全球变化研究国家重大科学研究计划(2006CB910803) 作品数:6 被引量:20 H指数:3 相关作者: 王清明 范国才 吴峰 姚西宁 刘保才 更多>> 相关机构: 军事医学科学院 更多>> 发文基金: 全球变化研究国家重大科学研究计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:7 2011年 目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆。通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质。结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HC-CR-1和HCCR-2蛋白;免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中;免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有。结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础。 刘保才 霍景瑞 刘英富 范国才 王清明关键词:肝癌 HCCR 单克隆抗体 高尔基体蛋白73与肝癌诊断 被引量:8 2010年 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)检查是目前肝癌诊断最常采用的手段,但血清AFP对肝癌诊断的灵敏度和特异性均不理想,因此,临床上迫切需要更理想的肝癌标志物。高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是一种II型高尔基体跨膜糖蛋白,与肝炎、肝硬化和肝癌等肝病的发生、发展密切相关,GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性为65%和90%,而核心岩藻糖化GP73对肝癌诊断的灵敏度和特异性则高达90%和100%。GP73有可能成为一种更理想的肝癌临床诊断标志物,而核心岩藻糖化的GP73在肝癌的早期诊断中可能具有更重要的意义。 姚西宁 王清明关键词:GP73 肝癌 肝癌标志物 基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法 被引量:3 2009年 为建立一种基于抗原表位的抗蛋白质抗体制备新方法。以T7噬菌体作为展示载体,在其表面展示蛋白质的抗原表位肽,提取重组噬菌体作为免疫原免疫动物,通过ELISA、Western blot和细胞免疫荧光技术检测抗体的滴度及特异性。结果表明,以展示蛋白质抗原表位的T7噬菌体免疫动物,得到的抗体能特异识别相应的表位肽,其中针对Pif1-α抗原表位的抗体,还能特异识别Pif1-α蛋白。结论是,表面展示小肽的T7噬菌体具有很好的免疫原性,如果展示的小肽确为蛋白质抗原表位,则可作为完整蛋白质抗原的替代抗原免疫动物来制备识别完整蛋白的抗体。 周游 吴峰 范国才 吴祖泽 王清明关键词:表位肽 噬菌体展示 抗体 抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2 2010年 目的:制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体(mAb),以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法:用重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术进行细胞融合,经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆,获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性;通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果:得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定,该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明,该抗体检测HPPCn的极限为0.1μg/L;Western blot结果显示,该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验,证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为,该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13(IHLELRN)。结论:成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。 霍景瑞 姚西宁 刘英富 刘保才 吴峰 范国才 王清明关键词:单克隆抗体 效价 噬菌体肽库 基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体 2010年 目的:制备抗GP73蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:将GW/3蛋白N末端的肽段(AAAERGAVELK)展示于T7噬菌体表面,扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠,制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价,筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株;通过ELISA、Western blot等方法检测mAb的特异性。结果:利用表面展示GP73抗原表位的重组噬菌体为抗原免疫小鼠,通过细胞融合和筛选得到了能识别GP73蛋白的mAb,且特异性较好。结论:将蛋白质抗原的合适抗原表位展示在T7噬菌体表面,用这种重组噬菌体作为替代抗原可以制备识别全蛋白的mAb。 姚西宁 霍景瑞 刘英富 刘保才 吴峰 范国才 王清明关键词:噬菌体展示 GP73 抗原表位 基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素的抗体 被引量:2 2009年 目的:基于B细胞表位制备抗肝细胞生成素(HPO)的抗体。方法:根据HPO的空间结构选择了2个候选B细胞表位,展示在T7噬菌体的表面,将提取的重组噬菌体免疫动物,采用ELISA法检测抗血清的效价,通过杂交瘤技术制备针对HPOC端表位的单克隆抗体。结果:2个候选B细胞表位KDGSCD和DGWKDGSC均能诱导抗相应表位多肽的多克隆抗体的产生,免疫6周后血清中抗体效价均达到1∶103,产生的抗体还能够特异识别HPO全蛋白;针对HPOC端表位KDGSCD的单克隆抗体也能识别HPO全蛋白,且具有良好的特异性。结论:基于T7噬菌体展示的B细胞表位可作为免疫原用于制备识别该B细胞表位来源的全蛋白质的抗体。 周游 吴峰 范国才 王清明关键词:肝细胞生成素 B细胞表位 噬菌体展示 抗体