国家科技重大专项(2011ZX08005-004-002)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：冯娟范昕琦徐鹏沈新莲张香桂更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 棉属野生种旱地棉苏氨酸醛缩酶基因GarTHA的克隆及功能验证被引量：2
- 2013年
- 盐胁迫是影响作物生长和发育的重要因素之一。一些棉属野生种具有较好的耐盐性,是开展棉花耐盐性机制研究以及改良陆地棉耐盐性的重要资源。本研究基于cDNA-AFLP技术分离获得的旱地棉(Gossypium aridum)盐胁迫下差异表达片段序列信息,经电子克隆技术和RT-PCR方法克隆了旱地棉苏氨酸醛缩酶基因cDNA全长,命名为GarTHA(GenBank登录号为KC167360)。该cDNA全长为1018 bp,包含一个822 bp的完整ORF,编码273个氨基酸残基,蛋白质分子量为82.57 kD,等电点为4.89。GarTHA基因与杨树PtTHA基因同源性最高,为84.6%。为进一步验证其功能,利用拟南芥逆境胁迫启动子rd29A构建植物表达载体,将GarTHA基因的完整ORF转入拟南芥中,获得转基因植株并进行了耐盐性鉴定。结果表明,在盐胁迫下转基因拟南芥种子的发芽率明显高于野生型,且转基因植株的根长显著高于野生型。说明GarTHA基因可能参与植物的盐胁迫反应,从而提高植物抗逆性。
- 范昕琦刘章伟冯娟徐鹏张香桂沈新莲
- 关键词：旱地棉耐盐性结构特征功能分析
- 棉属野生种旱地棉蛋白激酶基因GarCIPK8的克隆与功能分析被引量：5
- 2013年
- CIPK(calcineurin B-like calcium sensor interacting protein kinase)是植物钙感受器钙调磷酸酶B类似蛋白特定靶向的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在前期的研究中,我们将棉属野生种D亚组旱地棉(Gossypium aridum)盐胁迫前后RNA混合样品进行转录组测序,发现一CIPK相关基因存在较高的转录丰度。盐胁迫下荧光定量PCR分析表明该基因在根部表现诱导上调表达,推测该基因可能参与植物在高盐胁迫下的生理调控。利用电子克隆及RT-PCR方法从旱地棉中克隆了一个ORF全长为1350bp的蛋白激酶基因GarCIPK8。序列分析表明该基因编码的蛋白含有449个氨基酸,分子量为51.12kD,理论等电点为8.13,其N端催化结构域包含一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶域,C端具有植物CIPK蛋白家族特有的24个氨基酸组成的NAF保守结构域;与水稻OsCIPK8蛋白的相似度为73.95%。为进一步验证其功能,利用组成型高效强启动子CaMV35S和拟南芥逆境胁迫启动子rd29A构建植物表达载体并转化烟草,经PCR和RT-PCR分子检测,证明GarCIPK8基因已经整合到烟草基因组中,并正常表达。T1代转基因植株耐盐性鉴定结果表明GarCIPK8基因对提高转基因植株的耐盐性有较明显的作用,PEG干旱模拟试验也证明GarCIPK8基因可增强植株的抗旱性。
- 冯娟范昕琦徐鹏张香桂沈新莲
- 关键词：旱地棉耐盐性耐旱性
