，差异也均有统计学意义（P〈0．01）。而两药分别或联合处理293T细胞后，其细胞凋亡率分别为（14．5±5．3）％、（16．2±7．5）％、（10．8±7．3）％，与对照细胞的（12．2±6．3）％比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。ELISA及蛋白印迹法检测显示，MG262处理后SKOV3细胞培养上清液中VEGF的浓度及细胞内VEGF蛋白的表达水平均明显下降（P〈0．05）。MG262处理不同时间后，SKOV3细胞内p-ERK蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）；但SKOV3细胞内野生型p53蛋白在MG262处理前、后均无表达。结论MG262可通过ERK信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制卵巢癌细胞的增殖及血管生成。
- 王文霞孔北华李鹏宋坤曲迅崔保霞姜洁张友忠杨兴升
- 关键词：细胞凋亡硼酸化物细胞外信号调节MAP激酶类信号传导
- 血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta-tin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI)。结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组。结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的。
- 孙平董典宁崔保霞
- 关键词：ANGIOSTATIN基因疗法抗血管生成治疗
- 白细胞介素21及白细胞介素12单用或联合应用对子宫内膜癌患者外周血单核细胞抗肿瘤活性的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察白细胞介素(IL)21及IL12单用或联合应用对子宫内膜癌患者外周血单核细胞(PBMCs)抗肿瘤活性的影响。方法体外分离子宫内膜癌患者外周血中的PBMCs,用低浓度IL2维持培养,经不同的刺激条件(对照组、抗IL21组、IL21组、IL12组和IL21+IL12联合组)诱导培养72 h后,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMCs的细胞毒活性,流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+T调节性细胞(Treg细胞)和CD4+IL17A+T辅助17细胞(Th17细胞)的含量,细胞活性检测试剂-8(CCK-8)法检测PBMCs的增殖能力,流式细胞术检测PBMCs的凋亡情况。结果与对照组相比,IL21及IL12可显著增强PBMCs细胞毒活性,IL21+IL12联合组的效果优于单用IL21组和IL12组。IL21及IL12可显著降低Treg细胞含量,抑制PBMCs凋亡。不同细胞因子处理组对Th17细胞的含量和PBMCs的增殖能力均无显著影响。结论 IL21及IL12可增强子宫内膜癌患者PBMCs的细胞毒活性,联合应用效果更明显。抑制Treg细胞的分化和PBMCs的凋亡可能为其机制之一,而与Th17细胞的分化无关。
- 田永菊崔保霞马道新张妍侯菲张文静
- 关键词：外周血单核细胞细胞毒活性TREG细胞TH17细胞
- 抑制磷脂酰肌醇-3-羟基激酶/蛋白激酶B信号传导通路对宫颈癌放疗增敏的作用被引量：7
- 2010年
- 目的:探讨抑制磷脂酰肌醇-3-羟基激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号传导通路对宫颈癌的放疗增敏作用。方法:选用LY294002为PI3K阻滞剂。培养PI3K功能活性和AKT磷酸化水平稳定的人宫颈癌HeLa细胞株,皮下注射于BALB/C裸鼠体内,建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为空白对照组、单纯放疗组、单纯药物组(LY294002)和联合治疗组(放疗+LY294002)。应用Western blotting检测各组AKT磷酸化(phospho-Ser473AKT)水平。通过克隆形成实验检测LY294002在体内的放射增敏作用。长期观察肿瘤体积的变化并绘制肿瘤生长曲线。结果:Western blotting显示,联合治疗组的AKT去磷酸化现象最显著。克隆形成实验显示,LY294002与放射治疗对肿瘤细胞生长的抑制在各剂量水平均表现出协同作用(P<0.05)。肿瘤生长曲线表明联合治疗组的肿瘤体积增长最缓慢。结论:PI3K阻滞剂显著增强宫颈癌对放射治疗的敏感性。
- 刘艺崔保霞乔云波李贞张友忠马道新姜洁孔北华
- 关键词：宫颈肿瘤辐射增敏药PI3K抑制剂LY294002
- CD137L基因转染对小鼠体内卵巢癌细胞生长的影响及其免疫调节研究
- 2007年
- 目的:初步探讨转染CD137L基因的小鼠卵巢癌细胞株OVHM细胞体内的致瘤性及其对免疫功能的影响。方法:以脂质体为载体将重组质粒pcDNA3.1和pcD-NA3.1/CD137LL分别导入OVHM细胞中,经HygroB筛选,用RT-PCR法检测目的基因的表达,筛选建立高表达的细胞株。计数法绘制体外培养细胞生长曲线。将转染前后的肿瘤细胞,分别接种于B6C3F1小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。LDH法测定其CTL细胞的杀伤活性。结果:与野生型OVHM细胞相比,所建立的OVHM/CD137L细胞株可高表达CD137L。转染前后肿瘤细胞的体外生长速度无明显变化。OVHM/CD137L细胞在小鼠体内的致瘤性较OVHM/pcDNA3.1细胞和野生型OVHM细胞明显降低。接种OVHM/CD137L细胞小鼠的CTL细胞杀伤活性明显增强。结论:转染CD137L基因后OVHM细胞在小鼠体内的致瘤性显著降低,且诱导产生了明显的抗肿瘤免疫。CD137L有望成为卵巢癌基因治疗的候选基因。
- 王妍崔保霞马道新杨兴升
- 关键词：卵巢肿瘤基因转染肿瘤免疫
