国家自然科学基金(31070943)
- 作品数：4 被引量：30H指数：2
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- 相关机构：西安交通大学西安交通大学医学院第二附属医院西安医学院更多>>
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- 细胞因子信号转导抑制因子3激酶抑制区对STAT3磷酸化的抑制作用被引量：4
- 2014年
- 目的：探讨细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）的激酶抑制区（KIR）对细胞内STAT3蛋白磷酸化的影响.方法：化学合成穿膜肽TAT与KIR的融合肽（TAT-KIR）,以异硫氰酸荧光素（FITC）进行氨基端标记;不同浓度融合肽加入培养的PC12细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测TAT-KIR的穿膜效果;以白细胞介素-6（IL-6）处理PC12细胞模拟炎症反应,MTT检测细胞活力/增殖情况,免疫印迹检测细胞内磷酸化STAT3 （P-STAT3）蛋白水平;对比阴性对照组（正常培养的细胞）、IL-6刺激组、TAT-KIR处理组及TAT-KIR＋IL-6处理组细胞的P-STAT3水平,分析SOCS3的KIR对STAT3磷酸化的影响.结果：加入不同浓度TAT-KIR后10 min,显微镜下可见细胞内有绿色荧光出现,并随浓度升高胞内绿色荧光强度增强,其中3 μmol/I融合肽30 min时其跨膜转运效率最高,可达99.94％;100 ng/ml IL-6可显著增加PC12细胞活力,并促进胞内STAT3磷酸化水平显著增高;与此相比,TAT-KIR＋IL-6组细胞内P-STAT3水平显著下降,但是TAT-KIR处理组P-STAT3水平与阴性对照组比较差异无统计学意义.结论：KIR可被TAT成功转入细胞内部,并有效抑制IL-6刺激引起的PC12细胞STAT3磷酸化水平的增高,对正常情况细胞STAT3磷酸化的影响不大.
- 王丽马辉焦倩王媛媛张智超杨蓬勃陈新林李昭荣吕海侠刘勇
- 关键词：细胞因子信号转导抑制因子3PC12细胞白细胞介素-6
- 新生大鼠器官型脑组织片培养和诱导神经干细胞分化的观察
- 2011年
- 目的建立在改良条件下新生大鼠器官型脑组织片培养方法,初步探索空间信号对神经干细胞增殖分化的诱导作用。方法选取新生SD大鼠,以振荡切片机切取200μm脑组织片,以改良的Stoppini方法进行培养,培养不同时间在倒置相差显微镜下对脑组织片进行观察;采用本实验室改良后神经干细胞培养方法分离培养SD大鼠胚胎第14～15天大脑皮质神经干细胞,以CM-DiI对培养第3代细胞进行标记,并移植于体外培养2周后的脑组织片;对移植后CM-DiI阳性标记细胞的存活和分化情况进行观察。结果器官型脑组织片在体外培养体系中存活良好,脑片周围细胞向外迁移;培养2周后,组织片厚度由原来的200μm减小至130μm,原有的细胞构筑发生变化;接受细胞移植后的脑片上可见大量DiI标记细胞,继续培养7 d后,部分标记细胞分化为GFAP阳性星形胶质细胞和β-tubulin III阳性神经元。结论新生大鼠器官型脑组织片体外培养成功,可以作为研究空间信号诱导神经干细胞增殖分化的模型。
- 焦倩章海霞吕海侠刘勇
- 关键词：神经干细胞分化
- 红景天苷通过抑制凋亡相关蛋白的表达保护缺氧对培养神经干细胞的损伤被引量：24
- 2013年
- 目的观察红景天苷对缺氧损伤成年大鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)组织分离培养神经干细胞凋亡比例和Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响。方法原代培养成年大鼠SVZ神经干细胞,不同浓度红景天苷预处理24 h后,干细胞厌氧工作站缺氧损伤48 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力;显微镜下观察各组细胞形态;TUNEL染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2和caspase-3蛋白的表达变化。结果红景天苷预处理可显著改善缺氧损伤后的细胞生长状态和活力,降低缺氧引起的细胞凋亡率的升高(P<0.05);拮抗缺氧损伤导致的细胞Bcl-2/Bax蛋白比例的下降,降低活化的caspase-3蛋白的表达(P<0.05)。结论红景天苷通过抑制神经干细胞的凋亡,保护缺氧对神经干细胞的损伤,其机制可能与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspases-3的表达有关。
- 祁存芳张军峰陈新林张建水杨蓬勃焦倩张蓬勃吕海侠刘勇
- 关键词：红景天苷缺氧神经干细胞BAXCASPASE-3
- 3-羟基丁酸对体外培养大鼠皮质神经干细胞增殖分化的影响被引量：2
- 2012年
- 目的研究体外条件下3-羟基丁酸(3-HB)对神经干细胞(NSCs)增殖及分化的影响。方法分离培养孕14.5d大鼠胚胎大脑皮质NSCs,分别以不同质量浓度3-HB(0.1、0.05、0.02、0.01g/L)处理培养至第3代的NSCs,以未加药组作为对照。CCK-8试剂盒检测细胞增殖、活力,免疫细胞化学染色观察NSCs的分化情况。结果与对照组相比,3-HB对NSCs的增殖、活力没有显著影响,但3-HB处理组NSCs分化为β-tubulinⅢ阳性细胞(神经元)的比例增加,而分化为GFAP阳性细胞(胶质细胞)的比例没有显著变化。结论 3-HB不影响NSCs的增殖,但可促进其向神经元方向分化。
- 卢晓云杨志倩吕海侠焦倩王媛媛冯敏娟张雅利刘勇
- 关键词：3-羟基丁酸神经干细胞原代培养细胞分化
