国家自然科学基金(81200307H0317)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张艳琼王晓丹柳长柏吴江锋李红军更多>>
- 相关机构：三峡大学湖北工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅青年科技人才基金湖北省自然科学基金更多>>
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- MicroRNA-29与肝纤维化被引量：1
- 2014年
- 微小RNA(microRNA,miRNAs,miR)是一类在转录后水平进行基因调控的非编码小RNA分子。miRNAs分子参与细胞生长、增殖、信号通路调控以及细胞凋亡等多个环节,与多种癌症发生发展有关。目前许多研究表明miR-29可调控多种靶基因的表达,参与多种纤维化疾病的发生、发展过程,miR-29有望成为肝纤维化基因治疗的新靶点,为阐述肝纤维化的发病机制和临床诊治提供了新思路。本文就miR-29与肝纤维化关系的研究进展做一综述。
- 王晓丹石慧肖和杰张艳琼
- 关键词：微小RNA肝纤维化细胞外基质
- 活化型肝星状细胞中miRNA-193下调α-平滑肌肌动蛋白的表达被引量：2
- 2016年
- 目的：研究活化型肝星状细胞（HSC）中miRNA-193（miR-193）下调肝纤维化相关基因的表达。方法：将大鼠miR-193的前体序列（pre-miR-193）克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，经酶切和DNA测序鉴定，获得质粒pcDNA3．1-miR-193；通过脂质体转染法将质粒转染到大鼠的活化型肝星状细胞（HSC-T6）中，采用荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测肝纤维相关基因的表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3．1-miR-193经酶切鉴定及DNA测序显示，目的片段的大小与预期结果一致；荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测显示，重组质粒转染到活化型HSC-T6中后，肝纤维化相关基因的α-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达呈明显下降趋势，而胶原蛋白IαI和Iα2的下调作用不明显。结论：miR-193能抑制活化型肝星状细胞中肝纤维化相关基因α-SMA的表达。
- 王洁曾宪一王晓丹王慧柳长柏吴江锋张艳琼
- 关键词：Α-平滑肌肌动蛋白I型胶原蛋白
- 肿瘤细胞培养中的问题及采取措施被引量：4
- 2013年
- 本文通过对各种不同肿瘤细胞培养(包括细胞的复苏、传代、冻存等)过程中,易出现的坏死、污染、不长等问题及采取的措施进行了探讨。总结出一条较为适合肿瘤细胞培养的方法。以提高科研水平。
- 李红军张艳琼
- 关键词：肿瘤细胞培养污染
- gremlin1基因的诱变及其真核表达载体的构建
- 2013年
- 目的：分别构建全长、无信号肽、无核定位系统和既无信号肽也无核定位系统的大鼠gremlin1基因的真核表达载体.方法：采用PCR技术获得全长大鼠gremlin1基因（gremlin1）和无信号肽的gremlin1基因（gremlin1-DS）,以全长gremlin1为模板运用重叠延伸PCR获得无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DN）,继而在gremlin1-DN的基础上去掉信号肽获得既无信号肽也无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DS-DN）.分别将4组重组质粒转染到非洲绿猴肾细胞株cos7中,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测gremlin1基因的表达.结果：构建的真核表达载体pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN和pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN经PCR与酶切鉴定显示目的片段大小与预期结果一致；经DNA测序显示pEF1/Myc-His C-gremlin1中的gremlin1片段与Gene Bank中的gremlin1序列（NM-019282）完全吻合；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS中的gremlin1基因缺失信号肽序列；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN中的gremlin1片段实现了4个定点突变：433-435位的AAG（赖氨酸）、487-489位的CCA（脯氨酸）、490-492位的CCC（脯氨酸）、496-498位的AAG（赖氨酸）均突变为TTC（苯丙氨酸）；pEF1/Myc-His Cgremlin1-DS-DN中的gremlin1基因既缺失信号肽序列又实现了4个定点突变.将它们分别转染到cos7细胞后,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测显示,4者均能在细胞内成功表达.结论：成功构建了pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-HisC-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN的真核表达载体.
- 万林燕张巧娟彭虎夏鑫柳长柏吴江锋张艳琼
- 关键词：诱变真核表达
