国家自然科学基金(30400380)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：第四军医大学西京医院南方医科大学第四军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HBV-TRL重组腺病毒载体的抗病毒活性
- 2005年
- 目的:观察有linker插入的乙肝病毒靶向核糖核酸酶(HBVTRL)重组腺病毒载体(RAd)对HBV复制的抑制作用.方法:以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pcDNA3.1(-)/TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN为基础,分别将目的片段TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒共转染HEK293细胞,重组产生含各目的片段的复制缺陷型腺病毒,即RAd/TRL,TR,HBVc和hEDN,经鉴定、扩增及滴度测定.其中RAd/TRL,TR为实验组,其余重组腺病毒为对照组.将获得的重组腺病毒感染HepG2.2.15细胞后通过间接免疫荧光检测重组腺病毒在细胞中的表达,并应用荧光定量PCR法检测细胞上清中HBVDNA含量.同时,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性.结果:成功获得了含TRL,TR,HBVc和hEDN等不同目的片段的复制缺陷型腺病毒载体.RAd/TRL在HepG2.2.15细胞中得到有效表达,并且明显降低了细胞上清HBVDNA含量,与RAd/TR相比(P=0.0266,P<0.05),与其他对照组相比(P<0.01).MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响(P>0.05).结论:成功地构建了RAd/TRL,其有效表达成功地抑制了HBV的复制.
- 宫卫东易军赵亚刘军丁劲薛采芳
- 关键词：乙肝病毒LINKER核糖核酸酶类
- VP22融合型显性负性突变体抑制乙肝病毒复制被引量：1
- 2006年
- 目的了解VP22融合型显性负性(DN)突变体对抑制乙肝病毒(HBV)复制的作用.方法将VP22全长及其不同区段融合于HBV核心蛋白(HBc)的C端,克隆入pcD-NA3.1(-)构成DN突变体真核表达质粒.转染HepG2.2.15细胞后,免疫荧光鉴定DN突变体在细胞内的表达,并以培养上清HBV表面抗原(HBsAg)的浓度为指标,观察DN突变体对HBV病毒复制的抑制效应.同时以MTT比色法观察转基因的表达对宿主细胞生长状态的影响.结果VP22及其不同区段构建的DN突变体可在HepG2.2.15细胞中进行表达,且对宿主细胞无毒性.VP22融合型DN突变体可有效地抑制HBV的复制,具有蛋白转导特性的DN突变体比无转导特性的DN突变体具有更强的抗病毒能力.其中VP22全长构成的DN突变体具有最强的抑制效应,可使上清HBsAg浓度下降81.94%.结论VP22融合型DN突变体可以增强DN突变体对HBV复制的抑制.
- 易军宫卫东王岭凌瑞陈江浩王辉王廷
- 腺病毒介导的靶向核糖核酸酶抑制HBV复制的研究
- 2006年
- 目的观察Linker介导的乙型肝炎靶向核糖核酸酶(HBV-TRL)重组腺病毒载体(RAd)对HBV复制的抑制作用。方法使用构建载体pcDNA3.1(-)/TRL、TR、TRmut、乙型肝炎病毒核心蛋白(HBVc)、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN),分别将各目的片段亚克隆入穿梭质粒pDC316,与辅助质粒用磷酸钙法共转染HEK293细胞,分别产生载体RAd/TRL、RAd/TR、RAd/TRmut、RAd/HBVc、RAd/hEDN,其中RAd/TRL组为实验组,其余为对照组。感染HepG2.2.15细胞,应用RT-PCR、间接免疫荧光法检测TRL的表达,放免法测定细胞上清中HBsAg、HBeAg的含量。结果成功获得了含TRL、TR、HBVc、hEDN等不同目的片段的RAd,在HepG2.2.15细胞中得到有效表达,并且明显降低了细胞上清中HBsAg、HBeAg的含量。结论腺病毒载体介导的乙肝靶向核糖核酸酶具有明显的抑制HBV复制的作用。
- 宫卫东李鹏赵亚刘军薛采芳
- 关键词：乙型肝炎病毒腺病毒载体
