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人膜联蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定: 目的:构建人膜联蛋白Ⅴ的原核载体并诱导其表达。方法:以IPTG诱导His融合人膜联蛋白Ⅴ的表达,并应用Ni-NTASuperflow纯化。结果:PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白Ⅴ...; 兰晓莉张永学; 关键词：原核表达分子克隆; 文献传递

两种^(99)Tc^m标记双功能螯合剂:NHS-MAG3和HYNIC被引量：5: 2005年; 99Tcm在标记蛋白、核酸、多肽和抗体时,常采用双功能螯合剂作为偶联剂的间接标记法,以避免直接标记所带来的损伤。研究表明,近年来常用的两种螯合剂NHS-MAG3及HYNIC合成路线清晰,偶联及标记方法成熟,标记率、放化纯及比活度较高,为核素分子显像提供了必要的基础条件和广阔的临床应用前景。; 兰晓莉; 关键词：锝同位素标记

人膜联蛋白Ⅴ的表达及核素标记被引量：3: 2005年; 目的构建人膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)表达载体并诱导其表达,应用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)偶联后应用核素99mTc标记。方法PCR扩增含AnnexinⅤ编码基因序列,将扩增产物克隆至His融合表达载体pET-28a(+),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导His融合AnnexinⅤ的表达,应用Ni-NTA Super-flow纯化并经测序、SDS-PAGE及Western blot确证。表达的蛋白通过HYNIC偶联后进行99mTc标记,考察标记物的特性。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的AnnexinⅤ基因编码序列一致。在IPTG诱导下,经Western blot及SDS-PAGE证实,重组大肠埃希菌DH5α高效表达分子量约36 kD的目的产物9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ标记率及放化纯均达到90%以上,稳定性在6 h以上,可以满足核素显像的要求。结论人AnnexinⅤ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a(+)上,并在大肠埃希菌DH5α中高效、大量表达。经HYNIC偶联后99mTc标记,可以得到较高的标记率和放化纯9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ有望成为一种有良好临床应用前景的凋亡显像剂。; 兰晓莉张永学安锐高再荣何勇曹国祥; 关键词：原核表达同位素标记

核素凋亡显像评价小鼠肝细胞凋亡被引量：1: 2009年; 目的将凋亡显像剂99mTc-HYNIC-Annexin V用于肝细胞凋亡小鼠动物模型显像,以评价其用于显示凋亡的可行性。方法通过双功能螯合剂HYNIC偶联Annexin V后99mTc标记,鉴定99mTc-HYNIC-Annexin V标记率、放化纯和稳定性。取正常昆明小鼠随机分为正常对照组及应用anti-Fas抗体处理后肝细胞凋亡组,注射显像剂后不同时间行SPECT显像,考察显像剂在小鼠体内分布及排泄情况,应用感兴趣区(region of interest,ROI)技术比较正常组及凋亡组显像图像中肝脏/前臂比值。取两组动物肝脏组织HE染色进行病理学分析,Hoechst33258染色检测凋亡。结果99mTc-HYNIC-Annexin V标记率可达(96.32±2.08)%,放化纯度达到(96.90±2.27)%,标记物体外稳定。正常小鼠体内显像剂从肾脏排泄,肝脏仅有少量分布。凋亡组肝脏有明显显像剂浓聚,不同时间下肝脏/前臂的比值均高于正常小鼠。HE染色及Hoechst33258染色提示凋亡组有大量肝细胞凋亡。结论研究制备的凋亡显像剂99mTc-HYNIC-Annexin V可以活体显示发生凋亡的肝脏,用于在体凋亡显像,有望成为一种有良好临床应用前景的凋亡显像剂。; 兰晓莉何勇沈艳霞孙逊张永学; 关键词：细胞凋亡放射性核素显像肝细胞小鼠

凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ对肿瘤模型化疗疗效早期评价的可行性被引量：3: 2008年; 目的评价凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评估的可行性。方法人膜联蛋向Ⅴ（annexinⅤ）通过双功能螯合剂联肼尼克酰胺（HYNIC）进行^99mTc标记。在正常昆明小鼠右上肢接种Ehrlich腹水癌细胞，至肿瘤生长至1cm后，随机分为生理盐水处理组和环磷酰胺处理组（150mg／kg），并分别于处理后1h和24h时注射^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ，注射后30、60、180、360min进行双探头单光子发射计算机断层仪（SPECT）显像。图像分析采用感兴趣区（R01）技术，计算右上肢肿瘤部位与右下肢计数比值（肿瘤／下肢）。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织凋亡细胞。结果在不同处理时间，生理盐水处理组的肿瘤部位仅有少量娃像剂分布。环磷酰胺处理组存处理1h后，肿瘤部位显像剂分布少量增加；24h后，肿瘤部位显像剂分布明显增加，显影清晰。环磷酰胺处胛24h组的肿瘤／下肢比值（6．27±0．24）明显高于牛理盐水24h处理组（2．36±0．18）和环磷酰胺1h处胛组（4．00±0．38）。环磷酰胺处理24h后，TUNEL染色可见大请癌细胞凋亡。结论^99mTc—HYNIC—aflnexin Ⅴ是一种可以早期监测化疗药物治疗效果的核素捌亡显像剂，在化疗药物应用24h后就可以进行有效探测，并在注射显像剂后60min即可获得清晰的图像。; 兰晓莉张永学何勇孙逊安锐高再荣曹国祥; 关键词：核素显像

~99TC^m-HYNIC-Annexin V的制备及其在健康小鼠体内的分布被引量：10: 2005年; 目的制备人膜联蛋白 V(Annexin V),应用联肼尼克酰胺(HYNIC)偶联后进行^(99)Tc^m 标记,评价^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 在健康小鼠体内的分布。方法采用基因工程方法构建 Annexin V 的原核载体并诱导其表达,与自行合成的双功能螯合剂 HYNIC 偶联,并进行^(99)Tc^m 标记。测定^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 的标记率、放化纯,并研究其在健康小鼠体内的生物分布特性。结果 Annexin V在大肠杆菌中获得稳定表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及 Western Blot-ting 检测,得到纯度较高的蛋白质。Annexin V 经 HYNIC 偶联后,其^(99)Tc^m 标记率可达90%左右,放化纯>90%。小鼠体内分布结果表明,^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 血液清除迅速,主要从肾脏和肝脏排泄。结论 Annexin V 可在原核生物中稳定表达。其与 HYNIC 偶联后,^(99)Tc^m 标记率和放化纯较高,方法简单,条件温和。; 兰晓莉张永学安锐高再荣曹国祥; 关键词：膜联蛋白V 同位素标记药代动力学小鼠

人膜联蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：2: 2005年; 目的:构建人膜联蛋白Ⅴ的原核载体并诱导其表达。方法:以IPTG诱导His融合人膜联蛋白Ⅴ的表达,并应用Ni-NTASuperflow纯化。结果:PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白Ⅴ基因编码序列一致。在IPTG诱导下,重组大肠杆菌DH5α高效表达分子量约36kDa的目的产物。结论:人膜联蛋白Ⅴ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a(+)上,并在大肠杆菌DH5α中表达。; 兰晓莉张永学; 关键词：膜联蛋白V 原核表达分子克隆

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国家教育部博士点基金(20030487013)

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