浙江省自然科学基金(Y2080973)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：温州医科大学延边大学更多>>
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- 快速诊断早期棘阿米巴角膜炎qPCR方法的建立及应用被引量：3
- 2014年
- 目的建立检测棘阿米巴18srDNA的TaqMan探针实时荧光定量PCR(Real-time PCR or qPCR)方法,为无创早期诊断棘阿米巴病提供基因诊断标准方法。方法提取分离自土壤和水中的5株棘阿米巴DNA,测序后与GenBank中搜索到的棘阿米巴67条序列进行比对,在物种保守区域设计Real-time引物和TaqMan探针,通过T克隆载体制作标准品并测序,建立方法的标准曲线,测定最低检测浓度,同时用该方法检测其他病原微生物及临床疑似棘阿米巴角膜炎病人眼分泌物,实验数据通过JMP5.0.1和测评软件进行棘阿米巴角膜炎F检验和诊断测试评估。结果qPCR和培养法检测180例疑似棘阿米巴角膜炎病人眼分泌物,阳性率分别为(5±1)%和(2.9±1.2)%,差异有统计学意义(F=13,P<0.01)。以qPCR法测定的标准品CT值为纵坐标(Y),以标本浓度的对数为横坐标(X)建立标准曲线:Y=-3.24X+40.74,R>0.99。用建立的qPCR方法测定棘阿米巴18srDNA最低浓度为10拷贝/UL。用qPCR检测其他病原微生物,结果均为阴性。通过诊断测试评估软件比较两种方法检测临床疑似病人眼分泌物结果,95%置信区间内qPCR方法的灵敏度为100%,传统实验室培养法为62.5%。结论棘阿米巴18srDNA Real-time PCR基因检测方法具有无创伤性、高效、特异、经济等特点,适用于疑似棘阿米巴角膜炎病人的筛查。
- 秦茜郑美琴汪盈梁韶辉诸葛青云
- 关键词：棘阿米巴TAQMAN探针RDNA
- Real-Time PCR检测棘阿米巴方法建立及应用被引量：1
- 2014年
- 目的采用TaqMan探针法建立检测棘阿米巴18srDNA的实时荧光定量PCR（Real—timePCR）方法，为早期诊断棘阿米巴病提供基因诊断标准方法。方法提取实验室培养的4株土壤中分离的和1株水中分离的不同基因型棘阿米巴DNA，测序后在物种保守区域设计Real—time引物和TaqMan探针，用建立的方法检测动物模型兔眼分泌物、大肠杆菌、人巨细胞病毒、卡式肺孢子虫、疑似棘阿米巴角膜炎160例病人眼分泌物。结果与传统实验室培养病原相比，所建立的qPCR检测棘阿米巴角膜炎方法测定大肠杆菌、人巨细胞病毒和卡式肺孢子虫与该研究的实验室分离棘阿米巴物种没有交叉反应，检测结果均为阴性。而160例疑似病人，用培养法检测出感染棘阿米巴患者为5例，用qPCR方法检测出6例，其中5例为培养法测出患者，qPCR方法检测阳性率（3．75％）略高于普通培养法（3．13％），但无统计学意义（P〉O．05）。qPCR方法在95％置信区间中灵敏度100％（47．95％～100％）高于普通培养法83．33％（36．10％～97．24％）。结论所建立测定棘阿米巴18srDNA的Real-timePCR基因检测方法具有无创伤性、高效、特异、经济等特点，适用于疑似棘阿米巴角膜炎病人门诊筛选的有效方法。
- 秦茜谷禾梁韶晖韩真真郑善子
- 关键词：棘阿米巴TAQMAN探针RDNAREAL-TIMEPCR
