国家自然科学基金(30200125)
- 作品数：7 被引量：48H指数：4
- 相关作者：林善锬顾勇马骥林沁孙晶更多>>
- 相关机构：复旦大学南京军区福州总医院更多>>
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- 过氧化物酶体增殖物活化受体γ减少高糖诱导系膜细胞外基质的积聚及其机制被引量：9
- 2004年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)外基质(ECM)积聚的抑制作用及其机制。方法以表达野生型小鼠PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/WT转染系膜细胞(WT),然后予30mmol/L的高糖(HG)刺激48h,以ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1、纤连蛋白(FN)的浓度。GMC中c-fos、c-jun、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)mRNA的表达检测采用半定量RT-PCR法,并以Western印迹检测胞浆中核因子抑制物(Ⅰ-κB)、核因子(NF-κB)及胞核中NF-κB、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)的蛋白表达水平。同时以2μmol/L的PPARγ激活剂吡咯列酮(Pio)、转染表达功能缺陷的突变型(dominantnegative,DN)PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/DN(DN)或空白质粒pIRES2-EGFP作为对照。PPARγ的活性以其与PPARγ反应元件(PPRE)的结合能力表示。结果HG培养时系膜细胞的PPARγ活性较正常糖浓度(5mmol/L)培养时明显上升(P<0.01),HG+WT组的PPARγ活性显著高于HG+DN、HG+pIRES2-EGFP和HG+Pio组。与HG+DN、HG+pIRES2-EGFP相比,WT转染所致的PPARγ1高表达能显著抑制高糖诱导GMC的TGFβ-1、FN生成增多,减轻c-fos和c-jun的mRNA表达的上调,改善p-ERK蛋白水平的增加、胞浆Ⅰ-κB表达的降低以及NF-κB由胞浆向胞核转移的增加(P均<0.
- 孙晶马骥顾勇林善锬
- 关键词：过氧化物酶体增殖物高糖激活蛋白
- 表达过氧化物酶增殖物激活受体γ1全长基因质粒的构建及其在转染的系膜细胞中功能的鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建过氧化物酶增殖物激活受体γ1(PPARγ1)全长表达基因质粒,观察PPARγ1过表达对系膜细胞细胞外基质(ECM)的作用。方法将野生型(WT)小鼠PPARγ1全长cDNA连接入真核细胞表达质粒pIRES2绿色荧光蛋白中,以脂质体介导的方法将该表达质粒pIRES2EGFPmPPARγ1/WT转染入系膜细胞,采用RTPCR、Western印迹、PPARγ与PPRE结合活性测定等方法鉴定PPARγ1在系膜细胞中的表达与活性,并且给予高糖(30mmol/L)刺激,观察PPARγ1过表达对TGFβ1、PAI1及纤连蛋白等ECM的作用。本研究中同时以一用相同方法构建的表达功能缺陷型(DN)PPARγ1的质粒pIRES2EGFPmPPARγ1/DN作为对照。结果限制性酶切及DNA测序结果均说明所构建的质粒为PPARγ1全长表达基因质粒。该质粒的表达在转染48h后达到高峰。PPARγ1过表达能显著减少高糖所致的系膜细胞的转化生长因子(TGF)β1、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)1的mRNA和培养细胞上清液中FN的高表达(P<0.05)。结论PPARγ1全长表达基因质粒的构建为进一步研究PPARγ1的效应和机制提供了有利的工具,此研究结果显示PPARγ1过表达可以抑制高糖引起的细胞外基质的积聚。
- 孙晶马骥郝传明顾勇林善锬
- 关键词：转染质粒系膜细胞过氧化物酶增殖物激活受体Γ全长CDNA真核细胞表达质粒
- 罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制被引量：23
