国家自然科学基金(C140405)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞层高通透性中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的 研究线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液（PDS）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）通透性升高中的作用,探讨高糖PDS导致腹膜高通透状态的分子机制.方法 体外培养HPMC,用不同浓度葡萄糖PDS加或不加抗氧化剂谷胱甘肽,培养24 h.采用跨细胞电阻（TER）技术测定HPMC通透性的变化;免疫荧光及Western印迹观察claudin-1的表达;线粒体活性氧（ROS）荧光探针检测细胞线粒体ROS的生成;线粒体呼吸链酶复合物活性检测试剂盒检测复合物Ⅰ～Ⅳ的活性变化.结果 各组细胞的TER值均随时间的延长而下降,4.25%PDS组TER值24 h内从（34.7±1.5）Ω·cm2下降至（4.3±1.4）Ω·cm2;高糖PDS使细胞间连接蛋白claudin-1的表达显著下调,葡萄糖浓度越高作用越明显;同时高糖PDS导致线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ活性较对照组下降89.2%（P＜0.01）,进而使线粒体ROS产生增加.谷胱甘肽可逆转上述指标的变化.结论 高浓度葡萄糖PDS通过抑制线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ的活性,引起HPMC的氧化损伤,进而导致腹膜间皮细胞层的高通透性增高.
- 朱雪婧凌光辉肖力彭佑铭刘虹刘映红孙林刘伏友
- 关键词：腹膜透析细胞膜通透性腹膜间皮细胞线粒体呼吸链
- 人肾脏系膜细胞内mRNA稳定因子HuR蛋白对细胞周期蛋白cyclinD1转录后表达的调节被引量：1
- 2012年
- 目的观察人肾脏系膜细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下mRNA稳定因子人类抗原R(HuR)蛋白对细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的作用。方法体外培养人肾脏系膜细胞,根据AngⅡ对其的刺激时间即0、3、6、9、24 h分别记为0A、3A、6A、9A、24A组。应用流式细胞仪检测0A组与24A组细胞周期;免疫细胞化学方法观察各组HuR蛋白的亚细胞定位变化;Western blot方法检测各组全细胞与胞质内HuR蛋白及全细胞cyclinD1表达水平;RT-PCR方法检测各组cyclinD1的RNA水平。干扰RNA方法观察抑制HuR蛋白表达后AngⅡ刺激下对全细胞cyclinD1表达的保护效应。结果与0A组比较,24A组细胞增殖趋势明显;HuR蛋白亚细胞定位从胞核转移到胞质,其中3A组变化最显著;全细胞HuR蛋白表达水平不变,胞质内HuR蛋白表达增强,其中3A组最显著(P<0.05);cyclinD1蛋白表达增强,其中24A组最显著(P<0.05),而RNA水平保持不变(P>0.05)。与转染前相比,干扰RNA转染后3A组胞质HuR蛋白表达明显减弱(P<0.05);24A组cyclinD1蛋白表达明显减弱(P<0.05),而RNA水平不变(P>0.05)。结论①AngⅡ可刺激人肾小球系膜细胞增殖;②AngⅡ刺激下人肾脏系膜细胞核内HuR蛋白向胞质内转移;③HuR蛋白参与AngⅡ刺激下cyclinD1蛋白表达过程。
- 张瑞雨吕智美刘毅张鹏举完强王荣
- 关键词：CYCLIND1蛋白干扰RNA
