国家自然科学基金(30400477)
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
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- 相关机构：吉林大学第一医院北京中医药大学东直门医院更多>>
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- 免疫磁珠法分离纯化骨髓间充质干细胞及向成软骨细胞分化被引量：8
- 2006年
- 目的利用免疫磁珠法分离成人骨髓神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓间充质干细胞(bone m esenchymal stem cells,BMSCs),并进行向软骨细胞诱导。方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclearcells,MNCs),对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞。分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成神经细胞诱导。结果免疫磁珠分离获得NGFR阳性细胞的纯度为(90.6±5.1)%,NGFR阳性细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和向软骨分化潜能。结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR阳性细胞可以获得同质性原始BMSCs。
- 徐鹏赵子义高鹏秦大明
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经生长因子受体
- 重组人骨形态发生蛋白2局部注射促进兔胫骨延长区的骨愈合被引量：1
- 2007年
- 目的:骨形态发生蛋白与骨延长关系的报道很少。为观察其对于牵拉骨再生延长区骨愈合的作用,将重组人骨形态发生蛋白2经皮注射到兔胫骨延长区,行组织学验证。方法:实验于2004-06/2005-03在吉林大学基础医学院实验动物中心完成。①实验材料:雄性日本大耳白兔30只;重组人骨形态发生蛋白2(由美国哈佛医学院分子骨科中心Oliver博士馈赠)。②实验干预及分组:制作日本大耳白兔延长区骨再生不良动物模型24只,行快速延长,2次/d,1mm/次,2mm/d,共延长10d,共2cm。将兔子随机分为2组,每组12只。对照组,延长结束后延长区注射醋酸盐缓冲液;重组人骨形态发生蛋白2组,延长结束后延长区注射醋酸盐缓冲液溶解的重组人骨形态发生蛋白2。③实验评估:延长结束后2周、4周时2组各取4只兔,麻醉后处死,进行延长区拍摄X射线片及延长区骨标本组织学光镜检查。结果:术中兔死亡及针道处骨折6只,24只进入结果分析。①延长区X射线片评价:延长结束后2周和4周时,显示重组人骨形态发生蛋白2组新生骨痂明显多于对照组,延长结束后4周时重组人骨形态发生蛋白2组髓腔开始形成。②延长区组织学观察结果:延长结束后4周时,对照组延长区周新生软骨、骨增多,融合成片,出现编织骨。重组人骨形态发生蛋白2延长区软骨细胞吸收矿化,转化为编织骨,并逐渐向皮质骨改建塑形。结论:牵拉骨再生延长结束后,延长区经皮注射重组人骨形态发生蛋白2,经间接X射线及组织学直接验证,对延长区骨愈合有促进作用。
- 徐鹏王丹辉李长胜张新
- 关键词：骨延长术
- 免疫磁珠法分离纯化骨髓间充质干细胞及向神经细胞定向分化被引量：12
- 2007年
- 目的:利用免疫磁珠法分离成人骨髓神经生长因子受体阳性细胞,获得同质性骨髓间充质干细胞,并向神经细胞诱导分化。方法:实验于2005-01/08在吉林大学第一医院中心实验室完成。①骨髓来源于正常成人献髓者,由解放军三零七医院骨髓库提供。采用Percoll密度梯度离心法分离收集骨髓单个核细胞,分别进行常规贴壁分离及免疫磁珠分离。②常规贴壁分离法是将2×107骨髓单个核细胞接种于添加骨髓间充质干细胞培养液的25cm2培养瓶中孵育,48h后除去未贴壁细胞,更换新鲜培养液,待细胞生长至90%融合时消化传代。③免疫磁珠分离法是将骨髓单个核细胞先后与鼠抗人神经生长因子受体单克隆抗体、羊抗鼠IgG免疫磁珠4℃反应15min,然后将细胞放入分离系统的细胞分离柱内,经免疫磁珠标记的骨髓单个核细胞(神经生长因子受体阳性部分)由于磁场作用滞留于分离柱中。移走磁场后,冲洗分离柱即得到神经生长因子受体阳性细胞。④分别检测神经生长因子受体阳性细胞和常规贴壁培养所获骨髓间充质干细胞体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并将骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导分化。结果:①平均在每百个骨髓单个核细胞中有(2.6±1.2)个神经生长因子受体阳性细胞存在。经过免疫磁珠分离获得的神经生长因子受体阳性细胞数占骨髓单个核细胞总数的(0.57±0.31)%,纯度为(90.6±5.1)%。②神经生长因子受体阳性细胞培养4周后,神经生长因子受体、CD34、HLA-DR、CD133、CD105阳性率分别为(35.5±5.9)%,(2.3±1.7)%,(2.6±2.3)%,(1.4±1.1)%,(89.8±12.8)%。③经免疫磁珠分离获得的1×106个神经生长因子受体阳性细胞平均可以形成3100个集落,而接种同样数目的骨髓单个核细胞平均只能形成56个成纤维细胞集落。④神经生长因子受体阳性细胞可以在体外扩增10周,其扩增倍数较常�
- 徐鹏舒畅赵子义张伟
- 关键词：神经生长因子受体骨髓间充质干细胞