- 2003年
- 目的 :探讨罗格列酮 (RSG)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制。方法 :将大鼠随机分成UUO组和UUO +RSG组 ,另设假手术组 (SHAM)为对照。用药组于术前 3d给予RSG 3 0mg·kg-1·d-1,ig ,直至术后 14d处死动物 ,对照组给予等量的灭菌去离子水同样处理。观察左侧肾脏病理学改变 ,比较肾间质基质含量和肾间质纤维化程度 ;以α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的免疫组化结果观察肾小管上皮细胞转型情况。结果 :与UUO组相比 ,RSG +UUO组左侧肾脏的病理改变及肾间质纤维化程度明显减轻 (P <0 0 5 ) ,肾小管上皮细胞α SMA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ;而SHAM组对左侧肾脏病理学无显著影响。结论 :RSG对UUO所致的大鼠肾间质纤维化具有保护作用 ,其机制可能部分是通过减少肾小管上皮细胞向肌纤维细胞的转型 。
- 林沁马骥顾勇杨海春朱蔚钰林善锬
- 关键词：罗格列酮单侧输尿管梗阻肾间质纤维化胰岛素增敏剂
- 罗格列酮对肾间质损伤的防护作用及其机制被引量：10
- 2005年
- 目的探讨罗格列酮对肾间质纤维化的保护作用及其机制。方法以大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)为模型,在不同的时间点(3d、7d、14d)观察梗阻侧肾间质基质含量;各组肾皮质间质巨噬细胞浸润情况;致纤维化的转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况;肾皮质多种与肾脏纤维化相关的结缔组织生长因子(CTGF)、骨形态发生蛋白7(BMP7)、Smad6信号蛋白等的mRNA表达及BMP7、PAI1的蛋白表达。结果罗格列酮能改善UUO所致的肾间质纤维化程度(P<0.05);显著减少间质巨噬细胞浸润数量;下调肾脏组织TGF-β1的表达(P<0.05);减少TGF-β1下游致纤维化因子CTGF及PAI1的表达;同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子BMP7和Smad6的表达(P<0.05)。结论罗格列酮能保护UUO所致的肾间质炎症和纤维化损伤。其可能的作用机制包括抑制肾间质炎症细胞浸润;减少TGF-β1表达、阻止TGF-β信号传导、抑制TGF-β1下游效应因子CTGF和PAI1的表达,增加抗纤维化抗炎作用的BMP-7蛋白表达等,从而从多层面阻断TGF-β1的致纤维化作用。
- 林沁顾勇马骥林善锬
- 关键词：罗格列酮肾间质损伤转化生长因子-Β1
- 过氧化物酶增殖物激活受体γ减少血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞外基质的积聚及其作用机制被引量：5
- 2006年
- 目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)γ1对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的系膜细胞外基质积聚的抑制作用及其机制。方法脂质体转染质粒pIRES2-EGFP-PPARγ1／ WT(野生型)于系膜细胞,给予AngⅡ(10-7 mol／L)刺激48 h。采用RT-PCR检测TGF-β1、PAI-1、 c-fos、c-jun mRNA表达水平。采用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和FN浓度。Western印迹观察胞浆中I-κB、NF-κB及胞核中NF-κB、pERK蛋白表达水平。利用PPARγ／与PPRE结合活性测定PPARγ1在系膜细胞中的活性。同时以PPARγ激动剂吡格列酮(6μmol／L)、不具有目的基因PPARγ1的空白质粒pIRES2-EGFP和表达功能缺陷-突变型(DN)PPARγ1的质粒pIRES2- EGFP-mPPARγ1／DN作为对照。