江苏省“135”工程重点医学人才基金(RC2007076)
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
- 相关作者：陈卫昌杨吉成王磊盛伟华谢宇峰更多>>
- 相关机构：苏州大学无锡市第三人民医院徐州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省“135”工程重点医学人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 环氧合酶-2特异性siRNA真核表达质粒对HT-29细胞生长的影响
- 2008年
- 目的探讨环氧合酶-2(COX-2)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒对人结肠癌HT-29细胞COX-2表达和生长的影响。方法设计短发夹结构的COX-2 siRNA对应模版DNA序列,构建重组质粒pshCOX-2。将重组质粒转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测COX-2表达。用四氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪观察COX-2表达被抑制后细胞的生长情况,放射免疫法(RIA)和ELISA法分别检测培养上清中PGE2和VEGF的含量变化。结果酶切及测序证实质粒pshCOX-2构建成功。转染重组质粒72h后可以显著抑制HT-29细胞COX-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05),细胞生长受抑,凋亡细胞数显著增加(P<0.05),细胞PGE2和VEGF的产生受抑制(P<0.05)。结论成功构建的COX-2 siRNA真核表达质粒pshCOX-2通过抑制人结肠癌HT-29细胞COX-2基因表达,从而抑制细胞生长、PGE2合成和VEGF的产生。
- 王磊陈卫昌杨吉成
- 关键词：环氧合酶-2SIRNARNA干扰真核表达质粒
- 表达抗血管内皮细胞生长因子核酶和白细胞介素24腺病毒载体的构建及其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用被引量：1
- 2009年
- 肿瘤的发生是一个多基因改变过程，因此，在肿瘤基因治疗过程中，以单一基因为靶点的治疗很难取得显著的抗肿瘤效果。我们构建了同时带有双基因抗血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）发夹状核酶（Rz）和白细胞介素24（interleukin-24，IL-24）的腺病毒载体，并初步观察了其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用。
- 常树建杨吉成陈卫昌谢宇峰盛伟华
- 关键词：血管内皮细胞生长因子白细胞介素24腺病毒载体HT-29细胞
- 表达抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体的构建及其对结肠癌生长的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 背景与目的:VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒,观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法:将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack-CMV多克隆位点,然后与病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中重组,在293a细胞中包装成完整病毒(命名为Ad-Rz)并复制扩增、纯化。RT-PCR检测病毒感染后抗-VEGF发夹状核酶在HT-29细胞中的表达、real-time PCR及ELISA检测其对VEGF mRNA及蛋白表达的抑制作用。观察Ad-Rz对HT-29细胞和裸鼠移植瘤生长的抑制作用,CD34标记检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:抗-VEGF发夹状核酶成功克隆至复制缺陷型腺病毒载体上。抗-VEGF发夹状核酶可在HT-29细胞中表达,Ad-Rz感染的HT-29细胞中VEGFmRNA的相对表达量大约为PBS组的45%(P<0.05)。ELISA结果显示Ad-Rz感染后的细胞上清液中蛋白含量(A值)为0.455±0.35/百万细胞,低于PBS组(P<0.05)。Ad-Rz对HT-29细胞的生长抑制无统计学意义(P>0.05),但可显著抑制肿瘤组织内血管的形成(P<0.05),Ad-Rz治疗的移植瘤增殖率低于PBS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腺病毒载体介导的抗-VEGF发夹状核酶可有效抑制HT-29细胞VEGF的表达及移植瘤组织内血管的生成。
- 常树建陈卫昌杨吉成谢宇峰盛伟华
- 关键词：腺病毒载体VEGF结肠肿瘤
- 大鼠骨髓树突状细胞的体外分离培养及生物学特性研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨体外分离培养大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法并对其生物学特性进行研究。方法应用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4诱导培养从大鼠管状骨中提取的骨髓细胞5 d后,将细胞分成脂多糖(LPS)刺激组和未刺激组(对照组),48 h后进行形态学观察,用流式细胞仪检测组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)和CD80的表达,用ELISA法测定培养上清中IL-6和IL-12的含量。结果培养的大鼠骨髓细胞具有树突状突起,具有DC的典型形态。培养7 d后,对照组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为57.3%和29.1%,LPS刺激组MHC-Ⅱ、CD80表型表达阳性率分别为70.9%和73.5%;LPS刺激组IL-6和IL-12含量高于未刺激组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了大鼠DC体外分离培养和诱导成熟的方法;在分化成熟过程中,DC在表型和细胞因子分泌功能上均发生了变化。
- 叶建新陈卫昌黄小平高楠
- 关键词：树突状细胞生物学特性
