国家自然科学基金(30400474)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 3T3-L1脂肪细胞诱导分化与肿瘤抑制因子PTEN的表达研究被引量：5
- 2007年
- 目的优化3T3-L1脂肪细胞分化条件,研究信号因子PTEN在分化过程中的表达,以了解PTEN是否通过表达量来调节正常脂肪细胞形成,为探索PTEN的药物靶标作用奠定基础。方法DMEM高糖培养基培养3T3-L1脂肪前体细胞,地塞米松、3-异丁基1-甲基黄磦呤(IBMX)和胰岛素按2种组合方案分别诱导3T3-L1细胞分化,油红O染色鉴定脂肪细胞,蛋白裂解液提取细胞总蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分化过程中PTEN的表达量,用生物信息学进行小鼠和人类PTEN的同源性分析。结果1μmol/L地塞米松、0.5μmol/LIBMX和5μg/ml胰岛素诱导48h后,再用含5μg/ml胰岛素的DMEM高糖营养液培养48h的方案对3T3-L1细胞诱导分化效果较好,脂肪细胞分化率高且均一,在分化第10天可见90%以上细胞分化为脂肪细胞。PTEN在脂肪细胞分化过程中表达量在第0、4th、6th、9th和第12天时不一致,在12天时明显下降,显著低于诱导前。同源性比对分析表明,小鼠和人类的PTEN mRNA编码序列匹配率为96%,而氨基酸序列匹配率为100%。结论内源性PTEN在小鼠3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化为脂肪细胞的时相过程中表达量有所变化,提示PTEN可能在生理条件下即可发挥提高胰岛素敏感性和促进脂肪细胞形成的作用。
- 李运雄孟锦绣蔡雪珍李东风荣卡彬蒋文玲张仁礼余细勇
- 关键词：PTEN脂肪细胞IBMX
- 三种荧光标记的短双链RNA体外转染特性的比较
- 2007年
- 目的:比较三种不同荧光标记的短双链RNA(siR-NA)体外转染特性.方法:利用脂质体LipofectamieTM2000转染三种荧光标记siRNA入小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3,流式细胞仪观察转染效率,普通倒置荧光显微镜观察其淬灭情况,激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的分布情况.结果:相同转染条件下三种荧光siRNA进入细胞的速度,细胞内的定位不同,转染效率不同,三种荧光标记的抗淬灭能力也不同.结论:荧光标记siRNA可以起到良好的示踪作用.用荧光标记siRNA作为无荧光siRNA的分布和转染效率参照时,要考虑到所选用荧光标记siRNA与无荧光标记siRNA的差异.
- 马芸张仁礼朱志华闻安民高军周灿权陈系古
- 关键词：荧光标记SIRNA转染
- 靶向SMPD1基因的RNA干扰对人成纤维细胞凋亡的保护作用被引量：3
- 2007年
- 【目的】以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA(siRNA)对酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组(lipofectamine 2000),瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡,MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用。【结果】小干扰RNA1,2,3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%,39%,63.2%,以siRNA1最高,最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间为48h。SMPD1蛋白在48h出现沉默效果,96h开始恢复。50nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡,细胞存活率为73.8%,与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义。【结论】三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果,其中siRNA1效果最佳,沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡。
- 高军周灿权张仁礼马芸
- 关键词：SIRNA成纤维细胞凋亡
- RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA(siRNA)类药物,以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPD1基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48 h用丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Q-RT-PCR)法及免疫印迹(Western blot)检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin Ⅴ -PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体(lipofectamine 2000)和无干扰siRNA(NT siRNA)作为对照。结果 siRNA1、 2 、 3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为(67. 0±9.0)%、0%、(45.0±2.1)%,以siRNA1最高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siRNA1组细胞凋亡率为15.2%,明显低于 MMC组(26. 3%)。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。
- 高军马芸张仁礼刘彩霞周灿权
- 关键词：RNA干扰小分子干扰RNA卵巢衰竭
