国家自然科学基金(81202230)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 围产期双酚A暴露对子代海马组织APP、Tau表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:观察F0代孕鼠围产期不同时期双酚A(bisphenol A,BPA)暴露对子代小鼠海马中淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein,APP)、微管相关蛋白(microtubule-associated protein,Tau)、磷酸化的Tau蛋白(p-Tau)的影响,探讨雌雄小鼠胎儿发育阶段BPA暴露的敏感期。方法:利用C57BL/6J胎鼠原代培养的海马神经元共孵BPA;F0代小鼠围产期皮下注射建立BPA暴露小鼠模型,根据不同暴露期分为4组,即对照组、胎儿期(P6-PND0)、哺乳期(PND0-PND21)、胎儿期和哺乳期联合暴露(P6-PND21),取其成年子代海马组织(8月龄)通过Western blot方法检测APP、Tau及p-Tau的表达量。结果:海马神经元细胞与不同浓度BPA共孵后,APP、Tau及p-Tau的表达均上调,呈剂量依赖性。BPA连续暴露后的子代小鼠中,雌性小鼠PND0-PND21组、P6-PND21组海马组织中APP、Tau及p-Tau表达增加,而雄性小鼠仅P6-PND21组3种蛋白的表达上调。结论:围产期BPA连续暴露可引起子代小鼠海马APP、Tau及p-Tau表达改变,从而可能引起神经损伤,而雌性小鼠相较于雄性小鼠可能对BPA引起的神经损伤更敏感。
- 周景朱庆刘景丽钱文溢高蓉王军肖杭
- 关键词：双酚A淀粉样蛋白前体微管相关蛋白
- 脑胰岛素信号在阿尔兹海默症模型小鼠渐进过程中的改变被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)形成过程中脑胰岛素信号及葡萄糖转运体(glucose transporters,GLUTs)表达的改变,为AD早期诊断提供依据。方法:借助APP/PS1转基因AD模型小鼠,运用Western blot检测该模型鼠皮层和海马区域胰岛素信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,AD模型鼠在3月龄时,表现为脑胰岛素信号应激性激活,下游AKT/GSK3β等胰岛素信号分子磷酸化水平升高,而GLUTs此时表达变化不明显;5月龄时,该模型表现为脑胰岛素信号磷酸化水平显著下降,其下游AKT/GSK3β等信号分子磷酸化水平表达下调,同时观察到海马中GLUT3、GLUT4表达下调,AD病理性蛋白(APP)、Tau蛋白磷酸化水平显著增加。结论:胰岛素信号紊乱和葡萄糖转运体在AD形成过程中发生紊乱,且随年龄增长,具有紊乱加剧的趋势。
- 余鹏飞吕梦倩陈冬龙王宇王军高蓉肖杭
- 关键词：AD模型鼠胰岛素信号阿尔兹海默症淀粉样前体蛋白TAU
- 甲基苯丙胺对大鼠小胶质细胞损伤作用
- 2013年
- 目的观察甲基苯丙胺(Meth)通过电压门控钾离子通道亚型1.3、1.5(Kv1.3、Kv1.5)对大鼠胎鼠小胶质细胞的损伤作用。方法 SD胎鼠原代培养小胶质细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法观察Kv1.3、Kv1.5表达变化。结果 Meth呈浓度依赖性降低小胶质细胞活力,增加小胶质细胞凋亡;Kv1.3的抑制剂MgTx对Meth所致小胶质细胞损伤有部分保护作用;与对照组(1.047±0.165)比较,300μmol/L Meth组小胶质细胞Kv1.3 mRNA表达(7.453±0.675)增高(P<0.05),MgTx组Kv1.3 mRNA表达(1.684±0.875)低于Meth 300μmol/L组(P<0.05);Meth对Kv1.5 mRNA表达无影响。结论 Meth可引起小胶质细胞损伤,其机制可能与Kv1.3表达变化有关。
- 赵晶晶钱文溢刘景丽周景高蓉王军肖杭
- 关键词：小胶质细胞原代培养钾通道
- 甲基苯丙胺急性暴露对小鼠神经元的损伤作用研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨甲基苯丙胺（METH）急性暴露后引起神经元的损伤作用。方法甲基苯丙胺给与小鼠后，对小鼠的刻板行为进行评分，通过Y水迷宫的方法评估小鼠空间记忆能力。分子水平，试剂盒法检测皮层区诱导型NO释放水平，利用Western-blot法观察神经元凋亡标志性蛋白Bax、Bcl2及Caspase3表达水平。在细胞水平，利用彗星实验，观察甲基苯丙胺对原代培养神经元DNA的损伤情况。利用JC-1探针观察甲基苯丙胺对神经元线粒体膜电位的改变。此外，通过Western-blot法，阐述MAPKs通路在METH引起神经元损伤中的潜在作用。结果METH显著增加小鼠的刻板行为，且明显降低小鼠空间识别能力。在分子层面，发现诱导型NO含量显著增高，相应凋亡蛋白Bax和cleavedcaspase-3的表达增高，神经元细胞膜电位的下降。进一步研究发现，MAPKs在METH处理后，通路激活，磷酸化水平显著增高。预孵p38MAPK抑制剂SB203580后，METH引起凋亡蛋白表达增高的趋势降低。结论METH可多途径引起神经元损伤，激活MAPKs通路，而p38-MAPK可能参与了METH引起的神经元的损伤。
- 蒋雷钱文溢张劲松王军陈旭锋孙昊肖杭
- 关键词：甲基苯丙胺神经元损伤
- 甲基苯丙胺通过L型钙通道诱导Ca2+内流引起神经元损伤
- 目的通过观察甲基苯丙胺对皮层神经元胞内钙离子和钙相关蛋白的变化,探讨L型钙通道在甲基苯丙胺诱导神经元损伤中的作用。方法 CCK-8细胞计数试剂盒检测神经元活力的变化;彗星实验和Hoechst染色观察神经元DNA和细胞核的...