- 环氧化酶2特异性siRNA真核表达质粒的构建与鉴定
- 2008年
- 目的构建环氧化酶2(COX-2)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒,研究其对人结肠癌细胞COX-2的阻抑作用。方法设计短发夹结构的COX-2siRNA对应模版DNA序列,退火处理后克隆至pGPH1-GFP-Neo质粒,构建重组质粒pGPH1-GFP-Neo-COX-2。将重组质粒转染人结肠癌HT-29细胞,采用RT-PCR、Westernblot分别从mRNA和蛋白水平检测COX-2表达。结果酶切及测序证实质粒pGPH1-GFP-Neo-COX-2构建成功。转染重组质粒72h后可以显著抑制HT-29细胞COX-2mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论成功构建的COX-2siRNA真核表达质粒pGPH1-GFP-Neo-COX-2可以抑制人结肠癌HT-29细胞COX-2基因表达。
- 王磊陈卫昌杨吉成
- 关键词：环氧化酶2小干扰核糖核酸真核表达质粒结肠癌
- 雷公藤红素对结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及其作用机制被引量：10
- 2009年
- 目的探讨雷公藤红素(CSL)对人结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及可能的作用机制。方法采用不同浓度的CSL处理HCT-116细胞,MTT法检测细胞生长的抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期;透射电镜观察细胞凋亡形态变化;荧光底物法检测细胞蛋白酶体活性;Westernblot检测p27、Bax的表达变化。结果CSL明显抑制HCT-116细胞生长,呈现时间、剂量依赖性;流式细胞术显示CSL可阻止细胞周期于G0/G1期;电镜下观察部分细胞具有典型的凋亡细胞形态特征;CSL对HCT-116细胞糜蛋白酶活性具有明显的抑制作用,其效应呈现浓度依赖性;CSL干预后细胞内p27、Bax蛋白表达明显增加。结论CSL具有抑制结肠癌HCT-116细胞的生长、阻滞细胞周期、诱导凋亡的作用,其分子机制可能与其抑制细胞内蛋白酶体活性,导致p27、Bax蛋白降解受阻有关。
- 罗伟陈卫昌
- 关键词：雷公藤红素结肠癌蛋白酶体P27BAX
- 胃肠富集、肠道富集Krüppel样因子在人胃癌组织和细胞株中的表达
- 2010年
- 目的研究96例胃癌组织和胃癌细胞株(MKN-28、SGC-7901、BGC-823、HGC-27)中胃肠富集Krüppel样因子(Gut-enriched Krüppel-like factor,GKLF)、肠道富集Krüppel样因子(Intestinal-enriched Krüppel-like factor,IKLF)的表达及意义。方法荧光实时定量PCR法检测胃癌组织和胃癌细胞株中GKLFmRNA及IKLF mRNA的水平;分别采用免疫组织化学法和Western blot检测胃癌组织和细胞株中GKLF、IKLF蛋白的表达。结果胃癌组织中GKLF mRNA水平低于正常胃黏膜,IKLF mRNA水平高于正常胃黏膜(P均<0.0001),GKLF mRNA、IKLF mRNA的水平与胃癌分化程度无关。胃癌组织中GKLF蛋白阳性率显著低于正常胃黏膜,IKLF蛋白阳性率则显著高于正常胃黏膜(P均=0.001);GKLF、IKLF蛋白表达与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、Lauren分型无关,但与淋巴结是否有转移及pTNM分期相关(P=0.001)。胃癌细胞株中GKLF mRNA及蛋白水平低于人正常胃上皮细胞株GES-1,IKLF mRNA水平及蛋白则高于细胞株GES-1(P均<0.05)。结论 GKLF、IKLF可能参与了胃癌的发生、发展,检测GKLF、IKLF的表达有助于判断胃癌患者病情程度和预后。
- 严辉陈卫昌岑建农沈宏杰顾冬梅郭凌川
- 关键词：胃癌
- 环氧合酶-2小分子干扰RNA对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 目的研究环氧合酶-2(COX-2)小分子干扰RNA(siRNA)对COX-2高表达的人结肠癌细胞的增殖和凋亡的影响。方法筛选出最佳的靶向COX-2 siRNA转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果,四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Hoechst染色检测COX-2表达被抑制后细胞增殖和凋亡的情况。结果COX-2 siRNA能在mRNA和蛋白水平下调人结肠癌细胞株HT-29中COX-2基因的表达(P<0.05),以转染72 h时最显著。COX-2表达被抑制后,转染后72 h时HT-29细胞生长受到明显抑制(P<0.05),凋亡细胞显著增加。结论COX-2与结肠癌细胞的生长和凋亡密切相关,抑制结肠癌细胞中COX-2表达可抑制结肠癌细胞生长,促进结肠癌细胞凋亡。
- 王磊陈卫昌杨吉成
- 关键词：结肠癌RNA干扰小干扰RNA环氧合酶-2
- EGCG对结肠癌HT-29细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法应用RT-PCR法和Western blot法检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白表达。结果EGCG25、50、100μg/ml作用于结肠癌细胞株HT-2948h后,MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达量随着EGCG浓度的增加而下降,结果有统计学差异(P<0.05)。结论EGCG可显著抑制HT-29细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达,呈剂量依赖性。
- 张淳周萍陈卫昌俞宪民
- 关键词：结肠癌表没食子儿茶素没食子酸酯基质金属蛋白酶-9
- 环氧合酶-2干扰对人结肠癌裸鼠移植瘤生长及血管形成的影响被引量：1
- 2011年
- 环氧合酶（COX）是花生四烯酸代谢中环氧合酶途径的限速酶，其同工酶COX-2在结直肠癌中高表达，与肿瘤的生存、预后有关。前期体外实验发现利用RNA干扰（RNAi）对结肠癌细胞产生了独特的生物学效应。我们建立人结肠癌皮下荷瘤鼠模型，探讨其对肿瘤生长及血管生成的影响。
- 王磊陈卫昌杨吉成郭继中
- 关键词：环氧合酶-2人结肠癌移植瘤生长血管形成花生四烯酸代谢裸鼠