结果 PPARγ1过表达能显著性抑制Ang Ⅱ诱导的系膜细胞 TGF-β1、PAI-1的mRNA高表达(P<0．05),同时下调c-fos和c-jun mRNA高表达(P<0．05)。转染PPARγ1／WT能显著降低AngⅡ 48 h刺激下细胞上清液中FN和TGF-β1浓度(P<0．05)。在AngⅡ作用下系膜细胞AT1表达增加(P<0．05),PPARγ1可显著性减少AT1的高表达(P< 0．05)。AngⅡ诱导的系膜细胞pERK表达明显升高,PPARγ1可显著性减少pERK表达(P<0．05)。转染PPARγ1／WT能上调AngⅡ刺激下系膜细胞胞浆中I-κB低表达,同时下调NF-κB由胞浆向细胞核的转移(P<0．05)。转染PPARγ1／DN并无上述作用。吡咯列酮具有与PPARγ1相同的显著性效应。PPARγ1／WT转染组PPARγ1的活性明显高于其他组(P<0．05)。结论 PPAR-γ1过表达能够抑制AngⅡ刺激下系膜细胞外基质的聚积,降低AT1受体蛋白表达,具有直接抗硬化的非代谢性效应,其机制可能是通过抑制ERK／AP-1及NF-κB等信号分子的传递。
- 孙晶马骥顾勇林善锬
- 关键词：噻唑烷二酮类转染系膜细胞
- 不同剂量吡咯列酮对单肾切除糖尿病大鼠作用的实验研究被引量：1
- 2003年
- 目的 观察不同剂量盐酸吡咯列酮对单肾切除糖尿病大鼠模型慢性肾脏损害的作用。方法 采用单肾切除的小剂量链脲佐菌素诱导性糖尿病大鼠 ,随机均分为单肾切除对照 (CTR)组、糖尿病非治疗 (DM )组、3mg·kg-1·d-1吡咯列酮 (DM LP)治疗组、9mg·kg-1·d-1吡咯列酮治疗组和 2 0mg·kg-1·d-1吡咯列酮治疗组共 5组。药物灌胃 10周 ,收集2 4h尿液标本 ,测定血糖和动脉收缩压后处死大鼠 ,并留取血标本和肾脏组织。结果 与CTR组相比 ,另 4组糖尿病大鼠的血清胰岛素水平均明显降低 ,DM组表现出明显的高糖和高脂血症 ,动脉收缩压、2 4h尿蛋白量、肾小球细胞外基质(ECM)沉积和相对肾重均明显升高。 3mg·kg-1·d-1吡咯列酮在不影响血糖、血脂和血压的情况下 ,能明显减轻蛋白尿和肾小球ECM沉积 ,降低相对肾重 ;9mg·kg-1·d-1吡咯列酮能明显改善血糖和高三酰甘油血症 ,但不影响动脉收缩压和高胆固醇血症 ,其减轻蛋白尿和肾小球ECM沉积以及降低相对肾重的作用与 3mg·kg-1·d-1剂量治疗组的差异无显著性 ;2 0mg·kg-1·d-1吡咯列酮除有与 9mg·kg-1·d-1剂量相似程度改善高血糖和高三酰甘油血症的作用外 ,还能明显降低大鼠动脉收缩压 ;其减轻蛋白尿、肾小球ECM沉积和肾脏肥大的作用较 3和
- 孙正达马骥顾勇林善锬
- 关键词：吡咯列酮单肾切除糖尿病并发症
- 罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的抗氧化保护作用被引量：1
- 2006年
- 目的:观察新型胰岛素增敏剂罗格列酮对单侧输尿管梗阻(UUO)的肾间质损伤的抗氧化保护作用。方法:将雄性SD大鼠随机分成三大组:假手术对照组(Sham组,n=6)、UUO模型组(结扎左侧输尿管制作UUO模型,n=18)、UUO罗格列酮干预组(UUO+RSG组,n=18)。除Sham组外,其余2组根据不同的观察时间细分为3、71、4 d亚组(,n=6)。分别测定大鼠左肾皮质匀浆中脂质过氧化物标志物MDA以及抗氧化酶CAT、SOD含量。结果:与Sham组相比,UUO模型组大鼠梗阻侧肾皮质在3、7、14 d时MDA含量分别升高了8.9(P=0.000)、3.5(P=0.000)和0.7倍,而CAT含量分别下降了66.0%、72.6%和83.8%(P=0.000),SOD分别下降了42.0%、50.2%和67.7%(P<0.005)。与UUO模型组相比,UUO+RSG组大鼠梗阻侧皮质MDA含量在3、7 d时分别减少了80.0%和65.3%(P=0.000),14 d时差异不显著;在3、71、4 d时CAT分别增加了96.2%、92.1%和102.9%(P<0.005),SOD分别增加了33.3%、35.1%和55.4%(P<0.005)。结论:RSG能减少单侧输尿管梗阻侧肾皮质脂质过氧化物的产生,同时增加抗氧化酶的含量,从而改善单侧输尿管梗阻大鼠氧化应激。
- 林沁顾勇林善锬
- 关键词：罗格列酮输尿管梗阻过氧化氢酶抗氧化保护作用