- 钱文溢朱晶颖王军肖杭
- 关键词：甲基苯丙胺神经元凋亡
- 文献传递
- 钾电流在甲基苯丙胺引起神经元损伤中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨甲基苯丙胺（Meth）对外向钾电流的影响及外向型钾通道在Meth引起的海马神经元损伤过程中的作用。方法以分离出的怀孕18dSprague—Dawley大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象，分为对照组和Meth处理组，采用全细胞膜片钳的实验方法，分别记录Meth处理后外向4-AP和TEA敏感型钾电流大小的变化。通过MTT和TUNEL的方法，观察Meth作用后引起的电流变化对海马神经元活力和凋亡的影响。统计分析利用单因素方差分析结合LSD-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与对照组（n=10）比较[（87．4±12．5）pA／pF]，Meth处理组（n=7）细胞外向4-AP敏感型钾电流密度明显增大[（120．1±19．6）pA／pF，P〈0．01]，且呈剂量依赖性。MTT结果表明，Meth明显降低细胞的活力（48．72±4．38）％，与对照组（100．07±3．36）％比较，差异具有统计学意义，而钾通道抑制剂4-AP（61．39±3．15）％以及胞外高浓度K^＋溶液（78．25±9．42）％，能有效抑制Meth引起的细胞损伤。TUNEL实验进一步表明，Meth能引起海马神经元的凋亡，而4-AP和胞外高浓度K^＋溶液对Meth引起的细胞凋亡具有保护作用。结论Meth引起外向4-AP敏感型钾电流增大，进而可能导致海马神经元的损伤。
- 蒋雷王军高蓉肖杭张劲松
- 关键词：甲基苯丙胺
- TEA敏感型钾电流在gp120引起的海马神经元损伤中的作用
- 2015年
- 目的:探讨gp120对TEA敏感型钾电流的作用以及该电流在gp120引起神经元损伤中的作用。方法 :分离怀孕18d SD大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象,分为对照组和gp120处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向延迟钾电流的变化,通过MTT和TUNEL的方法分别观察gp120处理后神经元的活力和凋亡情况。Western blot观察Kv2.1钾通道的蛋白表达变化以及在TEA敏感型钾电流中的贡献度。结果:gp120能引起外向钾电流明显增大,具有浓度依赖性,其中TEA敏感型成分参与了外向钾电流的增大。此外,MTT和TUNEL实验发现,gp120能引起神经元活力的下降和凋亡,而钾通道抑制剂TEA能缓解由gp120引起的细胞损伤。进一步实验表明,gp120可上调TEA敏感型成分中Kv2.1钾通道的表达,且其特异性抑制剂Gx TX-1E能显著抑制神经元中TEA敏感型钾电流成分。结论:TEA敏感型钾电流参与了gp120引起的神经元损伤过程,其重要组成成分Kv2.1通道蛋白上调,提示该通道蛋白可能参与了gp120引起的细胞损伤。
- 余鹏飞蒋雷钱文溢周景王易欣肖杭王军
- 关键词：GP120海马神经元
- 甲基苯丙胺诱导心肌细胞自噬作用的发生
- 2019年
- 目的探讨甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)引起心肌细胞发生自噬现象的过程。方法体内实验:将60只约6周龄的雄性C57Bl/6J小鼠随机(随机数字法)分为3组(对照组、3 d染毒组、7 d染毒组),每组20只,建立METH染毒模型。染毒组小鼠给予腹腔注射单次剂量15 mg/kg METH,2次/d,分别染毒3 d或7 d。对照组小鼠相同时间点给予腹腔注射0.9%的生理盐水共7 d。最后一次腹腔注射24 h后收获小鼠心脏。Western blot法检测心肌自噬相关蛋白的表达。体外实验:心肌细胞系(H9C2)分为两组,对照组(正常培养基),METH组(用900 mmol/mL的培养基干预24 h)。Western blot、免疫荧光检测细胞中自噬相关蛋白表达;透射电子显微镜观察细胞内自噬现象。结果在体内实验和体外实验中,甲基苯丙胺干预后,心脏自噬相关蛋白p62,Beclin-1和LC3表达量与对照组相比均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);激光共聚焦检测免疫荧光结果示,METH组心肌细胞LC3-Ⅱ较对照组明显增多;电镜结果显示,与对照组相比,METH组细胞的自噬体数量明显增多。结论甲基苯丙胺可激活心肌细胞的自噬程序。
- 赵超王军孙昊蒋雷张劲松
- 关键词：甲基苯丙胺自噬C57BL/6J小鼠
