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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆、原核表达及生物活性鉴定被引量：2: 2010年; 为了探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在免疫中的作用,根据GenBank上发表的鸡GM-CSF基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法对球虫免疫后的海蓝灰蛋鸡盲肠扁桃体中GM-CSF基因进行克隆和序列分析;设计GM-CSF原核表达引物,原核表达GM-CSF融合蛋白,通过菌体裂解,包涵体的洗涤、溶解、复性后,过Sepharose4B柱纯化融合蛋白,采用抗病毒试验和淋巴细胞增殖试验检测表达蛋白的生物活性。结果显示,从人工感染柔嫩艾美耳球虫的海蓝灰蛋鸡盲肠扁桃体中扩增到了435bp的DNA片段;序列分析表明其与GenBank中报道的鸡GM-CSF序列仅有1个碱基的差异,与哺乳动物的同源性在35.2%～45.4%;原核表达了海蓝灰蛋鸡GM-CSF,分离纯化的融合蛋白在抗病毒活性试验和淋巴细胞增殖试验中证明具有一定的生物学活性。; 王黎霞徐赓王彩霞安健; 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子原核表达生物活性

细胞凋亡对柔嫩艾美耳球虫入侵的影响被引量：4: 2009年; 为了研究球虫与宿主细胞间相互关系,利用含有6%乙醇的DMEM完全培养基培养对MDBK细胞进行凋亡诱导,通过膜联蛋白V(Annexin V)/PI染色法、HE染色法和吖啶橙染色法来鉴定MDBK细胞的凋亡情况。蔗糖密度梯度离心法获得的柔嫩艾美耳球虫子孢子与诱导凋亡的细胞共培养1 h后,利用HE和吖啶橙染色法来研究子孢子入侵细胞的状况。结果显示,在诱导凋亡的细胞中,没有发现柔嫩艾美耳球虫的子孢子,对照组未诱导凋亡的细胞中有子孢子入侵。表明球虫无法入侵诱导凋亡的细胞,进一步揭示了球虫在入侵过程中可能存在的识别机制和入侵机制,为将来开发新疫苗和新药物提供了基础数据。; 韦铮黄芳王黎霞安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子细胞凋亡乙醇

柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体GM-CSF基因表达的动态变化被引量：1: 2008年; 为检测和评价鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了ChGM-CSF编码基因的开放阅读框(ORF),其长为435 bp。将试验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12、22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每次取5只鸡采集盲肠扁桃体,以鸡β-actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChGM-CSF的表达动态。结果表明,在第1次免疫后的第1天(13日龄,P<0.05)和第2次免疫后的第7天(29日龄,P<0.01),试验组ChGM-CSF的表达量显著高于对照组;在第1次免疫后的第9天(21日龄)和第2次免疫后的第3天(25日龄)ChGM-CSF的表达量显著低于对照组(P<0.01)。本研究提示ChGM-CSF参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChGM-CSF的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础。; 徐赓王彩霞王黎霞安健李卫东; 关键词：盲肠扁桃体

柔嫩艾美球虫免疫与鸡盲肠扁桃体TNF-α基因表达动态的关系被引量：4: 2008年; 根据GenBank上鸡β-actin、TNF-α的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术克隆获得了β-actin和TNF-α基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测TNF-αmRNA在鸡柔嫩艾美球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨TNF-α基因的表达动态与柔嫩艾美球虫免疫的关系。结果显示,TNF-α基因在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第9 d达到一个高峰,二免后第7d达到另一个高峰。结果表明,TNF-α在抗球虫感染中有一定的作用。; 王彩霞徐赓王黎霞安健; 关键词：Β-ACTIN基因柔嫩艾美球虫盲肠扁桃体 RT-PCR TNF-Α基因

柔嫩艾美耳球虫免疫期间鸡盲肠扁桃体γ干扰素表达动态的检测被引量：4: 2008年; 根据GenBank鸡β-actin、IFN-γ的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术克隆获得β-actin和IFN-γ基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测IFN-γ mRNA在鸡柔嫩艾美耳球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨IFN-γ的表达动态与柔嫩艾美耳球虫免疫的关系。结果显示,IFN-γ在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第7天达到一个高峰,二免后第7天达到另一个高峰。; 王彩霞徐赓王黎霞张鹏安健; 关键词：盲肠扁桃体 Β-肌动蛋白 Γ干扰素逆转录-聚合酶链反应

堆型艾美耳球虫子孢子纯化被引量：3: 2009年; 笔者通过比较不同成分脱囊液的子孢子脱囊效果和不同蔗糖密度梯度分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的纯化效果来探索较佳的分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的条件。通过试验证明10%鸡胆汁+0.75%(W/V)胰酶脱囊效果最好。75%(W/V)和20%(W/V)蔗糖密度梯度离心得到的子孢子回收率最高,且纯度最好,染色证明纯化后的堆型艾美耳球虫子孢子仍具有较高的活性。; 黄芳韦铮王黎霞安健; 关键词：堆型艾美耳球虫梯度离心

柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体IL-2基因表达的动态变化被引量：2: 2008年; 为检测和评价鸡白细胞介素-2(ChIL-2)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了长度为391 bp的ChIL-2。将实验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12日龄和22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每组取5只鸡的盲肠扁桃体,以鸡β-Actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChIL-2的表达动态变化。结果表明,试验组在第一次免疫后的第九天和第二次免疫后的第七天ChIL-2的表达量明显升高,提示ChIL-2参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChIL-2的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础。; 徐赓王彩霞王黎霞安健张鹏李卫东; 关键词：盲肠扁桃体 IL-2 半定量RT-PCR

鸡白细胞介素-2原核表达与生物学活性初探被引量：1: 2009年; 根据pGEX-6p-1表达载体多克隆位点,设计带有限制性内切酶酶切位点的IL-2引物,RT-PCR克隆获得目的基因,连接pGEM-T载体,转化JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选、测序和双酶切鉴定,与pGEX-6p-1表达载体连接,转化BL21感受态细胞,经双酶切和PCR鉴定,用IPTG诱导表达,通过菌体裂解、包涵体洗涤、溶解、复性、Sepharose 4B柱层析,SDS-PAGE和Western blot检测,证明表达并纯化了IL-2融合蛋白,而且纯化的IL-2融合蛋白具有促进淋巴细胞增殖的特性。; 王黎霞王彩霞徐赓安健; 关键词：白细胞介素-2 原核表达生物活性

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