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上海市卫生局科研基金(2007041)
作品数:
2
被引量:6
H指数:2
相关作者:
程飚
张诚
陈峥嵘
出晓军
李伯休
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相关机构:
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电穿孔法转染人端粒酶逆转录酶至许旺细胞的研究
被引量:3
2010年
目的利用电穿孔技术,将人端粒酶催化亚基(hTERT)转染至sD大鼠许旺细胞,观察及检测外源性bTERT在许旺细胞内表达及对许旺细胞寿命及增殖能力的影响。方法从食管癌组织中提取hTERT RNA,构建pcDNA3.1-hTERT质粒,利用电穿孔技术,转染许旺细胞,PCR检测hTERT RNA,TRAP—PCR银染法端粒酶活性检测试剂盒检测端粒酶活性,PI-annexin V染色,流式细胞仪测第15代转染及未转染ADSCs细胞凋亡,并且绘制15代转染及未转染细胞传代次数及传代时间曲线。结果成功构建pcDNA3.1-hTERT质粒,转染后,许旺细胞内hTERT RNA表达,并且TRAP端粒酶活性检测结果为阳性,许旺细胞标志物S100阳性,转染后细胞传代能力较未转染细胞显著增强。结论成功构建hTERT-许旺细胞,为构建许旺细胞永生化细胞系打下基础。
张诚
程飚
出晓军
王会仁
陈峥嵘
关键词:
端粒酶
许旺细胞
电穿孔
许旺细胞诱导下脂肪来源干细胞向神经细胞方向分化的研究
被引量:4
2009年
目的探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)和SD大鼠许旺细胞(Schwann cells)利用Transwell非接触式共培养时生长增殖特性和向神经元样细胞分化的规律。方法取1月龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织。按酶原消化法获取脂肪来源干细胞,同时取大鼠坐骨神经按改良植块法获取许旺细胞。取P3代脂肪来源干细胞分三组:A组使用ADSCs和许旺细胞构建Transwell非接触式共培养体系,B组利用β-巯基乙醇(BME)、丁酸酯羟基茴香醚(BHA)作为脂肪来源干细胞诱导因子使其向神经方向诱导,C组脂肪干细胞为对照组。比较各组细胞形态,观察脂肪来源干细胞代谢、轴突生长、免疫荧光染色情况,并做统计学分析。结果A组脂肪来源干细胞部分分化为具有细长突起的细胞,B组诱导培养后,大多数存活的细胞也同样转变为类似于神经元的形态,A组突起长度(11.64±1.64)μm,B组突起长度(13.03±1.35)±m,差异有统计学意义(P〉0.05),细胞生长代谢旺盛。A组B组诱导分化后的细胞NF表达阳性率分别为(54.16±9.35)%和(62.25±8.95)%,两者差异无统计学意义,而GFAP染色阴性。在细胞数量上,A组为(4.08±0.68)×10^7/L,C组(4.20±0.79)×10^7/L,差异无统计学意义(P〉0.05),但明显高于B组(3.23±0.37)×10^7/L(P〈0.05)。结论许旺细胞能促进脂肪来源干细胞向神经方向分化,效果与使用β—BME加BHA试剂诱导的结果相近,并能有效防止脂肪来源干细胞损伤。
李伯休
程飚
张诚
出晓军
陈峥嵘
关键词:
许旺细胞
脂肪干细胞
神经分化
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