福建省自然科学基金(2012J05158)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王志红张林兰风华林宇翔富显果更多>>
- 相关机构：福建医科大学福总临床医学院三峡大学人民医院宜昌市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肾上腺脑白质营养不良家系ABCD1基因突变研究被引量：3
- 2014年
- 目的分析肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy,ALD)家系的先证者及ALD携带者所孕育胎儿的ABCD1基因突变。方法首先从RNA途径,应用RT-PCR技术,对2010年10月至2012年3月福建医科大学福总临床医学院5个家系先证者或其母亲的ABCD1基因编码区进行序列测定查找突变,再通过基因组DNA途径进行突变验证。产前诊断采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,应用DNA测序或PCR-限制性酶切方法对5个胎儿的羊水基因组DNA进行突变分析。结果在5个家系的先证者或先证者母亲分别发现5个不同位点的ABCD1基因突变,依次为c.796G>A,c.521A>G,c.1523C>T,c.1534G>A,c.1252C>T。产前诊断结果显示:5个胎儿均为男性,胎儿1、2、3、4存在与先证者相同的突变,胎儿5未检测到与先证者5相同的突变。结论 ABCD1基因突变分析是ALD分子诊断及产前分子诊断准确、可靠的方法。
- 张林林宇翔兰风华王志红
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良分子诊断产前分子诊断ABCD1基因
- X-连锁肾上腺-脑白质营养不良女性杂合子的分子生物学研究进展被引量：1
- 2013年
- X一连锁肾上腺一脑白质营养不良（X—linked adrenoleukodystrophy，X—ALD）是最常见的过氧化物酶体病，其生化特点是极长链饱和脂肪酸（verylong chain fatty acids，VLCFAs），特别是二十六烷酸（C26：0）及二十四烷酸（C24：0）在不同组织和体液中的积累。
- 张林兰风华王志红
- 关键词：突变脑疾病肾上腺脑白质营养不良杂合子
- 肾上腺脑白质营养不良蛋白慢病毒载体的构建和表达
- 2014年
- 目的构建并表达野生型及突变型肾上腺脑白质营养不良蛋白(adrenoleukodystrophy protein,ALDP)的慢病毒载体,探讨ABCD1基因突变对ALDP结构和功能的影响。方法选择ABCD1基因的H283R和P534R两个突变,首先采用生物信息学方法,进行突变致病性及突变体结构稳定性预测;再利用分子克隆技术,将ABCD1基因克隆到pLEX-MCS慢病毒载体,构建野生型慢病毒载体:pLEX-ABCD1,定点诱变构建2个突变型重组载体:pLEX-ABCD1-H283R和pLEXABCD1-P534R,并与其他包装载体共转染293T细胞包装病毒。收集病毒并感染宿主细胞,RT-PCR检测慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA表达,免疫荧光及蛋白质免疫印迹法分析野生型与突变型ALDP亚细胞定位及表达。结果生物信息学预测显示H283R和P534R为ALD致病性突变;RT-PCR结果显示慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA均过表达;免疫荧光及蛋白质免疫印迹结果表明,H283R和P534R突变可能导致ALDP突变体表达量下降,但未观察到ALDP定位改变。结论成功构建ABCD1基因慢病毒表达载体,并评估了H283R和P534R突变对ALDP表达及亚细胞定位的影响,为深入研究ALD发病机制提供了实验依据。
- 张林富显果林宇翔兰风华王志红
- 关键词：ABCD1基因计算生物学慢病毒属
